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1. Auflage 2005
© 2005 by Verlag: Deutsche Veterinärmedizinische Gesellschaft Service GmbH, Gießen Printed in Germany
ISBN 3-938026-49-9
Verlag: DVG Service GmbH Frankfurter Straße 89
35392 Gießen 0641/24466
Aus dem Deutschen Primatenzentrum Göttingen _____________________________________________________
Pathogenetische Untersuchungen zum Wasting Marmoset Syndrom bei Weißbüschelaffen
(Callithrix jacchus)
I N A U G U R A L - D I S S E R T A T I O N
zur Erlangung des Grades einer
DOKTORIN DER VETERINÄRMEDIZIN
(Dr. med. vet.)
durch die Tierärztliche Hochschule Hannover
Vorgelegt von
Martina Zöller aus Duisburg
Hannover 2005
Wissenschaftliche Betreuung: Univ. Prof. Dr. F.- J. Kaup 1. Gutachter: Univ. Prof. Dr. F.- J. Kaup 2. Gutachter: Apl. Prof. Dr. M. Böer Tag der mündlichen Prüfung: 24.11.2005
Meiner Familie
Inhaltsverzeichnis
1 EINLEITUNG..................................................................................................... 11
2 LITERATURÜBERSICHT.................................................................................. 13
2.1 DER WEIßBÜSCHELAFFE (CALLITHRIX JACCHUS) ................................................. 13
2.2 DAS WASTING MARMOSET SYNDROM (WMS) .................................................... 15
2.2.1 Klinische Veränderungen........................................................................ 16
2.2.2 Pathologie............................................................................................... 20
2.2.3 Ätiologie.................................................................................................. 25
2.2.4 Therapie ................................................................................................. 29
2.3 CHRONISCHE KOLITIDEN BEI KRALLENAFFEN ...................................................... 32
3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN ........................................................................ 36
3.1 MATERIAL UND METHODEN ............................................................................... 36
3.1.1 Tiere ....................................................................................................... 36
3.1.2 Tierärztliche Bestandsbetreuung ............................................................ 40
3.1.3 Postmortale Untersuchung und Gewinnung von Probenmaterial ........... 42
3.1.4 Präparation für die lichtmikroskopische Untersuchung ........................... 42
3.1.5 Befunderhebung und Dokumentation ..................................................... 43
3.1.6 Immunhistochemische Untersuchungen................................................. 47
3.1.7 Blutuntersuchung.................................................................................... 48
3.1.8 Urinuntersuchung ................................................................................... 49
3.1.9 Mikrobiologische und parasitologische Untersuchung ............................ 49
3.1.10 Stammbaumanalysen ............................................................................. 51
3.2 ERGEBNISSE.................................................................................................... 52
3.2.1 Allgemeine Daten und klinische Verlaufsuntersuchungen ...................... 52
3.2.2 Pathologisch-anatomische Untersuchungen .......................................... 58
3.2.3 Lichtmikroskopische Untersuchungen .................................................... 61
3.2.3.1 Pathohistologie der Darmproben ....................................................... 61
3.2.3.2 Immunhistochemische Untersuchungen der Darmproben................. 79
3.2.3.3 Pathohistologie der übrigen Organe .................................................. 86
3.2.4 Blutuntersuchungen................................................................................ 97
3.2.4.1 Hämatologische Untersuchungen...................................................... 97
3.2.4.2 Serologische Untersuchungen........................................................... 98
3.2.5 Urinuntersuchungen ............................................................................... 99
3.2.6 Mikrobiologische und parasitologische Untersuchungen ........................ 99
3.2.7 Stammbaumanalysen ........................................................................... 102
4 DISKUSSION .................................................................................................. 103
4.1 KLINISCHE ASPEKTE ....................................................................................... 103
4.2 PATHOMORPHOLOGIE DES INTESTINALTRAKTES ................................................ 111
4.3 PATHOMORPHOLOGIE DES ORGANSPEKTRUMS ................................................. 115
4.4 ÄTIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN.................................................................. 122
4.5 ÜBERLEGUNGEN ZUR PATHOGENESE ............................................................... 124
4.6 VERGLEICH DER BEIDEN LABORTIERHALTUNGEN ............................................... 127
4.7 DEFINITION FÜR DAS WASTING MARMOSET SYNDROM....................................... 128
5 ZUSAMMENFASSUNG................................................................................... 131
6 SUMMARY ...................................................................................................... 134
7 LITERATURVERZEICHNIS ............................................................................ 136
8 ANHANG......................................................................................................... 145
8.1 PROTOKOLLE FÜR DIE HISTOLOGIE .................................................................. 145
8.1.1 Hypercenter XP-Protokoll ..................................................................... 145
8.1.2 Fixierlösungen ...................................................................................... 145
8.1.3 Phosphatpuffer ..................................................................................... 145
8.1.4 Hämalaun&Eosin-Färbung ................................................................... 146
8.1.5 Berliner-Blau-Reaktion (Eisennachweis nach Perls)............................. 147
8.1.6 Periodic-Acid-Schiff-Reaktion (PAS)..................................................... 148
8.1.7 Giemsa-Färbung................................................................................... 149
8.1.8 Von Kossa-Färbung (Kalknachweis)..................................................... 149
8.2 PROTOKOLLE FÜR DIE MIKROBIOLOGIE............................................................. 151
8.2.1 Blutagar-Platte ...................................................................................... 151
8.2.2 MacConkey-Agar .................................................................................. 151
8.2.3 Salmonellen-Platte................................................................................ 151
8.2.4 Campylobacter-Platte ........................................................................... 151
8.2.5 Salmonellen-Anreicherungsbouillon ..................................................... 152
8.2.6 Herstellung mikroaerophiler Bedingungen............................................ 152
8.3 PROTOKOLLE FÜR DIE PARASITOLOGIE............................................................. 152
8.3.1 Lugolsche Lösung................................................................................. 152
8.3.2 Modifizierte Ziehl-Neelsen-Färbung (Kinyoun-Färbung) ....................... 152
8.3.3 Methylenblaufärbung ............................................................................ 153
8.4 PROTOKOLLE UND LÖSUNGEN FÜR DIE IMMUNHISTOCHEMIE............................... 154
8.4.1 Zitratpuffer ............................................................................................ 154
8.4.2 Versuchsprotokoll CD3, CD 20 und MAC ............................................. 154
8.5 GÖTTINGER MISCHUNG II................................................................................ 156
8.6 ANHANGSTABELLEN........................................................................................ 157
8.7 STAMMBÄUME................................................................................................. 161
Abkürzungsverzeichnis Abb. Abbildung
ALT Alanin-Amino-Transferase (=GPT)
AP alkalische Phosphatase
Aqua bidest. doppelt destilliertes Wasser
Aqua dest. destilliertes Wasser
AST Serumaspartat-Amino-Transferase (=GOT)
BALT bronchus associated lymphoid tissue
BUN blood urea nitrogen (Harnstoff im Blut)
bzw. beziehungsweise
° C Grad Celsius
ca. circa
Ca-EDTA Kalzium-Ethylendiamintetraazetat
CD Crohn´s disease (Morbus Crohn)
CK Kreatinkinase
cm Zentimeter
CWD Chronic Wasting Disease
DAB Diaminobenzidin
d. h. das heißt
Diagr. Diagramm
dl Deziliter
DPZ Deutsches Primatenzentrum
E. coli Escherichia coli
ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
et al. und Mitarbeiter
evtl. eventuell
Fa. Firma
g Gramm
GALT gut associated lymphoid tissue (Darmschleimhautimmunsystem)
ggr. geringgradig
h Stunde
H2O2 Wasserstoffperoxid
ha Hektar
H.&E. Hämatoxilin-Eosin
hgr. hochgradig
IBD inflammatory bowel disease
i. m. intramuskulär
Ig Immunglobulin
kg Kilogramm
KGW Körpergewicht
l Liter
L. Lamina
LDH Laktatdehydrogenase
M molar
MBD metabolic bone disease (metabolische Knochenkrankheit)
MCH mean corpuscular hemoglobin (mittlere Hämoglobingehalt des
einzelnen Erythrozyten)
MCV mean corpuscular volume (mittleres Volumen des einzelnen
Erythrozyten)
MCHC mean corpuscular hemoglobin concentration (mittlere
korpuskuläre Hämoglobinkonzentration)
mg Milligramm
mgr. mittelgradig
min Minute
ml Milliliter
NaCl Natriumchlorid
PBS phosphate buffered saline (Phosphatpuffer)
PCV-2 porzines Circovirus Typ 2
PrPCWD CWD-spezifisches Protease-resistentes Prionprotein
s Sekunde
SABC Streptavidin-Biotin-Komplex
sp. Spezies
Tab. Tabelle
u. a. unter anderem
UC ulcerative colitis (ulzerative Kolitis)
v. a. vor allem
WMS Wasting Marmoset Syndrom
z. B. zum Beispiel
Einleitung 11
1 Einleitung
Das Wasting Marmoset Syndrom (WMS) stellt ein bislang ungeklärtes Krankheitsbild
bei verschiedenen Krallenaffenspezies in Gefangenschaftshaltung dar und führt
aufgrund einer hohen Morbiditäts- und Mortalitätsrate zu erheblichen Problemen in
Zoo- und Labortierhaltungen (KING 1976; IALEGGIO u. BAKER 1995). Unter den
Callitrichiden sind insbesondere die im ostbrasilianischen Regenwald beheimateten
Weißbüschelaffen (Callithrix jacchus) von der Erkrankung betroffen. Da
Weißbüschelaffen aufgrund ihrer hohen Anpassungsfähigkeit an die Bedingungen in
Gefangenschaftshaltung und ihrer relativ hohen Reproduktionsrate in menschlicher
Obhut als biomedizinische Modelle in verschiedenen Forschungsbereichen dienen,
sind detaillierte Kenntnisse über das Krankheitsspektrum dieser Tiere unerlässlich.
Bei dem Wasting Marmoset Syndrom handelt es sich um eine pathogenetisch und
ätiologisch unklare Erkrankung, die durch ein heterogenes Krankheitsbild mit
variabler klinischer Manifestation gekennzeichnet ist. Als klinisches Leitsymptom wird
ein progressiver Gewichtsverlust bei erhaltener Futteraufnahme angesehen, der mit
einer fortschreitenden Verschlechterung des Allgemeinzustandes einher geht
(POTKAY 1992; SAINSBURY et al. 1992; LOGAN u. KHAN 1996). Weitere klinische
Symptome und pathomorphologische Merkmale des WMS umfassen chronische
Diarrhoe, Alopezie, Muskelatrophie, chronische Kolitis sowie Leber- und
Nierenalterationen. Obwohl es hinsichtlich der Entstehung und Entwicklung des
WMS keine gesichterten Erkenntnisse gibt, deuten neuere Untersuchungen auf eine
zentrale Rolle entzündlicher Darmveränderungen in der Pathogenese des WMS hin
(QUOHS 2003; BONGARD 2005).
Der Schwerpunkt der vorliegenden Arbeit liegt in umfangreichen pathohistologischen
und immunhistochemischen Untersuchungen des Intestinaltraktes, die bei insgesamt
23 Weißbüschelaffen mit klinischer WMS - Symptomatik durchgeführt werden.
Darüber hinaus werden klinische Verlaufsuntersuchungen, pathomorphologische
Untersuchungen der übrigen Organsysteme und diverse ätiologische
12 Einleitung
Untersuchungen durchgeführt mit dem Ziel, das Krankheitsbild des WMS einheitlich
zu definieren, pathogenetische Zusammenhänge zu erfassen und Hinweise auf
mögliche kausale Faktoren zu erhalten.
Literaturübersicht 13
2 Literaturübersicht
2.1 Der Weißbüschelaffe (Callithrix jacchus) Weißbüschelaffen (Callithrix jacchus) sind Neuweltaffen (Platyrrihini). Sie gehören zu
der Familie der Krallenaffen (Callitrichidae) und werden der Gattung Callithrix
zugeordnet. Die Familie der Krallenaffen umfasst insgesamt 4 Gattungen: Cebuella,
Callithrix, Saguinus und Leontopithecus. Aufgrund von Unterschieden in der
Zahnmorphologie wird eine weitere Einteilung der Gattungen in Tamarine (Saguinus
und Leontopithecus) und Marmosetten (Cebuella und Callithrix) vorgenommen
(GEISSMANN 2003). Während bei den Marmosetten die Schneidezähne des
Unterkiefers ebenso lang sind wie die benachbarten Eckzähne (“short-tusked“), sind
bei den Tamarinen die unteren Eckzähne deutlich länger als die Schneidezähne
(“long-tusked“) (NOWAK 1999). Bezüglich der Zuordnung weiterer Arten und
Unterarten zu der Gattung Callithrix existieren in der Literatur keine einheitlich
Angaben, da sich die Zahl der Taxa aufgrund von Neuentdeckungen und geänderten
taxonomischen Kriterien fortwährend ändert.
Krallenaffen weisen eine Reihe von charakteristischen Merkmalen auf, die sie
deutlich von anderen Neuweltaffen unterscheiden (FORD 1980). Neben ihrer
geringen Körpergröße fällt auf, dass an allen Fingern und Zehen mit Ausnahme des
Hallux krallenförmig verlängerte Nägel ausgebildet sind. Die Großzehe hingegen
trägt den für Primaten typischen Plattnagel (WOLTERS u. IMMELMANN 1988). Das
Gebiss von Krallenaffen ist durch das Fehlen der dritten Molaren in Ober- und
Unterkiefer sowie durch die Dreihöckrigkeit der oberen, ersten Molaren
gekennzeichnet. Besonderes reproduktionsbiologisches Kennzeichen der
Callitrichiden ist das Auftreten von Zwillingsgeburten als Regelfall. Bei den dizygoten
Zwillingen von Marmosetten werden als Folge einer fusionierten Chorionmembran
plazentäre Gefäßanastomosen ausgebildet, so dass die Feten sich ein Paar
diskoider Plazenten teilen und einen gemeinsamen Plazentarkreislauf haben. Durch
den gegenseitigen Zellaustausch werden die Zwillinge als Blut- und
14 Literaturübersicht
Stammzellchimären geboren und weisen identische genetische Fingerabdrücke auf.
(GEISSMANN 2003, HEARN 1983).
Weißbüschelaffen (Callithrix jacchus) sind baumbewohnende Primaten, die in den
subtropischen und tropischen Regenwäldern Ostbrasiliens beheimatet sind. Mit einer
Körperlänge von ca. 16 bis 21 cm (ROWE 1996) und einem Normalgewicht von 300
bis 350 g (RICHTER 1984) zählen sie zu den kleinsten simischen Primaten. Sie sind
tagaktiv und leben in erweiterten Familienverbänden oder kleinen, relativ stabilen
Gruppen mit bis zu 15 Tieren (ROWE 1996). Weißbüschelaffen zeigen eine äußerst
flexible Sozialstruktur. Es sind je nach Gruppe monogame, polygyne oder
polyandrische Paarungssysteme zu beobachten (DIGBY 1994). Der ovarielle Zyklus
der weiblichen Tiere dauert 28 Tage; wie bei den meisten Neuweltaffen findet keine
Menstruation statt. Nach einer Tragezeit von ca. 148 Tagen treten Geburten mit
Wurfgrößen von ein bis drei Jungtieren (meist dizygote Zwillinge) vorwiegend von
März bis April und von Oktober bis November auf. Der Nachwuchs wird kooperativ
innerhalb der Familie bzw. Gruppe aufgezogen (NOWAK 1999). Eine Besonderheit
im Reproduktionsverhalten von Weißbüschelaffen ist die Unterdrückung der
Fortpflanzung bei rangtiefen Weibchen. In jeder Gruppe züchtet ausschließlich das
ranghöchste Weibchen, während bei den anderen weiblichen Tieren aufgrund von
Störungen des Zyklus keine Ovulation stattfindet. Der Ovulationsblock beruht auf
einer verminderten Sekretion des Gonadotropin-Releasing-Hormons aus dem
Hypothalamus. Als inhibierende Faktoren werden sowohl Pheromone als auch
einschüchternde Verhaltensweisen des dominanten Weibchens diskutiert (ABBOTT
et al. 1993).
Das Nahrungsspektrum von Weißbüschelaffen umfasst neben Früchten und
tierischen Komponenten (Insekten, Spinnen, kleine Wirbeltiere, Vogeleier)
hauptsächlich Baumsäfte. Die Exsudate von Gummi- und Kautschukbäumen
versorgen die Krallenaffen mit hochwertigen Kohlenhydraten und wichtigen
Mineralstoffen (ROWE 1996). In Anpassung an die Exsudativorie befindet sich auf
der Außenseite der Schneidezähne des Unterkiefers eine kantenartige Erhöhung des
Literaturübersicht 15
Zahnschmelzes. Diese besondere Zahnstruktur ermöglicht das Benagen der
Baumrinde, wodurch der Fluss von pflanzlichen Exsudaten stimuliert wird (RYLANDS
u. DE FARIA 1993). Die Größe der Streifgebiete von Weißbüschelaffen wird primär
von dem Angebot an exsudatproduzierenden Bäumen bestimmt und schwankt
zwischen 0,5 und 28 ha (NOWAK 1999).
Weißbüschelaffen werden aufgrund ihrer hohen Anpassungsfähigkeit an die
Bedingungen in Gefangenschaftshaltung und ihrer relativ hohen Reproduktionsrate
in menschlicher Obhut als biomedizinische Modelle in verschiedenen
Forschungsbereichen eingesetzt. Hinsichtlich der Haltung und des Managements
und der biologischen und physiologischen Grundlagen liegen umfangreiche Daten
aus zahlreichen wissenschaftlichen Untersuchungen zu dieser Spezies vor
(RICHTER 1984). Weißbüschelaffen werden eingesetzt für Untersuchungen zur
Onkogenese bei Virusinfektionen, zum Studium infektiöser Hepatitisformen und
anderer viraler Erkrankungen. Für immunologische Fragestellungen sind sie
aufgrund des Chimärismus ein bevorzugtes Tiermodell (HERNANDEZ u. GARCIA
2001). Weitere Forschungsgebiete, in denen Weißbüschelaffen eingesetzt werden,
sind Krebsforschung und Teratologie, Dentalerkrankungen, Neuroendokrinologie,
Verhaltensforschung und Ethologie, Infektionskrankheiten, Hämatologie, Physiologie
und Reproduktion, Toxikologie und Ernährungs- und Metabolismusforschung
(RICHTER 1984).
2.2 Das Wasting Marmoset Syndrom (WMS)
Das Wasting Marmoset Syndrom (WMS) ist eine Erkrankung, die bei in
Gefangenschaft gehaltenen Affen der Spezies Callithrix jacchus auftritt und in
Versuchstiereinrichtungen und zoologischen Gärten ein ungeklärtes Problem
darstellt. Seit der ersten Beschreibung durch KING (1976) im Zoo von Jersey liegen
zahlreiche Berichte über dieses uneinheitliche Krankheitsbild vor, ohne dass es
bisher gelungen ist, eine Ursache festzustellen. Das WMS tritt in erster Linie bei
Krallenaffen auf; ein vergleichbares Krankheitsbild wurde aber auch vereinzelt bei
16 Literaturübersicht
Saimiri sciureus (Totenkopfäffchen), Macaca mulatta (Rhesusaffen), Macaca
fascicularis (Javaneraffen), Macaca arctoides (Bärenmakaken), Papio sp. (Pavianen)
und Cercopithecus aethiops (Grünen Meerkatzen) beobachtet (TRIBE 1978). Das
WMS ist durch eine progressive Verschlechterung des Allgemeinzustandes mit
hochgradigem Gewichtsverlust gekennzeichnet (TRIBE 1978; KING 1976). Die
Mortalitätsrate liegt bei etwa 60 %. Der Tod tritt häufig bereits wenige Wochen nach
Auftreten der ersten Symptome ein. Die Erkrankung kann sich allerdings auch über
mehrere Monate hinziehen (SHIMWELL et al. 1979; BRACK u. ROTHE 1980;
CHALIFOUX et al. 1982; RICHTER 1984; BEGLINGER et al. 1988). In
Krallenaffenkolonien tritt das WMS mit einer Prävalenz von 4 - 6 % auf, wobei die
Altersklasse der zwischen fünf und sieben Jahre alten Tiere am häufigsten betroffen
zu sein scheint (MORIN 1983; SAINSBURY et al. 1992; QUOHS 2003). Bezüglich
der Geschlechtsverteilung liegen uneinheitliche Angaben vor. Einige
Untersuchungen beschreiben das gehäufte Auftreten des WMS bei weiblichen
Tieren, insbesondere bei Alpha-Weibchen (BRACK u. ROTHE 1980; POLESHCHUK
et al. 1988; QUOHS 2003). In der Regel wird aber von einer ausgewogenen
Geschlechtsverteilung berichtet (SHIMWELL et al. 1979; MURGATROYD u.
CHALMERS 1980). Eine einheitliche Definition dieses Syndroms anhand von
Literaturangaben ist bis heute nicht möglich, da kein uniformes Krankheitsbild
beschrieben ist und ätiologische Aspekte nur vermutet werden können (KING 1976;
POTKAY 1992). Die folgenden Ausführungen geben einen aktuellen Überblick über
die vorhandene Literatur zum Wasting Marmoset Syndrom.
2.2.1 Klinische Veränderungen
Obwohl die Berichte über das klinische Erscheinungsbild des Wasting Marmoset
Syndroms hinsichtlich einzelner Symptome zum Teil stark variieren, ist es aufgrund
der Häufigkeitsverteilung dennoch möglich, eine Reihe von Krankheitszeichen zu
definieren, die charakteristisch für das WMS sind. Diese regelmäßig zu
beobachtenden klinischen Veränderungen bilden einen Symptomkomplex, der in
Abhängigkeit vom jeweiligen, individuellen Krankheitsverlauf durch weitere,
Literaturübersicht 17
unspezifische Symptome ergänzt werden kann.
In erster Linie ist das WMS durch einen hochgradigen Gewichtsverlust bei
gleichbleibender, guter Futteraufnahme gekennzeichnet (TRIBE 1978; SHIMWELL et
al. 1979; BRACK u. ROTHE 1980; MORIN 1983; RICHTER 1984; POLESHCHUK et
al. 1988; CROOK 1989; PFISTER et al. 1990; POTKAY 1992; SAINSBURY et al.
1992; LOGAN u. KHAN 1996). Innerhalb kurzer Zeit verlieren adulte Tiere zwischen
30 % und 50 % ihres Körpergewichtes und sind mit Endgewichten von weniger als
200 g hochgradig kachektisch (CHALIFOUX et al. 1982; MCNEES et al. 1983;
BARNARD et al. 1988; BEGLINGER et al. 1988). Bei Jungtieren in der Absetzphase
werden anstelle von Gewichtsverlusten vor allem Entwicklungsstörungen und
schlechte Gewichtszunahmen beobachtet (KING 1976; SHIMWELL et al. 1979). Mit
der Verminderung des Körpergewichtes geht eine fortschreitende Verschlechterung
des Allgemeinbefindens einher, die sich in Schwäche, Apathie und teilweise
komatösen Zuständen äußert und zu einer erhöhten Empfänglichkeit für
opportunistische Infektionen führt (LEWIS et al. 1987; PFISTER et al. 1990). Nicht
selten müssen erkrankte Tiere aufgrund der starken Abmagerung und des
schlechten Allgemeinzustandes euthanasiert werden (LOGAN u. KHAN 1996). Es
sind allerdings auch Fälle bei Schnurrbarttamarinen (Saguinus mystax) beschrieben,
bei denen nach einem etwa 10-wöchigen Krankheitsverlauf eine klinische Besserung
und schließlich die vollständige Genesung eintrat (POLESHCHUK et al. 1988).
Im Zusammenhang mit dem Wasting Marmoset Syndrom wird regelmäßig von einer
Muskelatrophie und sich daraus ergebenden Bewegungsstörungen berichtet
(MCNEES et al. 1983; BARNARD et al. 1988; POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN
1996). Von der Muskelatrophie ist vor allem die Skelettmuskulatur im Bereich des
Beckens und der Hintergliedmaßen betroffen. Zunächst fallen die Tiere durch
Koordinationsstörungen und steife Bewegungen auf, aus denen sich im weiteren
Verlauf eine vollständige Paralyse der Hinterextremitäten entwickeln kann (BRACK
u. ROTHE 1980; BEGLINGER et al. 1988). Die sensorischen Funktionen der
gelähmten, meist abnormal gebeugten Gliedmaßen bleiben dabei in der Regel
18 Literaturübersicht
erhalten, und das Bewusstsein ist nicht erkennbar gestört (BRACK u. ROTHE 1980;
SAINSBURY et al. 1992).
Veränderungen des Haarkleides sind ebenfalls ein häufiger Befund bei Tieren mit
WMS. Das Fell erscheint oftmals nass bzw. fettig und hat ein stacheliges,
ungepflegtes Aussehen (KING 1976; SHIMWELL et al. 1979; MORIN 1983;
BARNARD et al. 1988; POTKAY 1992; SAINSBURY et al. 1992). Bei vielen Tieren
treten multifokal großflächige Alopezien am Schwanz, insbesondere am
Schwanzansatz, aber auch im Bereich des Kopfes und des Rückens auf (MCNEES
et al. 1983; POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN 1996). In den haarlosen Bereichen
können sich im weiteren Verlauf trockene Ulzera bilden (POLESHCHUK et al. 1988).
Ein weiteres Symptom, das relativ oft bei Tieren mit WMS beobachtet werden kann,
ist chronische Diarrhoe (BARNARD et al. 1988; PRITZKER u. KESSLER 1998). Es
handelt sich in der Regel um intermittierende Durchfälle mit gelblich gefärbtem Kot
von schaumiger Konsistenz (KING 1976; BEGLINGER et al. 1988; POLESHCHUK et
al. 1988; POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN 1996). Nach BRACK und ROTHE (1981)
kann eine Veränderung der Kotbeschaffenheit etwa eine Woche vor Auftreten der
anderen Symptome festgestellt werden.
In vielen Fällen zeigen erkrankte Tiere anämische Erscheinungen in Form von
blassen Schleimhäuten (BRACK u. ROTHE 1980; RICHTER 1984; BARNARD et al.
1988; BEGLINGER et al. 1988; POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN 1996).
Hämatologische Untersuchungen zeigen, dass der Hämatokrit und der
Hämoglobingehalt bei diesen Tieren zum Teil weit unterhalb des entsprechenden
Referenzbereiches liegt (BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al. 1990; PRITZKER
u. KESSLER 1998). Bei dem WMS handelt sich um eine hämolytische Anämie, die
nach der Morphologie der Erythrozyten als normochrom und normozytär oder
normochrom und makrozytär eingestuft wird (RICHTER 1984; LOGAN u. KHAN
1996). Als Ursache für die vorzeitige Lyse der Erythrozyten vermuteten
GUTTERIDGE und Mitarbeiter (1986) eine oxidative Schädigung der zellulären
Literaturübersicht 19
Membranlipide der Erythrozyten. Ein Mangel an Antioxidantien als ätiologischer
Faktor für das WMS konnte in der anschließenden Studie allerdings nicht bestätigt
werden. Die gelegentlich bei erkrankten Tieren diagnostizierte Retikulozytose, d.h.
die Erhöhung der zirkulierenden Proerythrozytenzahl, ist ein typisches Merkmal einer
hämolytischen Anämie (LOGAN u. KHAN 1996). Ein besonderer hämatologischer
Befund, der mit dem Wasting Marmoset assoziiert wird, ist die hohe Inzidenz von
roten Einschlusskörperchen in den Erythrozyten, sogenannten Heinz bodies
(SHIMWELL et al. 1979; RICHTER 1984; PFISTER et al. 1990; SAINSBURY et al.
1992; LOGAN u. KHAN 1996). Heinz bodies stellen das finale Stadium der
oxidativen Denaturierung von Hämoglobin dar und werden beim Menschen als
Indikator für Schäden an der Erythrozytenmembran, ausgelöst durch freie Radikale,
angesehen (SAINSBURY et al. 1992). OMORPHOS und Mitarbeiter (1989)
untersuchten den Einfluss von Heinz bodies auf die Membraneigenschaften von
Erythrozyten in Weißbüschelaffen und zeigten, dass bei dieser Spezies keine
oxidative Schädigung der Erythrozytenmembran in Gegenwart von Heinz bodies
stattfindet. Die Funktion dieser Zelleinschlüsse, die häufig auch in Erythrozyten
gesunder Weißbüschelaffen nachgewiesen werden können, bleibt daher weiterhin
unklar. Weitere mögliche morphologischen Abweichungen der Erythrozyten von
Tieren mit WMS sind Polychromasie, Anisozytose, Poikilozytose und der Nachweis
von Howell-Jolly bodies (PFISTER et al. 1990; SAINSBURY et al. 1992; LOGAN u.
KHAN 1996). Das weiße Blutbild weist in der Regel keine Veränderungen auf
(PFISTER et al. 1990; LOGAN u. KHAN 1996). Vereinzelt wird von einer
Leukozytose berichtet, die auf eine Lymphozytose oder Neutrophilie mit
Linksverschiebung zurückzuführen ist und als Folge einer Sekundärinfektion
angesehen werden kann (BARNARD et al. 1988). Außerdem wird in seltenen Fällen
eine erhöhte Thrombozytenzahl nachgewiesen (SAINSBURY et al. 1992; LOGAN u.
KHAN 1996).
Das Wasting Marmoset Syndrom geht fast immer mit Veränderungen des
Proteinhaushaltes einher. Erkrankte Tiere weisen eine Hypoproteinämie auf, wobei in
der Regel der Gehalt an Albuminen, die den größten Anteil der Globulinfraktion des
20 Literaturübersicht
Blutes ausmachen, vermindert ist (SHIMWELL et al. 1979; POTKAY 1992; LOGAN
u. KHAN 1996). Die Hypalbuminämie kann mit einer Proteinurie vergesellschaftet
sein (BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al. 1990). Vereinzelt wird von erhöhten
Fibrinogenwerten berichtet (SAINSBURY et al. 1992). Eine häufig beschriebene
Veränderung der Blutenzymwerte ist die Erhöhung der Aspartat-Amino-Transferase
(AST, früher GOT) und der Alkalischen Phosphatase (AP). Auch von einer Zunahme
der Kreatinkinase (CK) und der leberspezifischen Alanin-Amino-Transferase (ALT,
früher GPT) wird bei Tieren mit WMS berichtet. Mögliche Ursachen für die Erhöhung
dieser zirkulierenden Enzymaktivitäten sind Leberschäden, Muskeldegenerationen
oder chronische Defekte des Skeletts (SHIMWELL et al. 1979; BEGLINGER et al.
1988; PFISTER et al. 1990; POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN 1996). RICHTER
(1984) stellt außerdem eine besondere Anfälligkeit dieser Tiere gegenüber akuten
hypoglykämischen Phasen fest, in denen der Blutglukosespiegel weniger als 40
mg/dl betragen kann und die Körpertemperatur auf bis zu 30° C absinkt. Der
Vergleich von Glukose-Toleranz-Kurven bei Weißbüschelaffen konnte zeigen, dass
Tiere mit WMS deutlich geringere Glukose-Serumkonzentrationen aufweisen als
gesunde Marmosetten (MCNEES et al. 1983).
Im Rahmen der WMS - Forschung wurden vereinzelt Urinuntersuchungen
durchgeführt. Dabei wurden regelmäßig Ketonkörper, Protein, Glukose und Blut im
Harn nachgewiesen (BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al. 1990).
Weitere Symptome, die gelegentlich im Zusammenhang mit dem Wasting Marmoset
Syndrom beobachtet werden, sind ventrale und zervikale Ödeme infolge der
Hypoproteinämie sowie ein aufgeblähtes Abdomen (POTKAY 1992; SAINSBURY et
al. 1992; LOGAN u. KHAN 1996).
2.2.2 Pathologie
Auch die bisherigen Beschreibungen der makroskopischen und mikroskopischen
Pathomorphologie stellen sich teilweise sehr heterogen dar. Typische
Literaturübersicht 21
Veränderungen bestimmter Organsysteme lassen sich allerdings regelmäßig
nachweisen und können somit als charakteristische Veränderungen bei Tieren mit
Wasting Marmoset Syndrom angesehen werden.
Dazu gehören insbesondere entzündlich degenerative Veränderungen des
Intestinaltraktes, die klinisch als Diarrhoe in Erscheinung treten können, häufig aber
auch symptomlos verlaufen. Bei der Sektion erscheint die gesamte Darmschleimhaut
dünn (TUCKER 1984; POTKAY 1992) . Der Darm ist in der Regel leer oder enthält
wenig Ingesta von weicher Konsistenz. Zäkum und Kolon sind meist stark dilatiert
und aufgegast und zeigen gelegentlich Schleimhautveränderungen in Form von
weißlichen Herden oder fokalen Erosionen. In seltenen Fällen können auch
Pseudomembranen auf der Mukosa nachgewiesen werden. Hyperämische
Veränderungen werden kaum beobachtet. Als Reaktion auf die ablaufenden
Prozesse in der Darmwand sind die regionalen Mesenteriallymphknoten meist stark
vergrößert (CHALIFOUX et al. 1982; LOGAN u. KHAN 1996). Histologische
Untersuchungen zeigen, dass fast alle Tieren mit WMS eine chronische Enteritis
aufweisen (QUOHS 2003). Da vorwiegend das Kolon betroffen ist, wird in den
meisten Fällen von einer chronischen Kolitis berichtet (POTKAY 1992; SAINSBURY
et al. 1992; IALEGGIO u. BAKER 1995). Die entzündlichen Veränderungen treten in
unterschiedlichen Ausprägungsgraden auf, wobei überwiegend geringgradige
chronische Kolitiden diagnostiziert werden (TUCKER 1984). Die Enteritis ist
gekennzeichnet durch eine vorwiegend mononukleäre und polymorphnukleäre
Zellinfiltration in der Lamina propria sowie durch Epithelatypien und Alterationen der
Krypten. Epitheliale Atypie äußert sich in einer verdünnten Lamina propria,
hyperchromatischen Epithelzellen mit hoher Mitoserate und einer vermehrten Anzahl
an Becherzellen. Veränderungen der Krypten bestehen in verkürzten, teilweise
verzweigten Krypten sowie Kryptabszessen. Infolge der lokalen immunzellulären
Reaktion ist das darmassoziierte lymphatische Gewebe (GALT = gut associated
lymphoid tissue) hyperplastisch und zeigt eine Aktivierung der Follikelstrukturen.
Weniger häufige Befunde sind Ulzerationen und Nekrosen der Darmwand, die bis an
die Serosa reichen können und Zysten der Brunner-Drüsen (CHALIFOUX et al.
22 Literaturübersicht
1982; TUCKER 1984; LOGAN u. KHAN 1996).
Bei der klinisch auffälligen Reduktion der Muskelmasse handelt es sich um eine
Skelettmuskelatrophie, die ausschließlich die Typ 2-Muskelfasern betrifft. Fokale
Nekrosen, Fibrosen, eine geringgradige entzündliche Zellinfiltration und hyaline
Degeneration (Zenkersche Degeneration) sind weitere typische histologische
Befunde im atrophierten Muskelgewebe (BRACK u. ROTHE 1980; MURGATROYD
u. CHALMERS 1980; TUCKER 1984; PRITZKER u. KESSLER 1998).
MURGATROYD und CHALMERS (1980) gehen davon aus, dass die Rückbildung
der Skelettmuskulatur ein sekundäres Geschehen ist und als Folge von
Myodegeneration und Fibrose im Sinne einer Inaktivitätsatrophie auftritt.
Histologisch nachweisbare Nephropathien werden regelmäßig bei Tieren mit WMS
beobachtet, treten makroskopisch allerdings kaum in Erscheinung. Nur in schweren
Fällen haben die Nieren eine blasse Farbe und weisen eine granulierte Oberfläche
auf (BRACK u. ROTHE 1981). Die pathohistologischen Befunde reichen von
geringgradigen interstitiellen Entzündungszellinfiltrationen bis hin zu chronischen
Nephritiden, die sowohl das interstitielle Gewebe als auch das Tubulussystem
betreffen (tubulointerstitielle Nephritis). Die entzündlichen Veränderungen sind durch
mononukleäre Zellinfiltrate, Fibrosen und Dilatation der Tubuli gekennzeichnet und
sind insbesondere in der Nierenrinde im Bereich des kortikomedullären Übergangs
lokalisiert (BRACK u. ROTHE 1980; TUCKER 1984; BEGLINGER et al. 1988;
POTKAY 1992; SAINSBURY et al. 1992). In fibrosierten Arealen lassen sich
gelegentlich fokale Kalkablagerungen nachweisen. Assoziierte
Glomerulumalterationen, wie mesangiale Proliferation und Atrophie von
Glomerulumschlingen, stellen nach BRACK und ROTHE (1981) sekundäre
Veränderungen dar. Unabhängig vom Wasting Marmoset Syndrom sind
Nephropathien ein häufiger Befund bei Callitrichiden. Regelmäßig nachweisbare
Nierenveränderungen lassen sich in drei Kategorien einteilen:
1. Glomerulumveränderungen (vorwiegend das Mesangium betreffend)
Literaturübersicht 23
2. Interstitielle Läsionen
3. Tubulusveränderungen
Immunhistologische Untersuchungen an Nierenmaterial von Krallenaffen zeigen,
dass mesangiale Veränderungen fast immer mit der Ablagerung von
Immunglobulinenkomplexen einher gehen, wobei IgM- und IgA-Komplex-
Ablagerungen überwiegen. Folglich handelt es sich bei der Nierenerkrankung der
Krallenaffen um eine IgM/ IgA-Nephropathie (BRACK 1990; BRACK et al. 1999) bzw.
IgA-Nephropathie (EITNER et al. 2005), die in vieler Hinsicht den idiopathischen
Immunkomplexnephropathien des Menschen ähnelt und möglicherweise ein
geeignetes Modell für menschliche Nierenerkrankungen darstellt. SCHROEDER und
Mitarbeiter (1999) untersuchten in diesem Zusammenhang die Beteiligung von
Immunglobulinablagerungen in den Nieren von Tieren mit Wasting Marmoset
Syndrom. Es konnte gezeigt werden, dass Marmosets mit glomerulären IgA-
Ablagerungen häufiger an WMS erkrankten als Tiere ohne Immunglobulinnachweis.
Es ist daher anzunehmen, dass diese Immunkomplexablagerungen bei der
Pathogenese des WMS von Bedeutung sind.
Auch die häufig beschriebenen pathologischen Befunde der Leber sind bei der
Sektion nicht festzustellen, sondern lassen sich nur lichtmikroskopisch darstellen. Zu
den hepatischen Läsionen gehören gemischtzellige entzündliche Infiltrate in den
Gefäßwänden und im Interstitium, geringgradige periportale Infiltrate mit
mononukleären Zellen und diffuse Hämosiderinablagerungen in den Kupfferschen
Sternzellen und Hepatozyten (Hämosiderose). Auffällig ist, dass die
Entzündungszellinfiltrate oftmals granulomähnliche Strukturen im Leberparenchym
bilden. Seltener werden extramedulläre Hämatopoeseherde, fokale Nekrosen sowie
fettige Degeneration und Gallengangshyperplasie beobachtet (CHALIFOUX et al.
1982; TUCKER 1984; POTKAY 1992; QUOHS 2003).
Bei einer Reihe von Tieren mit dem klinischen Bild des Wasting Marmoset Syndroms
werden entzündliche Veränderungen des Pankreas nachgewiesen. Neben akuten bis
24 Literaturübersicht
chronischen Pankreatitiden wird außerdem von Pankreasfibrosen und
Zymogengranulaverlust des sekretorischen Pankreas berichtet. Makroskopisch fällt
eine Vergrößerung und Verfestigung des Pankreas auf (BRACK u. ROTHE 1980,
1981; POTKAY 1992). Ein dem Wasting Marmoset Syndrom vergleichbares
Krankheitsbild wird durch eine Infektion mit dem Nematoden Trichospirura
leptostoma hervorgerufen. In Käfighaltungen werden die Würmer von den
Marmosetten mit dem Zwischenwirt, der Kakerlake, aufgenommen. Zielorgan ist das
Pankreas, in dem adulte Stadien und Eier im Gangsystem nachgewiesen werden
können. Infolge der parasitären Besiedlung kommt es zu subakuten bis chronischen
Entzündungen des periduktalen Gewebes, chronisch fibrosierenden Pankreatitiden,
Parenchymnekrosen und –atrophie des exokrinen Pankreas und Proliferation des
Gangsystems (BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al. 1990).
Die Frage, ob Knochenveränderungen zum Symptomkomplex des Wasting
Marmoset Syndroms gehören, wird in der Literatur kontrovers diskutiert. Während die
meisten Autoren brüchige und dünne Knochen als eines der Krankheitszeichen des
WMS ansehen, sind IALEGGIO und BAKER (1995) und BARNARD und Mitarbeiter
(1988) der Auffassung, dass diese Veränderungen zwar häufig im Zusammenhang
mit dem WMS auftreten, aber eine unabhängig vom WMS auftretende Erkrankung
darstellen, die als metabolische Knochenkrankheit bezeichnet wird (metabolic bone
disease = MBD). Typische makroskopische Befunde sind weiche, biegsame
Knochen und eine brüchige, papierartige Beschaffenheit der Schädeldecke. Als
Folge der herabgesetzten Knochenmineralisation steigt die Inzidenz von Frakturen
der Schädeldecke und des Humerus (KING 1976; MURGATROYD u. CHALMERS
1980; TUCKER 1984; BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al. 1990).
Radiographische Untersuchungen der Knochensubstanz ergeben ebenfalls
eindeutige Hinweise für eine metabolische Knochenerkrankung. Die Tatsache, dass
Knochenveränderungen auf dem Röntgenbild erst sichtbar werden, wenn
mindestens 40 % der Knochenmineralien resorbiert sind, verdeutlicht das Ausmaß
der Erkrankung (SAINSBURY et al. 1992).
Literaturübersicht 25
Darüber hinaus gibt es vereinzelt Berichte über pathologische Veränderungen der
Nebennieren in Form einer Vergrößerung der Glandulae suprarenales mit
lymphozytärer Entzündungszellinfiltration und extramedullärer Hämatopoese. In
seltenen Fällen sind die Schilddrüsen chronisch entzündet und weisen ein
geringgradiges bis hochgradiges mononukleäres Zellinfiltrat (v.a. Lymphozyten) im
Interstitium sowie verschiedene Stadien der Follikelzerstörung auf (BRACK u.
ROTHE 1980; TUCKER 1984). Außerdem werden bei Tieren mit WMS gelegentlich
chronische Gastritiden und geringgradige Myokarditiden nachgewiesen (TUCKER
1984; BEGLINGER et al. 1988).
2.2.3 Ätiologie
Da bislang keine monokausale Ätiologie für das Wasting Marmoset Syndrom
nachgewiesen werden konnte, ist von einer multifaktoriell bedingten Erkrankung
auszugehen (POTKAY 1992; IALEGGIO u. BAKER 1995).
Nutritive Faktoren scheinen bei der Entstehung des Wasting Marmoset Syndroms
eine zentrale Rolle einzunehmen. Besonders vor dem Hintergrund, dass sich die
Nahrung von freilebenden Krallenaffen sehr stark von der Diät der in Gefangenschaft
gehaltenen Tiere unterscheidet, ist es wahrscheinlich, dass diätetische Einflüsse bei
der Ätiologie des WMS von Bedeutung sind (BARNARD et al. 1988; POTKAY 1992;
GORE et al. 2001). Eine Proteindefizienz wird in der Literatur am häufigsten als
Ursache diskutiert, wobei unklar ist, inwieweit es sich um einen primären
Eiweißmangel oder um ein sekundäres Geschehen handelt. Die Tatsache, dass das
klinische und histopathologische Erscheinungsbild eines experimentellen
Eiweißmangels in nicht humanen Primaten (Kwashiorkor) deutliche Parallelen zum
klinischen Verlauf und Sektionsbild des WMS aufweist, spricht für die Hypothese
eines Proteindefizits (BRACK u. ROTHE 1980). Einige Autoren gehen davon aus,
dass ein zu geringer Proteinanteil in der Nahrung den Auslöser für das WMS darstellt
(TRIBE 1978; SHIMWELL et al. 1979; TUCKER 1984). Eine Erhöhung des
Proteinanteils in der Futtermischung führt zwar nicht zu einer klinischen Besserung
26 Literaturübersicht
bereits erkrankter Tiere, scheint aber in einigen Kolonien die Häufigkeit der
Erkrankung deutlich vermindern zu können wie Untersuchungen von BRACK und
ROTHE (1980), BARNARD und Mitarbeitern (1988) und POLESHCHUK und
Mitarbeitern (1988) zeigen. Der empfohlene Proteingehalt der Diät von
Weißbüschelaffen in Gefangenschaftshaltung wird derzeit mit 25 - 27 % angegeben
(BRACK u. ROTHE 1980). Ein primärer Eiweißmangel entsteht aber nicht nur
aufgrund eines relativ zu geringen Proteingehaltes im Futter, sondern auch infolge
einer verringerten absoluten Proteinzufuhr. Neben fütterungstechnischen Aspekten
wie Schmackhaftigkeit und Darreichungsform des Futters können auch soziale
Faktoren dazu führen, dass es zu einer mangelhaften Aufnahme der proteinreichen
Futterkomponenten kommt (MORIN 1983; POTKAY 1992; IALEGGIO u. BAKER
1995). Ein Beispiel hierfür ist die von BRACK und ROTHE (1980) beobachtete
Häufung der Erkrankung bei alpha-Weibchen, die als ranghohe Tiere vor allem das
schmackhafte und begehrte Obst zu sich nehmen, während die proteinreiche
pelletierte Futtermischung den rangtieferen Tieren überlassen wird. Ein sekundärer
Eiweißmangel wird durch eine Reduktion der intestinalen Proteinabsorption infolge
von Schleimhautalterationen hervorgerufen. Als Ursache kommen Infektionen,
persistierende Durchfälle und Resorptionsstörungen im Zusammenhang mit dem
Malabsorptionssyndrom in Frage (BARNARD et al. 1988; PRITZKER u. KESSLER
1998). TUCKER (1984) vermutet eine gastrointestinale Atrophie als Folge der
standardisierten Diäten, deren Fütterung bei Labortieren z. B. für toxikologische
Untersuchungen notwendig ist.
Ein ebenfalls häufig vermuteter ätiologischer Aspekt des Wasting Marmoset
Syndroms sind Hypovitaminosen, wobei einem Mangel an Vitamin E und Vitamin C
sowie einem Vitamin B-Komplex-Mangel besondere Bedeutung zukommt (KING
1976; TRIBE 1978; SHIMWELL et al. 1979). Auch hier scheint eine verminderte
intestinale Resorptionsrate der Auslöser für die Mangelsituation zu sein, so dass von
einem sekundären Geschehen auszugehen ist. Ein klassischer Vitamin E-Mangel
induziert alle Veränderungen, die mit dem WMS einhergehen, mit Ausnahme der
gastrointestinalen Manifestation (PRITZKER u. KESSLER 1998; MURGATROYD u.
Literaturübersicht 27
CHALMERS 1980). Außerdem werden Vitamin D3-Hypovitaminosen beschrieben, die
möglicherweise die Folge eines inadäquaten Lichtspektrums künstlicher Lichtquellen
sind (IALEGGIO u. BAKER 1995). Dagegen geht KING (1976) davon aus, dass eine
Vitamin D3-Hypervitaminose das Wasting Marmoset Syndrom verursacht, indem die
körpereigene Vitaminproduktion in Kombination mit einer Futtersupplementierung zu
einer Überdosierung führt. Die im Rahmen einer generalisierten Hyperkalzämie zu
erwartenden viszeralen Kalziumdepots konnten in dieser Studie allerdings nicht
nachgewiesen werden.
Im Zusammenhang mit ernährungsbedingten ätiologischen Faktoren werden
außerdem Unverträglichkeiten und allergische Reaktionen gegenüber bestimmten
Futterkomponenten diskutiert. SCHROEDER und Mitarbeiter (1997) untersuchten
Serumproben von Krallenaffen mit chronischen Darm- und Nierenveränderungen auf
das Vorkommen spezifischer Antikörper gegen 17 verschiedene Nahrungsproteine.
Dabei wurden besonders deutliche Reaktionen gegen Getreideproteine bzw. Gliadin
sowie hohe Spiegel zirkulierender IgA-Immunkomplexe nachgewiesen. Gliadin ist ein
wirksamer Bestandteil des Kleberproteins Gluten, das in zahlreichen Getreidearten
(u.a. in Weizen, Roggen und Gerste) enthalten ist und auch in kommerziellen
Futtermischungen für Krallenaffen Verwendung findet. Klinische Bedeutung erlangt
das Gliadin bei der mit Magen-Darm-Symptomatik und Wachstumsstörungen
einhergehenden Gliadinunverträglichkeit des Menschen (Zöliakie). Aufgrund der
Untersuchungsergebnisse vermuteten SCHROEDER und Mitarbeiter (1997) eine
Beteiligung des Gliadins an der Ätiologie und Pathogenese chronisch entzündlicher
Darmerkrankungen und Immunkomplexglomerulopathien bei Krallenaffen. Da diese
Veränderungen bei der Symptomatik des Wasting Marmoset Syndroms eine zentrale
Rolle einnehmen, wurden in einer zweiten Studie an WMS erkrankte
Weißbüschelaffen auf IgA-Antikörper gegen Gliadin, zirkulierende IgA-
Immunkomplexe und glomeruläre IgA-Ablagerungen untersucht. Im Vergleich zu
gesunden Tieren konnten bei Wastern signifikant höhere Serumspiegel an IgA-
Gliadin-Antikörpern und zirkulierenden Immunkomplexen nachgewiesen werden.
Auch die glomerulären IgA-Ablagerungen traten mit hoher Frequenz bei erkrankten
28 Literaturübersicht
Tieren auf. Folglich wird angenommen, dass Antikörper gegen im Futter enthaltenes
Gliadin an der Ätiologie des Wasting Marmoset Syndroms beteiligt sind
(SCHROEDER et al. 1999). Nach CROOK (1989) führt die Fütterung einer
glutenfreien Diät zu einer klinischen Besserung und Regeneration erkrankter
Weißbüschelaffen.
Umwelt- und Sozialfaktoren scheinen für die Krankheitsentstehung ebenfalls von
Relevanz zu sein. Als disponierende Faktoren werden unter anderem Geburtsstress
bei weiblichen Tieren und sogenannter 'intergroup stress' in Kolonien mit zu hoher
Populationsdichte angesehen (IALEGGIO u. BAKER 1995). Im Zusammenhang mit
sozialen Einflüssen spielen vor allem Dominanzverhalten und „Mobbing“ eine
wichtige Rolle (BARNARD et al. 1988). Mangelhafte Haltungsbedingungen und
inadäquate Käfigeinrichtungen, die bei den Tieren Bewegungsmangel und Langweile
hervorrufen, sollen ebenfalls eine auslösende Komponente darstellen (TRIBE 1978;
POTKAY 1992).
Lange Zeit wurde vermutet, dass es sich bei dem Wasting Marmoset Syndrom um
ein infektiöses Geschehen handelt (BARNARD et al. 1988; POTKAY 1992). Da
bakteriologische und virologische Untersuchungen in den meisten Fällen negativ
verliefen, wird ein monokausales infektiöses Geschehen mittlerweile ausgeschlossen
(BRACK u. ROTHE 1980; CHALIFOUX et al. 1982; TUCKER 1984). Allerdings
werden Verschiebungen des intestinalen Keimspektrums bei der Pathogenese des
WMS als begünstigende Faktoren angesehen. LEWIS und Mitarbeiter (1987)
untersuchten in diesem Zusammenhang die intestinale Mikroflora von
Weißbüschelaffen mit WMS und verglichen die Ergebnisse mit denen von gesunden
Tieren. Während die aerobe Fäkalflora bei kranken und gesunden Tieren große
Übereinstimmung zeigte, ergaben sich hinsichtlich der anaeroben Flora deutliche
Unterschiede zwischen den beiden Tiergruppen. Bei Tieren mit WMS wurden
vergleichsweise weniger Laktobazillen, aber mehr Bakteroides-Fusobakterien,
Clostridien und nicht-Laktose-fermentierende Enterobakterien (Proteus sp.,
Pseudomonas aeruginosa, Alkaligenes faecalis) nachgewiesen. Darüber hinaus
Literaturübersicht 29
stellen LEWIS und Mitarbeiter (1987) bei Tieren mit WMS eine Veränderung in der
Zusammensetzung der Fäkalflora in Abhängigkeit vom Krankheitsverlauf fest. Etwa
zwei bis drei Wochen nach Auftreten der ersten Symptome erscheinen Bakteroides
in großer Anzahl im Kot und der Anteil an Laktobazillen nimmt stark ab. Bei Tieren
mit nachfolgender Genesung normalisieren sich die Keimzahlen nach etwa einem
Monat wieder und erreichen schließlich ihre ursprünglichen Werte.
Einige Autoren vermuten eine Beteiligung von parasitären Infektionen an der
Ätiologie des Wasting Marmoset Syndroms (BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al.
1990; POTKAY 1992). WMS-ähnliche Veränderungen werden durch den im
Pankreasgewebe parasitierenden Nematoden Trichospirura leptostoma
hervorgerufen. Bei der Nahrungsaufnahme zerstören die adulten Würmer das
Pankreasparenchym und lösen im weiteren Verlauf eine Pankreashypofunktion aus,
die sich in einer mangelhaften Sekretion von Trypsin und Chymotrypsin äußert und
letztendlich zu einer Malabsorption führt. Die Folge können unter anderem
Hypovitaminosen und Proteindefizienzen sein (BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et
al. 1990). Nach PFISTER und Mitarbeitern (1990) bewirkt die Verabreichung von
Pankreasenzymen bei Wastern deutliche Gewichtszunahmen.
Über mögliche genetische Einflüsse als disponierende Faktoren für das WMS wird
kontrovers diskutiert. Während KING (1976) in seiner Krallenaffenkolonie Hinweise
für eine familiäre Beziehung zwischen den erkrankten Tieren feststellte, konnten
BRACK und ROTHE (1980) keine familiäre Häufung beobachten. Auch
MURGATROYD und CHALMERS (1980) entdeckten keine Anhaltspunkte für ein
erbliches Geschehen. MORIN (1983) vermutet eine Beteiligung von genetischen
Faktoren, da es sich um eine Einzeltiererkrankung bei gleichen
Haltungsbedingungen handelt.
2.2.4 Therapie
Aufgrund der unklaren Ätiologie des Wasting Marmoset Syndroms ist es nicht
30 Literaturübersicht
möglich, eine einheitliche kausale Therapie durchzuführen. Neben dem Versuch,
mögliche auslösende Faktoren zu bekämpfen bzw. zu eliminieren, steht vielmehr
eine symptomatische Behandlung im Vordergrund, die allerdings in der Regel nicht
zu einer vollständigen Genesung führt, sondern nur eine kurzfristige Linderung der
Symptome bewirken kann (SHIMWELL et al. 1979; SAINSBURY et al. 1992). Da
sich das Krankheitsbild des WMS klinisch sehr heterogen darstellt und die
Symptome bei betroffenen Tieren unterschiedlich stark ausgeprägt sein können, wird
in den jeweiligen Fallbeschreibungen von verschiedenen Therapieansätzen berichtet.
Auf der Grundlage, dass ein Proteinmangel das WMS verursacht, haben einige
Arbeitsgruppen als kausalen therapeutischen Ansatz den Proteinanteil in ihrer
Krallenaffendiät erhöht. BARNARD et al. (1988) untersuchten den therapeutischen
Effekt einer proteinreichen Fütterung bei Schnurrbarttamarinen (Saguinus mystax)
mit WMS, indem sie bei einer Tiergruppe eine kommerzielle Diät einsetzten, während
die andere Gruppe mit einer ausgewogenen, berechneten Diät gefüttert wurde. In der
zweiten Gruppe konnten mit Hilfe der sogenannten 'open formular diet' sämtliche
Anzeichen des WMS eliminiert und deutliche Gewichtszunahmen erreicht werden.
Ein vergleichbares Ergebnis erzielten POLESHCHUK und Mitarbeiter (1988)
ebenfalls bei Schnurrbarttamarinen und BRACK und ROTHE (1980) bei
Weißbüschelaffen. Dagegen stellten TRIBE (1978) und SAINSBURY et al. (1992) in
den von ihnen beobachteten Kolonien fest, dass sich der Allgemeinzustand vieler
Tiere im Anschluss an die Korrektur des Proteinanteils in der Nahrung verbesserte,
einige Waster aber ein unverändertes Krankheitsbild zeigten. SHIMWELL und
Mitarbeiter (1979) kommen anhand ihrer Untersuchungen zu dem Schluss, dass eine
proteinreiche Diät den Krankheitsverlauf des WMS bei Marmosets aufhalten kann.
Aufgrund der degenerativen Schäden des Bewegungsapparates wird eine
vollständige Wiederherstellung erkrankter Tiere allerdings bezweifelt.
Weitere therapeutische Modifikationen der Fütterung bestehen in der Substitution
von Vitamin E und Selen sowie Zink und Kupfer, deren Verabreichung das Auftreten
weiterer Fälle von WMS verhindern soll (RICHTER 1984; PRITZKER u. KESSLER
Literaturübersicht 31
1998). Besondere Aufmerksamkeit sollte außerdem fütterungstechnischen Aspekten,
wie Schmackhaftigkeit und Präsentation des Futters, gewidmet werden (POTKAY
1992).
Regelmäßige antiparasitäre Behandlungen der Krallenaffen und die gleichzeitige
Bekämpfung möglicher Zwischenwirte (z. B. Kakerlaken) tragen dazu bei, dass eine
Parasitose als Ursache für das Wasting Marmoset Syndrom mit großer Sicherheit
ausgeschlossen werden kann (BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al. 1990).
Darüber hinaus wird eine Verminderung von Stress als Grundlage für eine effektive
Therapie angesehen (IALEGGIO u. BAKER 1995). Einen deutlichen
Behandlungserfolg konnte TRIBE (1978) mit der oralen Applikation von Laktobazillen
zur Stabilisierung der intestinalen Keimflora erreichen.
Eine umfassende Empfehlung für eine symptomatische Therapie des WMS liefern
SAINSBURY und Mitarbeiter (1992). Bei Abweichungen des Blutbildes als Folge
einer bakteriellen Sekundärinfektion (Neutrophilie, Linksverschiebung) ist der Einsatz
von Antibiotika indiziert. Die Verabreichung von Vitamin E und Selen reduziert die
morphologischen Veränderungen der Erythrozyten sowie die Anzahl der Heinz
bodies. Orale Eisenapplikationen werden bei zu niedrigen MCHC Werten eingesetzt.
Die Therapie metabolischer Knochenveränderungen (MBD) umfasst Kalzium- und
Vitamin D3-Gaben. Bei dem Auftreten von Diarrhoe wird mit Kaolin, Elektrolyten und
Loperamid behandelt. Die beschriebenen therapeutischen Ansätze sind je nach
Schweregrad der Erkrankung allerdings nur teilweise erfolgreich und können die
Symptome nicht langfristig unterdrücken.
Das vermehrte Auftreten von Gewichtsverlusten in einer Lisztaffenkolonie (Saguinus
oedipus) veranlassten CHALIFOUX und Mitarbeiter (1985), ein Protokoll zur
Identifizierung und Behandlung von Tamarinen mit typischer WMS-Symptomatik zu
entwickeln. Alle Tiere der Kolonie wurden monatlich gewogen. Bei Tieren, die einen
kranken Eindruck machten, wurden Bioptate der rektalen Schleimhaut entnommen
und auf das Vorhandensein entzündlicher Veränderungen untersucht. Die Therapie
32 Literaturübersicht
erkrankter Tiere erfolgte mit Sulfasalazin (10 mg/kg KGW) und einer synthetischen
flüssigen Diät, die über eine Magensonde 3 mal täglich über einen Zeitraum von 6
Wochen verabreicht wurde. Mit dieser Behandlung wurden deutliche
Gewichtszunahmen, Remission der Enteritiden und eine verminderte Mortalitätsrate
erreicht. Allerdings wurden viele der behandelten Lisztaffen nach einiger Zeit
rückfällig und mussten erneut behandelt werden.
Im Deutschen Primatenzentrum wird die Therapie des WMS bei Krallenaffen
(Callithrix jacchus) in erster Linie symptomatisch durchgeführt. Dazu gehört die Gabe
von Antibiotika, Amynin, Vitaminen und Mineralstoffen. Die Substitution von Vitamin
D3 erfolgt unter regelmäßiger Kontrolle des Serum-Kalziumspiegels. Außerdem hat
sich die Verwendung von Paramunitätsinducern in einigen Fällen als wirksam
erwiesen. Generell wird versucht, eine ausgewogene proteinreiche Diät zu füttern
und den Tieren eine möglichst stressfreie Umgebung zu schaffen. Die Erfahrungen
bei der Behandlung von Wastern in der Kolonie des Deutschen Primatenzentrums
zeigen, dass die symptomatische Therapie allenfalls eine vorübergehende
Stabilisierung der Tiere bewirken kann. Ein dauerhafter Heilungserfolg ohne Rezidive
kann in den meisten Fällen nicht erreicht werden.
2.3 Chronische Kolitiden bei Krallenaffen
Chronische Kolitiden gehören bei Weißbüschelaffen in Gefangenschaftshaltung zum
veterinärmedizinischen Alltag. Sie können dabei im Zusammenhang mit dem
Symptomkomplex des Wasting Marmoset Syndroms stehen, aber auch unabhängig
davon auftreten. Da WMS-assoziierte Enteritiden von chronischen Kolitiden anderer
Genese klinisch nicht immer eindeutig abzugrenzen sind, ergeben sich häufig
Schwierigkeiten bei der Früherkennung potentieller Waster und der Identifizierung
von Tieren mit Durchfallerkrankungen anderer Ursache. Hinzu kommt, dass ein
Großteil der chronischen Kolitiden bei Krallenaffen keiner klaren Ätiologie zugeordnet
werden kann und daher, wie auch das WMS, ein ungeklärtes Problem darstellt.
Literaturübersicht 33
Eine der häufigsten Morbiditäts- und Mortalitätsursachen in Krallenaffenkolonien sind
Durchfallerkrankungen, die mit entzündlichen Veränderungen des Kolons einher
gehen. Dabei zeigen etwa 80 % der Kolitiden einen chronischen Verlauf (CLAPP et
al. 1988). Die weniger häufig auftretenden akuten Entzündungen des Kolons sind
histologisch durch eine Zunahme an polymorphkernigen Leukozyten in der Lamina
propria sowie Ödematisierung und Hyperämie der Darmmukosa gekennzeichnet und
werden in erster Linie von bakteriellen Infektionserregern verursacht. Zu den
regelmäßig isolierten Bakterien gehören Shigella sp., Salmonella sp., Proteus sp.,
enteropathogene Escherichia coli, Pseudomonas sp., Klebsiella sp. und
Campylobacter jejuni (LUSHBAUGH et al. 1985; DINIZ u. DA-COSTA 1995). Aber
auch Infektionen mit Viren, Parasiten und Pilzen können zu akuten Kolitiden führen.
In diesem Zusammenhang spielen unter anderem Corona- und Adenoviren, Candida
sp., Giardia sp., Trichomonas sp., Amoeben und Kryptosporidien eine Rolle (HIRD et
al. 1984). Trotz der guten Therapiemöglichkeiten, insbesondere bei bakterieller
Ätiologie, stellen akute Kolitiden in Labortierhaltungen ein großes Problem dar, weil
sie teilweise endemisch auftreten und häufig rezidivieren (LUSHBAUGH et al. 1985).
Charakteristische pathohistologische Merkmale chronischer Kolitiden sind
mononukleäre Zellinfiltrationen in der Lamina propria, Kryptabszesse,
Epithelzellatypien, lymphatische Hyperplasie und eine verminderte Anzahl an
Becherzellen (CHALIFOUX et al. 1982). Da die chronischen mukosalen
Strukturveränderungen bei Krallenaffen oftmals von einer akut entzündlichen
Komponente begleitet werden, wird die Kolitis der Marmosetten auch als chronisch
aktiv bezeichnet (JOHNSON et al. 1996). Klinisch manifestiert sich die Erkrankung in
Form von chronisch-intermittierenden Durchfällen, wobei sich Perioden mit Diarrhoe,
die in der Regel wenige Tage andauern, mit symptomlosen Phasen abwechseln
(SAINSBURY et al. 1987). Nicht selten treten allerdings auch klinisch inapparente
chronische Kolitiden auf, die erst post mortem eindeutig diagnostiziert werden
können (TUCKER 1984). Unter den Krallenaffen sind insbesondere Lisztaffen
(Saguinus oedipus) von chronischen Kolitiden betroffen, wobei das Krankheitsbild
dieser Affenart deutliche Parallelen zu den beim Menschen als inflammatory bowel
34 Literaturübersicht
disease (IBD) bezeichneten chronisch entzündlichen Darmveränderungen aufweist.
Die IBD äußert sich klinisch als ulzerative Kolitis (ulcerative colitis = UC) bzw.
Morbus Crohn (Crohn´s disease = CD) und tritt bei etwa 0,3 % der westlichen
Bevölkerung auf. Aufgrund von klinischen und pathohistologischen Ähnlichkeiten
zwischen der chronischen Kolitis von Saguinus oedipus und der IBD des Menschen
werden Lisztaffen vielfach als Tiermodell bei wissenschaftlichen Studien über die
ulzerative Kolitis und den Morbus Crohn eingesetzt (CHALIFOUX et al. 1985; CLAPP
et al. 1991; MOTTET et al. 2003). Eine weitere Gemeinsamkeit der Kolitiden von
Mensch und Lisztaffe ist die Neigung zur malignen Entartung (JOHNSON et al.
1996). Adenokarzinome des Kolons treten bei adulten Lisztaffen, die unter
ulzerierenden Dickdarmentzündungen leiden, mit einer Inzidenz von 35 % auf
(CLAPP et al. 1991). Als disponierende Faktoren werden sowohl genetische als auch
umweltbedingte Einflüsse vermutet (PETERSEN et al. 1987). Trotz einer ähnlich
hohen Rate an chronischen Kolitiden sind Kolonkarzinome bei Weißbüschelaffen im
Vergleich zu Lisztaffen ein eher seltener Befund (BRADY u. MORTON 1998).
Die Ursachen für die chronischen Kolitiden der Krallenaffen sind größtenteils nicht
bekannt (TUCKER 1984; SAINSBURY et al. 1987). Bakterielle, virale oder parasitäre
Infektionserreger können in den meisten Fällen nicht isoliert werden (CHALIFOUX et
al. 1985). Da die Erkrankung ausschließlich bei in Gefangenschaft gehaltenen Tieren
beobachtet wird, werden in erster Linie haltungs- und fütterungsbedingte Aspekte
vermutet, die in Form von Stressoren auf den Organismus einwirken. WOOD und
Mitarbeiter (2000) gehen bei der Pathogenese von einem zweistufigen Prozess aus,
bei dem zunächst eine stressabhängige neurogene Komponente im Darm aktiviert
wird. Die Folge ist die funktionale Desintegration der intestinalen Schleimhautbarriere
und die damit assoziierte sekundäre Einwirkung von luminalen Faktoren, die zu einer
chronischen Stimulation des mukosalen Immunsystems führen. Welche luminalen
Faktoren bei der Entstehung einer chronischen Kolitis von Bedeutung sind, konnte
bislang nicht geklärt werden. Es wird angenommen, dass Mikroorganismen in
diesem Zusammenhang eine wichtige Rolle spielen. PODOLSKY und Mitarbeiter
(1985) führten Untersuchungen über die Muzinzusammensetzung des Kolons bei
Literaturübersicht 35
verschiedenen Affenspezies durch und stellten bei Lisztaffen einen signifikanten
Mangel der Muzinkomponente IV fest. Eine Reduzierung dieses Glykoproteins lässt
sich ebenfalls bei humanen Patienten mit ulzerativer Kolitis nachweisen und scheint
daher für chronische Dickdarmerkrankungen von Bedeutung zu sein. Analysen der
Muzinzusammensetzung des Kolons von anderen, nicht tamarinen Primaten zeigen,
dass die Menge an Muzin IV bei Rhesusaffen (Macaca mulatta), Javaneraffen
(Macaca fascicularis), Totenkopfäffchen (Saimiri sciureus) und Nachtaffen (Aotus
trivirgatus) im Vergleich zu Lisztaffen deutlich größer und annähernd identisch ist.
Interessanterweise liegen die Werte der Muzinkomponente IV von Weißbüschelaffen
(Callithrix jacchus) zwischen denen der Lisztaffen und denen von nicht tamarinen
Primaten. Die Ergebnisse führen zu der Hypothese, dass der bei Lisztaffen und
Weißbüschelaffen nachweisbare Mangel an Muzin IV an der Entstehung chronischer
Kolitiden beteiligt sein könnte.
36 Eigene Untersuchungen
3 Eigene Untersuchungen
3.1 Material und Methoden
3.1.1 Tiere
Zur Untersuchung gelangten alle im Zeitraum 2003 und 2004 mit klinischen
Anzeichen eines WMS anfallenden Weißbüschelaffen aus der Kolonie des
Deutschen Primatenzentrums (DPZ) in Göttingen. Es handelte sich dabei um 19
Tiere. Weiterhin wurde eine Gruppe von 6 Weißbüschelaffen aus dem
Krallenaffenbestand der Firma Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG in
Biberach an der Riss untersucht, bei denen ebenfalls ein WMS diagnostiziert wurde
(Tab. 1).
Als Kontrolltiere für die vergleichenden pathohistologischen und
immunhistochemischen Untersuchungen des Darmtraktes dienten 3 klinisch gesunde
Weißbüschelaffen, die freundlicherweise von der Ethologischen Station der
Anthropologischen Einrichtungen des Instituts für Zoologie, Anthropologie und
Entwicklungsbiologie der Universität Göttingen zur Verfügung gestellt wurden (Tab.
1). Diese Tiere wurden im Rahmen von umfangreichen Organentnahmen für andere
wissenschaftliche Untersuchungen euthanasiert und standen daher für dieses
Projekt ebenfalls zur Verfügung. Ausführliche Angaben zur Haltung und Fütterung
dieser Weißbüschelaffen finden sich in der Dissertation CAGLAR (2005).
Die Weißbüschelaffenkolonie des DPZ besteht derzeit aus etwa 600 Tieren und ist
seit der Etablierung im Jahre 1984 im Tierhaus des DPZ untergebracht. Die
Weißbüschelaffen werden sowohl zu Zuchtzwecken als auch für wissenschaftliche
Untersuchungen (v. a. in der Reproduktionsmedizin) verwendet und sind
ausschließlich in einem Indoor-Haltungssystem mit einzelnen Tiereinheiten
untergebracht. Die in dieser Arbeit untersuchten Tiere stammen aus Einheiten, die
nur über ein Schleusensystem betreten werden können und aus 8 Räumen
Eigene Untersuchungen 37
bestehen, die jeweils 12 m2 groß sind. Weiterhin steht ein Raum für tiermedizinische
Zwecke und eine Küchenzeile für die Zubereitung der Mahlzeiten zur Verfügung.
Die Struktur der einzelnen Räume ist vom Haltungszweck abhängig. In der
Zuchtkolonie befinden sich in jedem Raum bis zu 10 Käfige, wobei zwischen
begehbaren Käfigen (1 m Tiefe x 1 m Breite x 2,5 m Höhe) und nicht begehbaren
Käfigen (80 cm Tiefe x 50 cm Breite x 127 cm Höhe) zu unterscheiden ist. Die Tiere
werden als Paare oder in Familien gehalten. Daneben gibt es Räumlichkeiten, die als
Kindergärten eingerichtet sind. Pro Raum können 2 Kindergartengruppen in
Raumkäfigen mit einer Grundfläche von 6 m2 untergebracht werden. Nach der
Geburt bleiben die Jungtiere bei ihren Eltern, bis sie 3 Monate alt sind. Anschließend
werden sie, mit Ausnahme eines bei den Eltern bis zur Zuchtreife verbleibenden
Jungtieres, in den Kindergarten verbracht.
In den Räumlichkeiten der Versuchstierkolonie werden die Tiere paarweise gehalten.
Jedem Paar steht ein Käfig von 70 cm Tiefe, 50 cm Breite und 100 cm Höhe zur
Verfügung.
Alle Käfigtypen sind mit Baumstämmen und Ästen als Klettereinrichtungen
ausgerüstet. Während in der Zuchtkolonie Nestboxen aus Holz Verwendung finden,
sind in der Versuchstierkolonie Metallnestboxen mit Schiebetür in die
Käfigkonstruktion integriert. Die künstliche Beleuchtung in den Tiereinheiten beginnt
um 6:30 Uhr und endet um 19:00 Uhr. In den einzelnen Räumen herrscht eine
konstante Temperatur von 25° C. Die Luftfeuchtigkeit beträgt 60 %.
Die Fütterung der Weißbüschelaffen umfasst 2 Mahlzeiten pro Tag (außer sonntags).
Von Montag bis Samstag werden die Tiere jeweils um 7:00 Uhr und um 12:00 Uhr
gefüttert. Sonntags findet nur eine Fütterung um 7:00 Uhr statt. Wasser bzw. Tee
wird zu jeder Zeit ad libitum angeboten.
Im Rahmen der Morgenfütterung bekommen die Tiere einen Brei, der pro Tier aus 10
38 Eigene Untersuchungen
g Quark, 0,1 ml Weizenkeimöl, 0,12 g Vitamin C, 0,1 ml Vitamin D3, 3,5 ml
Karottensaft, 0,3 g Protevit, 0,09 g Bierhefe, 0,25 g Mineralstoffmischung, 1,5 g
Haferflocken und 0,13 g Kalzoral besteht und mit Reisschleim oder Kinderbrei (Fa.
Milupa, Friedrichsdorf) aus dem Humanbereich vermischt wird.
Die Mittagsfütterung variiert im Verlauf der Woche:
Montag: Bananen, Gemüse der Saison und Eier
Dienstag: Bananen, Gemüse der Saison und Zwieback
Mittwoch: Bananen, Gemüse der Saison, Hühnerfleisch und Katzenfutter
Donnerstag: Bananen, Obst der Saison, Reis und Nudeln
Freitag: Bananen, Gemüse der Saison und Eier
Samstag: Krallenaffenpellets (Alleinfutter für Marmosetten, Ssniff Spezialdiäten
GmbH, Soest), Katzenhartfutter, Körnermischung und Brot
Sonntags bekommen die Tiere keinen Brei, sondern Bananen, Gemüse der Saison,
Hüttenkäse und Mehlwürmer.
Die Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim sind in Käfigen von 90 cm
Länge, 54 cm Breite und 74 cm Höhe untergebracht. Die Käfige sind jeweils
ausgestattet mit 2 Sitzstangen, 2 Hängematten und 2 Kunststoffröhren, welche den
Tieren als Versteck dienen. Die Weißbüschelaffen werden entweder paarweise oder
einzeln gehalten, wobei die Tiere in Einzelhaltung Sichtkontakt zu ihren Nachbarn
haben. Die Raumtemperatur beträgt 24,5 bis 25° C, und die Luftfeuchtigkeit liegt ca.
50 %. Die Beleuchtung in den Tiereinheiten fährt täglich ab 5:30 Uhr langsam hoch
und unterliegt einem 12-Stunden-Rhythmus.
Den Weißbüschelaffen werden Pellets ad libitum gefüttert. Morgens werden die
Futterbecher gereinigt und neu aufgefüllt. Zusätzlich zu dem pelletierten Futtermittel
wird täglich ein Futterbrei (Fa. Kliba Nafag, Kaiseraugst) gereicht, welcher mit
Enteroferment und Gummi arabicum angereichert ist. Darüber hinaus werden täglich
Eigene Untersuchungen 39
kleine Stückchen gekochtes Hühnerfleisch und Zwieback als Leckerei angeboten.
Eine zweite Mahlzeit (ca. 11:00 Uhr) besteht aus ca. 1 cm großen Apfel- und
Bananenstücken, von denen jedes Tier 1 Stück erhält. Einmal wöchentlich wird zur
Nahrungsergänzung Nutrical (Fa. Albrecht) angeboten (1 Streifen von 1 cm pro Tier).
Der Untersuchungszeitraum der vorliegenden Studie umfasst das Jahr 2003 und
2004. In die Untersuchung wurden alle Weißbüschelaffen einbezogen, die innerhalb
dieses Zeitraums von 2 Jahren intra vitam klinische Anzeichen einer WMS-
Erkrankung zeigten. Dabei wurde in erster Linie der Gewichtsverlauf der Tiere
berücksichtigt. Weißbüschelaffen wurden als Waster eingestuft, wenn folgende
Kriterien erfüllt waren:
• bei adulten Tieren: Gewichtsverlust von mehr als 50 g innerhalb weniger Tage
oder langsam fortschreitende Gewichtsreduktion (mehrere Wochen bzw. Monate)
mit finalen Gewichten von weniger als 300 g bei erhaltener Futteraufnahme
oder
• bei juvenilen bzw. subadulten Tieren (männlich: 16 Monate, weiblich: 12 Monate
(ROWE 1996)): mangelhafte Gewichtsentwicklung sowie Entwicklungsstörungen
und
• Therapieresistenz bzw. Auftreten von Rezidiven nach kurzfristigem
therapeutischen Erfolg.
Konnten bei der Sektion und den routinemäßig durchgeführten pathohistologischen
Untersuchungen morphologische Anzeichen einer Enteritis, aber keine weiteren,
spezifischen Krankheitsursachen nachgewiesen werden, galt der Verdacht auf das
Vorliegen eines WMS als bestätigt. Bei zwei Tieren (G 6758 und G 6944), die
zunächst anhand von klinischen Kriterien als Waster eingestuft wurden, wurden im
Verlauf der postmortalen Untersuchungen neoplastische Veränderungen festgestellt,
die mit dem klinisch manifesten Gewichtsverlust in kausalem Zusammenhang
standen. In beiden Fällen lag ein malignes Lymphom als Krankheitsursache vor.
40 Eigene Untersuchungen
Tab. 1: Tiermaterial.
G-Nr. Tier-Nr. Name Herkunft Geburts-datum Geschlecht Gewicht bei
Sektion
6634 11404 Barbarossa DPZ 10.01.2002 männlich 221 g6650 10835 Elisabeth DPZ 15.03.2001 weiblich 321 g6687 11530 Toska DPZ 22.08.2000 weiblich 290 g6688 10631 Osmene DPZ 25.11.2000 weiblich 321 g6694 8912 Berry DPZ 21.09.1997 männlich 224 g6787 7417 Vossi DPZ 18.12.1994 männlich 202 g6795 8837 Osmose DPZ 06.08.1997 weiblich 286 g6821 9891 Babette DPZ 09.08.1999 weiblich 244 g6859 8939 Valeska DPZ 31.10.1997 weiblich 330 g6869 11005 Kai DPZ 28.05.2001 männlich 273 g6905 11081 Analog DPZ 15.07.2001 männlich 266 g6931 9496 Inka DPZ 12.11.1998 weiblich 292 g6940 9318 Abuela DPZ 12.07.1998 weiblich 305 g7035 10103 Inga DPZ 12.01.2000 weiblich 277g7079 10158 Birger DPZ 26.01.2000 männlich 249 g7092 10456 Emanuela DPZ 07.08.2000 weiblich 264 g7096 9281 Arabella DPZ 23.06.1998 weiblich 272 g6944 10752 Vitus DPZ 25.01.2001 männlich 310 g6758 10197 Leda DPZ 27.02.2000 weiblich 246 g
G-Nr. Tier-Nr. Geburts-datum Geschlecht Gewicht bei
Sektion
7062 BI 0319 20.06.2003 männlich 244 g7063 BI 0031 03.09.2000 männlich 206 g7064 BI 03/09 14.05.2003 männlich 260 g7065 BI 0336 16.12.2003 weiblich 248 g7066 BI 0371 02.06.2003 männlich 248 g7067 BI A455 07.07.2003 männlich 226 g
G-Nr. Tier-Nr. Geburts-datum Geschlecht Gewicht bei
Sektion
6699* 1244 29.09.2002 männlich 320 g6701* 1231 18.04.2002 männlich 313 g6707* 1222 07.01.2002 weiblich 333 g
Boehringer-IngelheimBoehringer-Ingelheim
Herkunft
Boehringer-IngelheimBoehringer-IngelheimBoehringer-IngelheimBoehringer-Ingelheim
Herkunft
Anthropol. Institut
Anthropol. InstitutAnthropol. Institut
* Kontrolltiere
3.1.2 Tierärztliche Bestandsbetreuung
Alle Tiere der Weißbüschelaffenkolonie des Deutschen Primatenzentrums sind
gegen Bordetellen und Rotlauf geimpft. Die Kolonie wird von speziell ausgebildeten
Eigene Untersuchungen 41
Tierärzten und Tierärztinnen betreut und unterliegt regelmäßigen
Gesundheitskontrollen, die in erster Linie die Untersuchung von Kotproben und die
Kontrolle des Gewichtsverlaufes umfassen. Quartalsweise werden in den
Tiereinheiten Sammelkotproben genommen und bakteriologisch und parasitologisch
untersucht. Bei auffälligen Befunden oder in Verdachtsfällen schließen sich an das
Screening der jeweiligen Tiergruppen Einzeltieruntersuchungen an. Anstelle von
Kotproben werden bei der Untersuchung einzelner Individuen Rektaltupferproben
verwendet.
Bei allen Weißbüschelaffen wird durch regelmäßiges Wiegen der Gewichtsverlauf
kontrolliert. Gewichtskontrollen finden insbesondere bei weiblichen Tieren nach der
Geburt und im Rahmen von Umsetzaktionen statt. Besteht aufgrund der
adspektorischen Untersuchung die Vermutung, dass ein Tier an Gewicht verloren
hat, wird in den nächsten Tagen und Wochen wiederholt in kürzeren Abständen das
Gewicht überprüft.
Gewichtsdaten und Ergebnisse der routinemäßigen bakteriologischen und
parasitologischen Kotuntersuchungen aus den vergangenen 12 Monaten standen
auch für die in diese Studie einbezogenen Weißbüschelaffen zur Verfügung. Bei den
meisten Tieren der Untersuchungsgruppe wurden im Verlauf des
Krankheitsgeschehens von den betreuenden Tierärzten bzw. Tierärztinnen
Therapieversuche durchgeführt. Therapeutische Maßnahmen bei Wastern umfassen
die Verabreichung von Extrafutter, Amynin, Vitamin D3 und Paramunitätsinducern.
Zur Behandlung von wässrigem oder blutigem Kot wird Enrofloxacin eingesetzt.
Bei den Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim werden halbjährig
Kotproben auf Parasiten und pathogene Erreger untersucht. Außerdem wird der
Gewichtsverlauf in regelmäßigen Abständen kontrolliert. Auf die Ergebnisse von
Kotprobenuntersuchungen der Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim
konnte in der vorliegenden Studie nicht zurückgegriffen werden. Für alle 6 Tiere
lagen Gewichtsdaten vor. Therapeutische Maßnahmen wurden nicht ergriffen.
42 Eigene Untersuchungen
3.1.3 Postmortale Untersuchung und Gewinnung von Probenmaterial
Aufgrund von zunehmender Schwäche und progressivem Gewichtsverlust war bei
den Weißbüschelaffen dieser Studie im fortgeschrittenen Krankheitsstadium aus
ethischen Gründen die Euthanasie indiziert. Nur ein erkranktes Tier (G 6787)
verstarb spontan. Bei allen Weißbüschelaffen mit klinischer WMS-Symptomatik
wurde eine umfangreiche postmortale Untersuchung durchgeführt. Im Rahmen des
routinemäßig durchgeführten Sektionsganges wurde jedes Tier makroskopisch
beurteilt, und die Befunde wurden in einem Sektionsprotokoll festgehalten.
Außerdem wurden bei der Sektion Proben für weitere pathomorphologische
Untersuchungen entnommen. Zu diesem Zweck wurde ein umfangreiches
Probenspektrum aus verschiedenen Organsystemen gewonnen und in 10 %igem
Formalin fixiert. Darüber hinaus wurden bei den 6 Weißbüschelaffen der Firma
Boehringer Ingelheim Hautbioptate mit Hilfe einer Hautstanze aus dem Bereich des
Oberarms, des Oberschenkels und des Schwanzes entnommen und ebenfalls in 10
%igem Formalin fixiert.
Nach der vollständigen Exenteration des Darmtraktes wurden die einzelnen
Darmabschnitte (Duodenum, Jejunum, Ileum, Zäkum, Kolon und Rektum) abgesetzt
und vorsichtig von Inhaltsstoffen befreit. Aus jedem Darmabschnitt wurden 3
Gewebeproben zugeschnitten und auf 3 verschiedene Medien verteilt. Für
histologische und immunhistochemische Untersuchungen wurden die Darmproben
als Ring belassen und in 10 %igem bzw. 4 %igem neutral gepufferten Formaldehyd
fixiert. Die übrigen Gewebeproben des Darms wurden in flüssigem Stickstoff
eingefroren und bei -80° C asserviert. Darüber hinaus wurde ein etwa erbsengroßes
Stück Dickdarmkot eingefroren.
3.1.4 Präparation für die lichtmikroskopische Untersuchung
Die im Rahmen der Sektion entnommenen Gewebeproben wurden unmittelbar nach
der Entnahme in 10 %igem neutral gepufferten Formaldehyd für mindestens 24
Eigene Untersuchungen 43
Stunden fixiert. Anschließend wurden sie zugeschnitten und in Einbettkassetten
gelegt. Die Paraffineinbettung erfolgte automatisch im Hypercenter XP (Fa. Thermo
Shandon, Frankfurt am Main) nach laborüblichem Protokoll (siehe Anhang). Mit dem
Schlittenmikrotom (Mikrotom HM 400R, Fa. Microm, Walldorf) wurden ca. 3 μm dicke
Gewebeschnitte angefertigt. Die Schnitte wurden mit Hilfe eines in einem Eisbad
angefeuchteten Durchschlagpapierstreifens vom Paraffinblock abgenommen und
zum Strecken in ein 40° C warmes Wasserbad überführt. Anschließend wurden die
Schnitte auf einen Standardobjektträger aufgezogen und über Nacht bei 37° C im
Wärmeschrank getrocknet. Bis zur Verwendung wurden sie bei Raumtemperatur
aufbewahrt. Die angefertigten Paraffinschnitte wurden zur histologischen Beurteilung
mit Hämatoxilin-Eosin (H.&E.) gefärbt. Die Färbungen erfolgten im Färbeautomaten
(Varistain Gemini, Fa. Thermo Shandon, Frankfurt am Main) nach dem im Anhang
aufgeführten Protokoll.
Die Darmproben, die nach der Entnahme in 4 %igem neutral gepufferten
Formaldehyd fixiert wurden, wurden im Anschluss an die Paraffineinbettung nach
Dünndarm- und Dickdarmlokalisationen eingeteilt und auf zwei Paraffinblöcke
verteilt. Für den Nachweis einer Hämosiderose wurde bei jedem Weißbüschelaffen
von Leber, Niere und Milz eine Spezialfärbung in Form einer Berliner-Blau-Reaktion
zum Eisennachweis durchgeführt. Weitere Spezialfärbungen wurden von
ausgewählten Präparaten im Zusammenhang mit besonderen Fragestellungen zur
Identifizierung bestimmter unklarer Strukturen angefertigt. Zu diesen
Spezialfärbungen gehörten die PAS-Reaktion, die Giemsa-Färbung und die von
Kossa-Färbung. Die Protokolle sind im Anhang aufgeführt.
3.1.5 Befunderhebung und Dokumentation
Für jeden Weißbüschelaffen wurden die pathohistologischen Befunde des
routinemäßig entnommenen Organspektrums in einem Untersuchungsprotokoll
dokumentiert. Darüber hinaus wurden die Darmproben der verschiedenen
Lokalisationen des Intestinaltraktes einer ausführlichen histologischen Untersuchung
44 Eigene Untersuchungen
und vergleichenden Betrachtung unterzogen. Die detaillierte Beschreibung der
entzündlichen Veränderungen diente in erster Linie der Klassifizierung und
graduellen Einstufung der Enteritiden in Anlehnung an die Arbeiten von CHALIFOUX
et al. (1982) und CLAPP et al. (1983). Zur besseren Übersicht und Vergleichbarkeit
wurden zu diesem Zweck die Objektträger mit den H.&E.-gefärbten Paraffinschnitten
aus 4 %igem neutral gepufferten Formaldehyd verwendet. Zur Charakterisierung der
Entzündungsreaktion wurde jede Darmlokalisation lichtmikroskopisch bei 400-facher
Vergrößerung nach folgenden Kriterien untersucht (Tab. 2):
• mononukleäre Zellen in der Lamina propria,
• polymorphnukleäre Zellen in der Lamina propria,
• Epithelatypie,
• Kryptabszesse,
• Zotten-/Kryptmorphologie,
• Ulzerationen,
• GALT-Hyperplasie bzw. -Aktivierung und
• weitere Befunde
Mit Hilfe des Tabellenkalkulationsprogramms Microsoft Excel 97 wurden die
Ergebnisse der semiquantitativen pathohistologischen Untersuchung in Tabellen
übertragen und als Diagramme dargestellt.
Eigene Untersuchungen 45
Tab. 2: Bewertungschema für die semiquantitative Beurteilung entzündlicher Veränderungen in der Darmschleimhaut.
GradMononukleäre Zellen in der
Lamina propria
Polymorphnukleäre Zellen in der Lamina
propriaKryptabszesse GALT-
Hyperplasie Ulzerationen
neg.
keine oder vereinzelt (< 10) mononukleäre Zellen in der L.
propria
keine polymorphnukleären
Zellen in der L. propria nachweisbar
keine Kryptabszesse nachweisbar
keine Hyperplasie oder Aktivierung des
GALT nachweisbar
keine Ulzerationen nachweisbar
+ minimal
wenige (> 10) mononukleäre Zellen in der L.
propria
vereinzelt polymorphkernige
Zellen in der L. propria
1 - 2 Kryptabszesse
pro Gesichtsfeld
mäßige Hyperplasie
ohne Follikelzentrum-
Reaktion
fokale Erosion ohne
entzündliche Reaktion
++ geringgradig
mäßig dichte Infiltration mit
mononukleären Zellen in der L.
propria
mäßig dichte Infiltration mit
polymorphkernigen Zellen in der L.
propria
mäßige Anzahl von
Kryptabszessen pro Gesichtsfeld
mäßige Hyperplasie mit angedeuteter
Follikelzentrum-Reaktion
fokale Ulzeration mit
mäßiger entzündlicher
Reaktion
+++ mittelgradig
dichte Infiltration mit
mononukleären Zellen in der L.
propria
dichte Infiltration mit polymorphkernigen
Zellen in der L. propria
zahlreiche Kryptabszesse in
einem Gesichtsfeld
ausgeprägte Hyperplasie mit
deutlichen Follikelzentren
fokale Ulzeration mit ausgeprägter Entzündung
++++ hochgradig
massenhaft mononukleäre Zellen in der L.
propria
massenhaft polymorphkernige
Zellen in der L. propria
Kryptabszesse in nahezu allen Kryptlumina
massive Hyperplasie mit ausgeprägten Follikelzentren und schmaler
Randzone
multifokale Ulzerationen mit
ausgeprägter entzündlicher
Reaktion
Neben der semiquantitativen Analyse bestimmter Entzündungskriterien erfolgte
außerdem eine deskriptive Beschreibung und Dokumentation von Epithelatypie,
Zotten- und Kryptmorpholgie und weiteren Befunden. Unter den Begriff der
Epithelatypie fielen in erster Linie degenerative Veränderungen der Epithelzellen, die
sich in Form von Karyorrhexis, Karyolyse, Kernpyknose und Hyperchromasie
äußerten. Epithelien mit derartigen Einzelzellveränderungen zeigten als weitere
Kennzeichen eine variierende Zellgröße und -morphologie sowie eine Abflachung
des Epithels. Die Beurteilung der Zotten- bzw. Krypten umfasste zum einen die
Bewertung der Mitoserate und der Becherzellzahl. Während eine Erhöhung oder
46 Eigene Untersuchungen
Erniedrigung der Anzahl an Becherzellen im direkten Vergleich mit einem
Kontrollschnitt beurteilt wurde, wurde eine erhöhte Mitoserate bei mehr als 20
Mitosen/ Gesichtsfeld angenommen. Desweiteren wurden die Krypten und die Zotten
hinsichtlich ihrer Morphologie untersucht. Zu den Veränderungen der Kryptarchitektur
gehörten Abknickungen, Verzweigungen und Knospungen sowie Atrophie in Länge
und Zahl. Veränderungen der Zottenmorphologie bestanden in Fusionen und
Atrophie in Länge und Zahl. Weitere histopathologische Befunde, die nicht von den
Untersuchungsparametern erfasst wurden, wurden ebenfalls deskriptiv beschrieben
und dokumentiert.
Auf der Grundlage der erhobenen Daten erfolgte eine Klassifizierung und graduelle
Einstufung der Enteritis in den jeweiligen Darmlokalisationen. Die Beurteilung setzte
sich aus Schweregrad und zeitlichem Verlauf der entzündlichen Reaktion zusammen
und basierte in erster Linie auf der mononukleären und polymorphnukleären
Entzündungszellinfiltration. Die weiteren Parameter der histopathologischen
Untersuchung wurden als assoziierte bzw. sekundäre Erscheinungen angesehen
und wurden nur bei unklarer Diagnose zur Beurteilung herangezogen. Hinsichtlich
des Schweregrades wurde in Anlehnung an die Einteilung bei der Befunderhebung
(1+ bis 4+) zwischen minimalen, geringgradigen, mittelgradigen und hochgradigen
Enteritiden unterschieden. Der zeitliche Verlauf der Entzündung richtete sich nach
der Zusammensetzung der entzündlichen Zellinfiltration in der Lamina propria. Es
fand eine Einteilung in akute, chronische und chronisch aktive Enteritiden
(chronische Enteritis mit akuter Komponente) statt nach den in Tabelle 3
aufgeführten Kriterien.
Eigene Untersuchungen 47
Tab. 3: Kriterien für den zeitlichen Verlauf der Enteritis.
Polymorphkernige Granulozyten Mononukleäre Zellen
akut 2+ oder mehr keine oder 1+ bis 4+
chronisch keine 1+ oder mehr
chronisch aktiv 1+ und/ oder Nachweis von Kryptabszessen 1+ oder mehr
Entzündungszellen
Die photographische Dokumentation wurde mit dem Lichtmikroskop Axioplan 2
Imaging und der Kamera AxioCam HRc der Firma Zeiss in Oberkochen durchgeführt.
3.1.6 Immunhistochemische Untersuchungen
Um die mononukleäre Entzündungsreaktion in den Gewebeproben aus dem
Intestinaltrakt näher zu charakterisieren, wurden immunhistochemische
Untersuchungen an den Paraffinschnitten aus 4 %igem neutral gepufferten
Formaldehyd unter Verwendung der SABC-Methode (Streptavidin-Biotin-Komplex)
mit DAB als Chromogen vorgenommen. Als Primärantikörper kamen der T-
Lymphozyten markierende CD 3-Antikörper Rabbit Anti-Human T Cell (Fa.
DakoCytomation, Hamburg), der B-Lymphozyten markierende CD 20-Antikörper
Monoclonal Mouse Anti-Human B Cell (Fa. DakoCytomation, Hamburg) sowie der
Phagozyten spezifische Antikörper Monoclonal Mouse Anti-Human
Myeloid/Histiocyte Antigen (MAC 387; Fa. DakoCytomation, Hamburg) zum Einsatz.
Die Auswahl des Sekundärantikörpers richtete sich nach den Angaben des
Herstellers (VENTANA Enhanced Biotinylierter Sekundärantikörper).
Die CD 3-, CD 20- und MAC-Markierung wurde an entparaffinierten und rehydrierten
Schnitten durchgeführt. Zur Demaskierung der CD 3- und CD 20 -Antigene wurden
die Schnitte in Zitratpuffer einer Hitzevorbehandlung im Schnellkochtopf unterzogen.
Die immunhistochemische Markierung des MAC-Antigens erforderte dagegen eine
Protease-Vorbehandlung. Anschließend wurden die Schnitte in das NexES-IHC-
48 Eigene Untersuchungen
Färbemodul (Fa. VENTANA, Illkirch, Frankreich) eingespannt, wo alle weiteren
Reaktionen stattfanden. Pro Versuchsdurchlauf konnten 18 Proben sowie eine
Positiv- und eine Negativkontrolle im NexES-IHC-Färbemodul bearbeitet werden. Mit
Hilfe der mitgeführten Kontrollschnitte sollte das Auftreten unspezifischer Bindungen
ausgeschlossen werden. Zur Herstellung der Negativkontrollen wurde anstelle des
Primärantikörpers Phosphatpuffer (PBS) eingesetzt. Als Positivkontrolle wurde
Lymphknotengewebe vom Weißbüschelaffen (Callithrix jacchus) verwendet. Die
einzelnen Reaktionsschritte sind im Anhang detailliert beschrieben.
Die Auswertung erfolgte am Lichtmikroskop durch Auszählung der markierten Zellen
bei 400facher Vergrößerung in einer Bildebene. Aus dem jeweiligen histologischen
Schnitt wurde ein repräsentatives Gesichtsfeld ausgewählt, in dem die markierten
Zellen (CD 20 und MAC) vollständig ausgezählt wurden. Die quantitative
Bestimmung der T-Lymphozyten (CD 3) erfolgte aufgrund der großen Anzahl an
markierten Zellen nicht in absoluten Zahlen. Stattdessen wurden die Befunde nach
Zellzahlen gestaffelt ausgedrückt und Zahlengruppen in Schritten von ca. 150 Zellen
(<150, 150-300, 300-450, 450-600 und >600 Zellen) zugeordnet. Lymphfollikel als
Einrichtungen des lymphatischen Systems wurden bei der Auszählung nicht
berücksichtigt. Mit Hilfe des Tabellenkalkulationsprogramms Microsoft Excel 97
wurden die Ergebnisse der Auszählung in Tabellen übertragen und als Diagramme
dargestellt. Für die vergleichende graphische Darstellung der immunhistochemischen
Befunde musste den jeweiligen Zahlengruppen der CD 3 positiven Zellen ein
mittlerer Zahlenwert zugeordnet werden (<150 => 75, 150-300 => 225, 300-450 =>
375, 450-600 => 525 und >600 => 675).
3.1.7 Blutuntersuchung
Bei allen Weißbüschelaffen mit Verdacht auf WMS wurden hämatologische und
serologische Untersuchungen durchgeführt mit dem Ziel, charakteristische
Veränderungen der Blutparameter bestimmen und erkrankte Tiere möglichst
frühzeitig identifizieren zu können. Von fast allen erkrankten Tieren konnte vor der
Eigene Untersuchungen 49
Euthanasie Blut durch Punktion des Herzens gewonnen werden. Dazu wurden die
Tiere mit der sogenannten „Göttinger Mischung II“ in einer Dosierung von 0,1 ml/kg
KGW (i. m.) in Narkose gelegt. Für die Erstellung eines Differentialblutbildes mit Hilfe
einer Neubauer - Zählkammer wurde einem Teil der Blutprobe Kalzium-
Ethylendiamintetraazetat (Ca-EDTA) als Antikoagulanz zugesetzt. Das für
serologische Untersuchungen bestimmte Blut wurde kurz nach der Entnahme
zentrifugiert, und das Serum wurde im Zentrallabor des Universitätsklinikums der
Georg-August Universität in Göttingen auf diverse klinisch-chemische Parameter
untersucht. Bei einigen Tieren wurde außerdem das Differentialblutbild vom
Zentrallabor des Klinikums angefertigt.
3.1.8 Urinuntersuchung
Bei 2 Weißbüschelaffen (G 7092, G 7096) aus der DPZ - Untersuchungsgruppe
wurden Harnuntersuchungen durchgeführt. Gemessen wurde der Gehalt an
Gesamtprotein, Kreatinin und Albumin im Urin.
3.1.9 Mikrobiologische und parasitologische Untersuchung
Um die Beteiligung von Infektionserregern am Krankheitsgeschehen zu ermitteln,
wurde bei jedem Tier mit Verdacht auf WMS eine bakteriologische Untersuchung von
Dünn- und Dickdarm, Leber, Milz, Niere, Herz und Lunge sowie eine parasitologische
Untersuchung von Dünndarm- und Dickdarminhalt durchgeführt.
Für den kulturellen Bakteriennachweis wurde zu Beginn jeder Sektion nach
Eröffnung des Tierkörpers aus einer frischen Inzision des jeweiligen Organs mit Hilfe
einer sterilen Impföse Organmaterial gewonnen und auf einer Blutagarplatte
fraktioniert ausgestrichen. Kotmaterial aus Dünn- und Dickdarm wurde darüber
hinaus auf einer Salmonellen-Platte, einer Campylobacter-Platte und auf
MacConkey-Agar ausgestrichen und in Salmonellen-Anreicherungs-Bouillon
verbracht, um ein möglichst weites intestinales Keimspektrum erfassen zu können.
50 Eigene Untersuchungen
Die Rezepte zum Ansetzen der Nährmedien sind im Anhang aufgeführt. Die
Blutagarplatten, die MacConkey-Agar-Platten und die Salmonellen-Platten wurden
für 24 Stunden bei 37° C bebrütet und anschließend beurteilt. Bei negativem
Ergebnis fand eine zweite Beurteilung nach weiteren 24 Stunden im Wärmeschrank
bei 37° C statt. Die Agarplatten zum Nachweis von Campylobacter sp. wurden für 48
Stunden bei 42° C unter mikroaerophilen Bedingungen unter Verwendung des
CampyPak Plus (Becton Dickinson, Heidelberg) bebrütet. Die Salmonellen-
Anreicherungs-Bouillon wurde nach 24 Stunden auf einer Salmonellen-Platte
ausgestrichen. Die Beurteilung erfolgte nach weiteren 24 und 48 Stunden. Für die
Untersuchung auf anaerob wachsende Bakterien stand ein ELISA zum spezifischen
Nachweis von Clostridium difficile zur Verfügung (ProSpecT® II Clostridium difficile
Toxin A Microplate Assay, Fa.Remel, Lenexa, USA). Im Falle des Nachweises eines
hämolytischen E. coli erfolgte eine Typisierung des E. coli - Stammes im Nationalen
Referenzzentrum für Salmonellen und andere Enteritiserreger des Robert Koch -
Instituts in Wernigerode.
Die parasitologische Untersuchung erfolgte an Nativpräparaten, für die jeweils eine
kleine Menge Dünndarm- bzw. Dickdarmkot mit einem Tropfen Wasser versetzt und
mit einem Deckglas bedeckt wurde. Die Präparate wurden lichtmikroskopisch
ausgewertet, beginnend bei 10facher Vergrößerung. Bei Verdacht auf das
Vorhandensein von Würmern wurde zunächst mit 2,5facher Vergrößerung
mikroskopiert. Falls in dem Nativpräparat Amöben oder andere Protozoen
nachgewiesen werden konnten, wurde eine Färbung mit Methylenblau und mit
Lugolscher Lösung durchgeführt, um die parasitären Strukturen anhand von
morphologischen Kriterien und nach der Art der Fortbewegung eindeutig
identifizieren zu können. Zum Nachweis von Kryptosporidien im Kot wurde die
Kinyoun-Färbung (modifizierte Ziehl-Neelsen-Färbung) verwendet. Bestand aufgrund
der lichtmikroskopischen Beurteilung der angefertigten Nativpräparate der Verdacht
auf das Vorliegen von Amöben oder Kryptosporidien, so wurde in einzelnen Fällen
ein ELISA zum spezifischen Nachweis von Entamoeba histolytica und
Cryptosporidium sp. nach den Angaben des Herstellers durchgeführt (ProSpecT®
Eigene Untersuchungen 51
Cryptosporidium Microplate Assay, ProSpecT® Entamoeba histolytica Microplate
Assay, Fa. Alexon-Trend, Minnesota, USA). Außerdem wurde bei allen
Weißbüschelaffen ein ELISA zum spezifischen Nachweis von Giardia lamblia
durchgeführt (ProSpecT® Giardia Microplate Assay, Fa. Alexon-Trend, Minnesota,
USA).
3.1.10 Stammbaumanalysen
Zur Abklärung der Beteiligung hereditärer Faktoren an der Ätiologie des Wasting
Marmoset Syndroms wurden für die Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie
Familienstammbäume erstellt und auf Merkmalsträger (WMS) untersucht. Im
Anschluss an die Identifizierung von Vorfahren mit WMS wurden für 3 ausgewählte
Weißbüschelaffen - Paare Stammbäume mit allen Nachkommen der folgenden zwei
Generationen erstellt. Dabei richtete sich die Auswahl der Paare nach der
Zusammensetzung hinsichtlich des untersuchten Merkmals (WMS). Das erste Paar
bestand aus zwei an WMS erkrankten Weißbüschelaffen. Das zweite Paar setzte
sich aus einem Tier mit WMS und einem nicht betroffenen Tier zusammen, und das
dritte Paar enthielt keine Merkmalsträger. Auf der Grundlage der Annahme, dass es
bei dem Paar mit einem erkrankten Tier bzw. mit zwei erkrankten Tieren im Vergleich
zu dem Paar ohne Merkmalsträger im Falle einer genetischen Komponente zu einer
Akkumulation von Krankheitsfällen in der Nachkommenschaft kommen müsste,
erfolgte eine vergleichende Betrachtung der Familienstammbäume der 3
Weißbüschelaffen- Paare.
Die entspechenden Daten (Tiernummern) über die Abstammung der einzelnen
Weißbüschelaffen wurden dem Datenerfasssungsprogramm für das
Zuchtmanagement der Weißbüschelaffenkolonie des DPZ (FoxPro) entnommen. Die
Identifizierung von Wastern innerhalb dieser Stammbäume erfolgte anhand der
Daten aus einer vorangegangen Dissertation, in deren Rahmen retrospektive
Untersuchungen über Erkrankungen in der Weißbüschelaffenkolonie des DPZ
durchgeführt wurden (QUOHS 2003).
52 Eigene Untersuchungen
3.2 Ergebnisse
Bei der Auswertung der Ergebnisse dieser Studie wurde zwischen den
Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie und den Tieren der Firma Boehringer Ingelheim
eine Abgrenzung vorgenommen. Eine unabhängige Betrachtung und
Gegenüberstellung der erzielten Ergebnisse erschien insbesondere sinnvoll vor dem
Hintergrund, dass die Weißbüschelaffen der beiden Gruppen zu Lebzeiten
unterschiedlichen äußeren Bedingungen ausgesetzt waren (Fütterung,
Unterbringung, soziale Faktoren etc.), und eine Beteiligung von Umwelt- und
Sozialfaktoren an der Ätiologie des WMS bislang weder bestätigt noch
ausgeschlossen werden konnte.
3.2.1 Allgemeine Daten und klinische Verlaufsuntersuchungen
Bei den 19 untersuchten Weißbüschelaffen aus dem DPZ handelte es um adulte
Tiere im Alter zwischen 1 und 9 Jahren. Aus Abbildung 1 ist ersichtlich, dass die
meisten Weißbüschelaffen mit WMS den Alterskategorien zwischen 3 und 5 Jahren
sowie 6 und 8 Jahren angehörten. Insgesamt 3 Tiere hatten ein Alter von weniger als
2 Jahren, und ein Tier war älter als 9 Jahre. Die Analyse der Geschlechtsverteilung
ergab für die Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie eine Verschiebung in Richtung
des weiblichen Geschlechts mit 7 männlichen und 12 weiblichen Weißbüschelaffen.
Eigene Untersuchungen 53
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
< 2 Jahre 3-5 Jahre 6-8 Jahre > 9 Jahre
Alter der Tiere
Anz
ahl d
er T
iere Gesamtzahl
weiblich
männlich
Abb. 1: Alters- und Geschlechtsverteilung bei den Weißbüschelaffen mit WMS aus dem DPZ.
Von den 6 Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim war ein Tier 4 Jahre
alt. Das Alter der übrigen Weißbüschelaffen lag zwischen 10 und 16 Monaten,
weshalb diese Tiere als juvenil bzw. präadult einzustufen sind. Im Gegensatz zu den
Tieren aus der DPZ - Kolonie waren fast alle Tiere (5) der Firma Boehringer
Ingelheim männlichen Geschlechts, während nur ein Tier weiblich war.
Das entscheidende Kriterium bei der klinischen Beurteilung der Weißbüschelaffen
mit WMS-Verdacht war die Gewichtsentwicklung der Tiere. Alle untersuchten
Weißbüschelaffen aus dem DPZ zeigten einen Gewichtsverlust von mehr als 50 g
innerhalb weniger Tage oder eine langsam progrediente Gewichtsreduktion über
einen Zeitraum von mehreren Wochen bzw. Monaten. Die letztgenannte Form der
Gewichtsentwicklung wurde tendenziell häufiger beobachtet. Dabei stand ein
progressiver Gewichtsverlust bei den weiblichen Weißbüschelaffen häufig mit der
Geburt von Jungtieren in zeitlichem Zusammenhang. So konnte bei mehreren
weiblichen Tieren der DPZ - Kolonie eine in der postpartalen Phase beginnende,
nicht reversible Gewichtsreduktion festgestellt werden. Die Ausgangsgewichte der
54 Eigene Untersuchungen
untersuchten Tiere aus dem DPZ lagen zwischen 300 g und 500 g. Zwei klassische
Beispiele eines Gewichtsverlaufes bei adulten Weißbüschelaffen mit WMS sind in
den Abbildungen 2 und 3 dargestellt.
200
250
300
350
400
450
Jul 04 Aug 04 Sep 04 Okt 04 Nov 04
Zeitlicher Verlauf
Gew
icht
(g)
Geburt von Zwillingen
Abb. 2: Gewichtsentwicklung bei einem Weißbüschelaffen mit WMS-Verdacht (G 7096) aus der DPZ - Kolonie mit Gewichtsverlust von mehr als 50 g innerhalb weniger Tage.
Eigene Untersuchungen 55
200
250
300
350
400
450
Aug 04 Sep 04 Okt 04 Nov 04
Zeitlicher Verlauf
Gew
icht
(g)
Geburt von Zwillingen
Abb. 3: Gewichtsentwicklung bei einem Weißbüschelaffen mit WMS-Verdacht (G 7092) aus der DPZ - Kolonie mit langsam progressivem Gewichtsverlust und finalen Werten von weniger als 300 g.
Die Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim waren mit
Ausgangsgewichten zwischen 250 g und 300 g deutlich leichter als die Tiere aus
dem DPZ. Während das adulte Weißbüschelaffen - Männchen (G 7065) einen
ähnlichen Gewichtsverlauf wie in Abbildung 2 zeigte, wiesen die präadulten Tiere
schwankende Gewichtsverläufe auf (Abb. 4), ohne die für Weißbüschelaffen
angegebenen Normalgewichte zu erreichen.
56 Eigene Untersuchungen
200
250
300
350
400
450
Mrz 04 Apr 04 Mai 04 Jun 04 Jul 04 Aug 04 Sep 04 Okt 04
Zeitlicher Verlauf
Gew
icht
(g)
Abb. 4: Gewichtsentwicklung bei einem 15 Monate alten Weißbüschelaffen mit WMS-Verdacht (G 7067) der Firma Boehringer Ingelheim mit mangelhafter Gewichtszunahme.
Neben der Gewichtsreduktion konnten bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie
nur wenige assoziierte, obligat auftretende klinische Veränderungen festgestellt
werden. Bei fast allen Tieren wurde vorberichtlich von wässrigem Durchfall oder von
Blut im Kot berichtet. In einzelnen Fällen lag außerdem ein schlechtes
Allgemeinbefinden vor. Eine Reduktion der Futteraufnahme konnte in der Regel nicht
nachgewiesen werden. Therapieansätze führten zwar bei den meisten Tieren zu
einer kurzfristigen Besserung der Symptomatik, konnten aber in keinem Fall das
Krankheitsgeschehen dauerhaft aufhalten oder eine vollständige Restitutio ad
integrum bewirken.
Einen Überblick über die Verteilung der Sektionsgewichte bei den Weißbüschelaffen
aus dem DPZ liefert Abbildung 5. Es ist zu erkennen, dass das Gewicht zum
Zeitpunkt der Sektion bei den meisten Tieren zwischen 230 g und 320 g lag. Nur 11
% der untersuchten Weißbüschelaffen wogen bei der Sektion weniger als 230 g. Bei
16 % der Tiere lag das Gewicht zwischen 320 g und 350 g.
Eigene Untersuchungen 57
Die sechs Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim wogen zum
Zeitpunkt der Sektion zwischen 200 g und 260 g.
230-260 g21%
290-320 g21%
260-290 g31%
320-350 g16%
200-230 g11%
Abb. 5: Verteilung der Sektionsgewichte bei den Weißbüschelaffen aus dem DPZ.
Im Rahmen der routinemäßig intra vitam durchgeführten Kotuntersuchungen bei den
Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie zählte der Nachweis von E. coli, Streptococcus
sp., Proteus sp. und/ oder Klebsiella sp. zu den regelmäßig erhobenen
Untersuchungsbefunden. Als Vertreter der Gruppe der obligat pathogenen Keime
traten bei einzelnen Tieren Campylobacter sp. bzw. ein hämolytischer E. coli auf,
deren kulturelle Isolierung eine entsprechende antibiotische Therapie der betroffenen
Tiere zur Folge hatte.
Die parasitologischen Routineuntersuchungen ergaben für die meisten Tiere
negative Ergebnisse. Vereinzelt wurde ein geringgradiger Befall mit Giardia sp.
nachgewiesen.
58 Eigene Untersuchungen
3.2.2 Pathologisch-anatomische Untersuchungen
Jedes Tier mit klinischen Anzeichen einer WMS-Erkrankung wurde einer
ausführlichen makroskopischen Beurteilung unterzogen. Die Befunde, die am
Tierkörper und an den verschiedenen Organsystemen erhoben werden konnten,
wurden in einem Sektionsprotokoll festgehalten und entsprechend ihrer
pathologischen und pathogenetischen Bedeutung in Haupt- und Nebenbefunde
untergliedert.
Bei der pathologisch-anatomischen Untersuchung der Weißbüschelaffen aus der
DPZ - Kolonie konnten bei 8 von 19 Tieren keine Hauptbefunde erhoben werden. Bei
diesen Tieren wurden entweder keine besonderen makroskopischen Befunde
beobachtet oder ausschließlich Nebenbefunde festgestellt. Zu den häufig
nachgewiesenen Nebenbefunden zählten insbesondere eine gering- bis
mittelgradige Hyperplasie der Mesenteriallymphknoten, die Aufgasung und Dilatation
des ansonsten unveränderten Darmkanals, Exsikkosen unterschiedlichen
Schweregrades sowie eine verflüssigte Konsistenz der Ingesta. Weitere
Zufallsbefunde waren Verkalkungsherde im Myo- und Endometrium, plaqueartige
Auflagerungen auf der Lungenserosa und Blutungen im Bereich der Hypophyse. Alle
untersuchten Tiere wiesen einen schlechten bis kachektischen Ernährungszustand
auf.
Bei 11 von 19 Weißbüschelaffen lagen bei der makroskopischen Untersuchung des
Tierkörpers und der Organsysteme Hauptbefunde vor, die in erster Linie das
Gefäßsystem, das knöcherne Skelett, den Harnapparat und den Darmtrakt betrafen.
Die Veränderungen im Bereich des Gefäßsystems bestanden aus Mineralisierungen
der Gefäßwände, von denen insbesondere die großen Gefäße (Aorta, Aa. femorales)
betroffen waren. Derartige, überwiegend als hochgradig eingestufte Verkalkungen
der Gefäßwände wurden bei 4 von 11 Tieren nachgewiesen. Hauptbefunde des
Harnapparates, die bei 3 Weißbüschelaffen bestanden, betrafen ausschließlich die
Nieren und umfassten Vergrößerung und Aufhellung des Organs, derbe Konsistenz,
Eigene Untersuchungen 59
petechiale Blutungen, knotige Herde und höckrige Oberfläche. Bei den das
knöcherne Skelett betreffenden Befunden, die bei 5 Weißbüschelaffen beobachtet
wurden, handelte es sich um eine erhöhte Elastizität und Biegsamkeit sowie teils
brüchige Konsistenz verschiedener knöcherner Strukturen. Primäres
Manifestationsorgan der Knochenveränderungen waren die Schädeldecke und die
Rippen. Weitere Hauptbefunde der Knochen zeigten sich in Form von
rosenkranzähnlichen Auftreibungen im Bereich der Rippenfugen.
Veränderungen des Darmkanals traten bei 3 Tieren auf und waren durch eine
hochgradige, teils follikuläre Hyperplasie der Dünndarmschleimhaut (Duodenum),
verdickte Darmwand, hochgradige Dilatation und/oder säuerlich, übelriechende
Ingesta gekennzeichnet. Tabelle 4 gibt einen Überblick über die Häufigkeitsverteilung
und die Lokalisation der erhobenen Hauptbefunde bei den einzelnen
Weißbüschelaffen. Es ist erkennbar, dass bei 7 von 11 Tieren nur ein Organsystem
makroskopische Veränderungen aufwies, während bei den übrigen 4
Weißbüschelaffen Hauptbefunde in zwei Lokalisationen auftraten.
Tab. 4: Verteilung der pathologisch-anatomischen Hauptbefunde bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie und von der Firma Boehringer Ingelheim.
G-Nr. Gefäßsystem knöchernes Skelett Harnapparat Digestionstrakt
6795 x x6694 x x6905 x6869 x6787 x6931 x6688 x6944 x x6758 x6821 x x7079 x
7063 x
60 Eigene Untersuchungen
Das Spektrum der Nebenbefunde umfasste bei den DPZ - Weißbüschelaffen mit
Hauptbefunden hyperplastische Mesenteriallymphknoten, Exsikkose, ein alveoläres
Lungenödem und -emphysem, eine follikuläre Hyperplasie der Milz, Aufgasung und
Dilatation des ansonsten unveränderten Darmkanals, Verkalkungsherde im Myo- und
Endometrium, eine geringgradige Hyperplasie der Darmschleimhaut sowie eine
akute Stauungshyperämie der Milz.
Von den 6 Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer lagen nur bei einem Tier
Hauptbefunde vor (Tab. 4). Das Tier mit der G-Nummer 7063 wies neben einer
mittelgradigen Hyperplasie der Mesenteriallymphknoten und einem geringgradigen
alveolären Ödem eine dunkle Verfärbung der Leber mit Hämosideroseverdacht, eine
weiche Konsistenz der Schädeldecke sowie Alopezien im Schwanzbereich auf (Abb.
6). Bei den anderen 5 Weißbüschelaffen dieser Gruppe lag als einziger Nebenbefund
eine gering- bis mittelgradige Hyperplasie der Mesenteriallymphknoten vor.
Abb. 6: Alopezie im Schwanzbereich bei einem stark abgemagerten Weißbüschelaffen (G 7063) (Pfeile). Das Haarkleid erscheint insgesamt wenig dicht und struppig.
Eigene Untersuchungen 61
Bei den 3 Kontrolltieren konnten keine besonderen makroskopischen Befunde
erhoben werden.
3.2.3 Lichtmikroskopische Untersuchungen
Für jeden Weißbüschelaffen mit klinischer WMS - Symptomatik (insgesamt 25)
erfolgte eine ausführliche histologische Untersuchung des Intestinaltraktes und des
im Rahmen der Sektion routinemäßig entnommenen Organspektrums. Die Befunde,
die in den verschiedenen Organsystemen erhoben werden konnten, wurden für jedes
Tier in einem Untersuchungsprotokoll dokumentiert und werden im Folgenden nach
Organsystemen geordnet beschrieben.
3.2.3.1 Pathohistologie der Darmproben
Die ausführliche histologische Untersuchung der Gewebeproben aus den 6
verschiedenen Darmlokalisationen ergab bei 17 von 19 Weißbüschelaffen aus der
DPZ - Kolonie entzündliche Veränderungen in der Schleimhaut des Dünndarms oder
Dickdarms oder Dünn- und Dickdarms. Zwei Weißbüschelaffen (G 6758 und G 6944)
zeigten anstelle von rein entzündlichen Darmveränderungen eine hochgradige
Infiltration von neoplastischen lymphoiden Zellen in der gesamten Darmwand des
vorderen Dünndarms und des Kolons. Immunhistochemische Untersuchungen
bestätigten das Vorliegen eines malignen B-Zell-Lymphoms (G 6758) bzw. eines
gemischten T-Zell-/ B-Zell-Lymphoms (G 6944). In beiden Fällen hatte das Lymphom
systemischen Charakter mit neoplastischen Infiltraten in diversen Organsystemen
und den regionären mesenterialen Lymphknoten. Der Nachweis eines
Tumorgeschehens als Krankheitsursache widerlegte den Verdacht auf das Vorliegen
des Wasting Marmoset Syndroms, so dass sich die weitere Darstellung der
Ergebnisse auf 17 Weißbüschelaffen aus dem DPZ bezieht.
Zunächst wurde die Verteilung und der Ausprägungsgrad der Infiltration mit
mononukleären und polymorphnukleären Zellen in den verschiedenen
62 Eigene Untersuchungen
Darmlokalisationen untersucht. Die Beurteilung pathologischer Befunde erfolgte
anhand einer Skala von 1+ bis 4+ (Abb. 7 und 8): minimal = 1+, geringgradig = 2+,
mittelgradig = 3+, hochgradig = 4+.
Es fiel auf, dass bei allen Tieren entzündliche Infiltrate im Intestinaltrakt
nachgewiesen werden konnten. Bei den eingewanderten Entzündungszellen
handelte es sich in erster Linie um mononukleäre Zellen (Abb. 9), die nach ihrer
Anzahl in den meisten Darmlokalisationen mit 1+, 2+ oder 3+ bewertet wurden.
Während im Bereich des Duodenums und des Zäkums der Nachweis geringgradiger
mononukleärer Infiltrate (2+) in der Lamina propria überwog, dominierten in Kolon
und Rektum mononukleäre Infiltrate minimalen Schweregrades (1+). Im Ileum hielten
sich minimale und geringgradige Befunde (1+ und 2+) die Waage. Ein erhöhter Anteil
mittelgradiger mononukleärer Infiltrate (3+) wurde im Bereich des Jejunums
nachgewiesen. Ein etwas anderes Bild ergab sich für die Beurteilung der
polymorphkernigen Zellen in der Lamina propria (Abb. 10). Im gesamten Dünndarm
sowie im Zäkum und Rektum wurden überwiegend negative Befunde erhoben,
während im Kolon vermehrt polymorphkernige Zellen nachgewiesen werden
konnten. Positive Befunde bestanden im gesamten Dickdarm und im Ileum
ausschließlich aus minimalen polymorphnukleären Zellinfiltraten (1+). Die
Darmproben aus dem Duodenum und Jejunum zeigten ein breiteres Befundspektrum
und wiesen bei jeweils einem Tier mittelgradige polymorphkernige Zellinfiltrate (3+)
auf.
Zwei weitere Kriterien im Rahmen der Beurteilung möglicher Entzündungsprozesse
in der Darmschleimhaut waren der Nachweis von Kryptabszessen und einer
Hyperplasie des GALT-Systems (Abb. 11 und 12). Bei den Weißbüschelaffen der
DPZ - Kolonie wurden in den verschiedenen Darmlokalisationen bei den meisten
Tieren keine Kryptabszesse nachgewiesen. Positive Befunde umfassten im
Dünndarm und im Kolon ausschließlich den Nachweis weniger Kryptabszesse, die
mit 1+ bewertet wurden. Ein geringgradiger Nachweis von Kryptabszessen (2+)
wurde bei zwei Tieren im Zäkum und bei einem Tier im Rektum erbracht. Die
Eigene Untersuchungen 63
Untersuchungen zeigten, dass das Auftreten von Kryptabszessen generell an den
Nachweis einer entzündlichen Zellinfiltration mit polymorphkerniger Beteiligung
gekoppelt war (Abb. 13).
Bei der Beurteilung der Hyperplasie der Einrichtungen des GALT-Systems zeigte
sich eine relativ breites Befundspektrum, dass neben negativen Befunden minimale
bis mittelgradige Bewertungen umfasste, wobei im Falle eines positiven Befundes
überwiegend eine minimale bis geringgradige Hyperplasie (1+ bzw. 2+) vorlag. Auch
die reaktive Hyperplasie des GALT-Systems stand in engem Zusammenhang mit
dem Nachweis von Entzündungszellen in der Lamina propria und wies bezüglich des
Schweregrades eine deutliche Korrelation mit den Werten für die Einstufung der
Entzündungszellinfiltration auf.
64 Eigene Untersuchungen
A
B
C
D
Abb. 7: Dünndarm: Einteilung der intestinalen Entzündungsreaktion nach deren Ausprägungsgrad (H.&E.-Färbung, Scalebar = 200 μm). A: Minimale Enteritis mit einzelnen Entzündungszellen in der Lamina propria bei weitgehend erhaltener Zottenmorphologie, Jejunum (G - Nr. 6634). B: Geringgradige Enteritis mit mäßigem Entzündungszellinfiltrat in der Lamina propria und beginnender Zottenatrophie und -fusion, Duodenum (G - Nr. 7062). C: Mittelgradige Enteritis mit ausgeprägtem Entzündungszellinfiltrat in der Lamina propria und zunehmender Verkürzung und Verschmelzung der Zotten, Jejunum (G - Nr. 7063). D: Hochgradige Enteritis mit dichtem Zellinfiltrat in der Lamina propria. Die Zotten sind fast vollständig verschwunden, Ileum (G - Nr. 6940).
Eigene Untersuchungen 65
A
B
C
D
Abb. 8: Dickdarm: Einteilung der intestinalen Entzündungsreaktion nach deren Ausprägungsgrad (H.&E.-Färbung, Scalebar = 200 μm). A: Minimale Enteritis mit einzelnen Entzündungszellen in der Lamina propria bei erhaltener Kryptmorphologie, Rektum (G - Nr. 6795). B: Geringgradige Enteritis mit mäßigem Entzündungszellinfiltrat in der Lamina propria, beginnender Kryptatrophie und geringgradiger GALT-Hyperplasie, Kolon (G - Nr. 6650). C: Mittelgradige Enteritis mit ausgeprägtem Entzündungszellinfiltrat in der Lamina propria und deutlicher Atrophie und Verzweigung der Krypten, Zäkum (G - Nr. 7062). D: Hochgradige Enteritis mit dichtem Zellinfiltrat in der Lamina propria unter Aufhebung der normalen Kryptarchitektur, Rektum (G - Nr. 6940).
66 Eigene Untersuchungen
2
1
22 2
6 6
10
11
10
6 6
8
6
3
4
6
2
3
11 1
2
1
Duodenum Jejunum Ileum Zäkum Kolon Rektum
Anz
ahl d
er W
eißb
üsch
elaf
fen
neg.
1+
2+
3+
4+
Abb. 9: Mononukleäre Zellinfiltration in der Lamina propria bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie.
11
14 14
12
7
12
4
23
5
10
5
1 1 1
Duodenum Jejunum Ileum Zäkum Kolon Rektum
Anz
ahl d
er W
eißb
üsch
elaf
fen
neg.
1+
2+
3+
4+
Abb. 10: Polymorphnukleäre Zellinfiltration in der Lamina propria bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie.
Eigene Untersuchungen 67
1213
1415
1112
54
3
1
6
4
21
Duodenum Jejunum Ileum Zäkum Kolon Rektum
Anz
ahl d
er W
eißb
üsch
elaf
fen
neg.
1+
2+
3+
4+
Abb. 11: Kryptabszesse in der Lamina epithelialis bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie.
9 9
6
98
11
7
56
3
65
2
4 4
211 1 1 1 1
D uodenum Jejunum Ileum Zäkum Kolon R ektum
Anz
ahl d
er W
eißb
üsch
elaf
fen
neg.
1+
2+
3+
4+
Abb. 12: GALT-Hyperplasie in der Lamina propria bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie.
68 Eigene Untersuchungen
A
B
Abb. 13: A: Geringgradige chronische Enteritis im Ileum eines Weißbüschelaffen mit WMS. Das Entzündungszellinfiltrat hat ausschließlich mononukleären Charakter. Vereinzelt wird der intakte Epithelverband der Krypten von migrierenden Lymphozyten unterbrochen (Pfeile) (G - Nr. 6869, H.&E.-Färbung, Scalebar = 20 μm). B: Minimale chronisch aktive Enteritis im Jejunum eines Weißbüschelaffen mit WMS. Neben mononukleären Zellen finden sich einzelne polymorphkernige Zellen (unterbrochene Pfeile), die nach der Einwanderung in die Krytplumina Kryptabszesse (durchgehende Pfeile) bilden (G - Nr. 6634, H.&E.-Färbung, Scalebar = 20 μm).
Eigene Untersuchungen 69
A
B
Abb. 14: A: Geringgradige chronische Enteritis im Jejunum eines Weißbüschelaffen mit WMS. Ausgeprägte Vakuolisierung der Lamina epithelialis in den apikalen Anteilen der fusionierten Zotten (Pfeile) (G - Nr. 7035, H.&.E.-Färbung, Scalebar = 50 μm). B: Hochgradige chronische Enteritis im Ileum eines Weißbüschelaffen mit WMS. In der Lamina propria ist ein ausgeprägtes, mononukleäres Entzündungszellinfiltrat nachweisbar. Das Darmepithel ist abgeflacht (unterbrochene Pfeile) und weist fokal einen intraepithelialen Mikroabszess auf (durchgehender Pfeil) (G - Nr. 6940, H.&E.-Färbung, Scalebar = 50 μm).
70 Eigene Untersuchungen
Ulzerationen der Tunica mucosa mit Durchbruch der Basallamina waren nur bei zwei
Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie nachweisbar. Bei einem Tier wurde ein
chronisches Ulkus im Bereich des Jejunums festgestellt, das bei der histologischen
Untersuchung mit 3+ bewertet wurde. Bei dem zweiten Fall handelte es sich um eine
fokale Ulzeration der Duodenalschleimhaut mit akuter bis subakuter transmuraler
Entzündung, die mit 2+ beurteilt wurde.
Weitere Untersuchungskriterien im Rahmen der pathohistologischen Beurteilung der
verschiedenen Darmlokalisationen bestanden in der Beschreibung und
Dokumentation von epithelialer Atypie, Zotten- bzw. Kryptmorphologie und weiteren
Befunden. Bei der Erfassung einer atypischen Lamina epithelialis bei den
Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie standen der vereinzelte Nachweis von
nekrotischen Zellen (Karyorrhexis und Kernpyknosen) sowie diffuse
Vakuolisierungen der apikalen Lamina epithelialis, insbesondere im Bereich des
Kolons, im Vordergrund. Insbesondere im Rektum waren vereinzelt intraepitheliale
Mikroabszesse ausgebildet. In Fällen mit mittel- bis hochgradigen entzündlichen
Zellinfiltraten konnte häufig eine diffuse, generell alle Darmabschnitte betreffende
Abflachung des Epithels nachgewiesen werden (Abb. 14). Im Gegensatz dazu zeigte
sich im Dünndarm einiger Tiere ein multifokal mehrschichtiges Epithel im Bereich der
Zottenspitzen. Darüber hinaus wurden bei zahlreichen Tieren in den verschiedenen
Darmlokalisationen Epithelerosionen und -desquamationen der apikalen
Epithelabschnitte nachgewiesen. Veränderungen in der normalen Zotten- und
Kryptmorphologie äußerten sich im Dünndarm in Zottenatrophie und -fusionen, meist
verminderter, selten erhöhter Anzahl an Becherzellen, erhöhter Mitoserate sowie
Kryptdilatationen, wobei die Läsionen in erster Linie im Duodenum lokalisiert waren
(Abb. 7). Im Dickdarm standen Kryptatrophie, eine verminderte Anzahl an
Becherzellen, Verzweigung von Krypten sowie Kryptdilatationen mit Nachweis von
Bakterienrasen und eosinophilem Material in den Krypten im Vordergrund. Hier
wurden die deutlichsten Veränderungen im Bereich des Kolons nachgewiesen (Abb.
8). Als weitere Befunde wurden bei einzelnen Tieren hyperämische Zottenspitzen,
eine submukosale Beteiligung an der entzündlichen Reaktion sowie bei zahlreichen
Eigene Untersuchungen 71
Tieren eine Hyperplasie und überwiegend mittelgradige Dilatation der duodenalen
Brunnerschen Drüsen erhoben. Bei dem Tier mit der G - Nummer 7079 lag im
Bereich des Jejunums ein hochgradiges transmurales Entzündungsgeschehen mit
Nachweis einer Serositis vor. Ein relativ häufiger Befund bei den Weißbüschelaffen
der DPZ - Kolonie war der Nachweis von anhaftendem Bakterienrasen im Sinne
einer Dysbakteriose an der epithelialen Oberfläche und im Darmlumen. Von den 6
Darmabschnitten war bakterielle Besiedlung insbesondere im Bereich des
Duodenums und des Kolons nachweisbar. Mit Hilfe von Spezialfärbungen (Giemsa
und PAS) konnte der Bakteriennachweis verifiziert und die stäbchenförmige
Morphologie der Bakterien dargestellt werden.
Für die 6 Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim sind die Befunde der
Darmhistologie für entzündliche zelluläre Infiltrate, Kryptabszesse, GALT-Hyperplasie
und Ulzerationen in Tabelle 5 zusammengestellt. Ebenso wie bei den
Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie überwogen minimale bis mittelgradige
mononukleäre Entzündungszellinfiltrate mit keiner oder vorwiegend minimaler (neg.
bzw. 1+) Beteiligung von polymorphnukleären Zellen (Abb. 7 und 8). Bei den
Kryptabszessen zeigte sich hinsichtlich des Ausprägungrades eine Akzentuierung
der kaudalen Darmabschnitte. Während im Dünndarm in erster Linie negative
Befunde erhoben wurden, bestanden im Dickdarm vermehrt minimale
Veränderungen (1+). Eine Hyperplasie des GALT-Systems wurde bei den meisten
Tieren im Bereich des Dünndarms nicht nachgewiesen. Nur in Zäkum und Rektum
lagen vereinzelt Bewertungen von 1+ und 2+ vor. Die aktivierten lymphatischen
Einrichtungen wiesen besonders häufig Sternhimmelzellen auf. Ulzerationen der
Darmschleimhaut wurden nicht beobachtet.
72 Eigene Untersuchungen
Tab. 5: Übersicht über die Befunde der Darmhistologie bei den Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim (x = betroffenes Tier).
Jejunum Ileum Zäkum Kolon Rektumneg. xx
1+ xx xx x xx xxx2+ xxx xx xxxx xxx xxx x3+ x xx x xxx x4+
neg. xxxxx xxxx xxx xx x xxxxx1+ x xx xx xxxx xxxxx x2+ x3+4+
neg. xxxx xxxxxx xxxx x xx xxx1+ xx xx xxxxx xxx xxx2+ x3+4+
neg. xxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx xxx1+ x x xx x xx2+ x xx x3+4+
neg. xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx1+2+3+4+
GALT-Hyperplasie
Ulzerationen
Duodenum
Mononukleäre Zellen in der
Lamina propria
Polymorphkernige Zellen in der
Lamina propria
Kryptabszesse
Auch bei der Untersuchung auf epitheliale Atypie ergaben sich für die
Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim ähnliche Ergebnisse wie bei den
Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie. Im Vordergrund standen der Nachweis von
nekrotischen Zellen (Karyorrhexis und Kernpyknosen), die Ausbildung eines
mehrschichtigen Epithels in den apikalen Anteilen der Lamina epithelialis sowie
Epitheldesquamationen mit besonders deutlicher Ausprägung in den kaudalen
Darmabschnitten. Veränderungen der Zotten- und Kryptmorphologie äußerten sich
im Dünndarm in Zottenatrophie und Kryptdilatationen, während im Dickdarm
Kryptatrophie, eine vermehrte Anzahl an Becherzellen, Verzweigung von Krypten
und Kryptdilatationen dominierten. Auch hier wurden die deutlichsten Veränderungen
Eigene Untersuchungen 73
im Bereich des Kolons nachgewiesen. Zu den weiteren Befunden zählten im
Duodenum der Nachweis von Hyperämie und Bakterienrasen an der epithelialen
Oberfläche. Im Zäkum und im Kolon wurden bei jeweils einem Tier
Entzündungszellen in der Submukosa nachgewiesen. Darüber hinaus zeigte sich im
Kolon eines Weißbüschelaffen anhaftender Bakterienrasen im Darmlumen. Im
Gegensatz zu den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie wurde bei keinem Tier eine
Hyperplasie oder Dilatation der Brunnerschen Drüsen im Bereich des Duodenums
nachgewiesen.
Die 3 Weißbüschelaffen der Kontrollgruppe, die als Bezugssystem bei der
semiquantitativen Beurteilung der intestinalen Pathohistologie dienten, zeigten bei
der histologischen Untersuchung mit Ausnahme einzelner, im physiologischen
Rahmen liegender, mononukleärer Entzündungszellinfiltrate als Anteile des GALT-
Systems keine pathologischen Veränderungen.
Unter Berücksichtigung der erhobenen Befunde erfolgte die Bestimmung des
zeitlichen Verlaufs und des Schweregrades der Enteritiden bei den beiden
Weißbüschelaffen-Gruppen nach den in Kapitel 3.1.5. (Befunderhebung und
Dokumentation) festgelegten Kriterien. Eine Übersicht über die Diagnosen in den
jeweiligen Darmlokalisationen ist für die Tiere aus dem DPZ in Tabelle 6 aufgeführt.
74 Eigene Untersuchungen
Tab. 6: Überblick über den zeitlichen Verlauf und den Schweregrad der Enteritiden bei den Weißbüschelaffen des Deutschen Primatenzentrums.
G-Nr. Duodenum Jejunum Ileum Zäkum Kolon Rektum
6634 ggr. chronisch aktive E.
minimal chronisch aktive E.
minimale chronische E.
ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
6650 minimale chronische E. keine E. keine E. ggr.
chronische E.ggr. chronisch
aktive E.
minimal chronisch aktive E.
6687 hgr. chronisch aktive E.
ggr. chronische E.
minimale chronische E.
ggr. chronische E.
minimal chronisch aktive E.
minimale chronische E.
6688 ggr. chronische E. keine E. minimale
chronische E.ggr. chronisch
aktive E.ggr. chronisch
aktive E.ggr. chronisch
aktive E.
6694 mgr. chronisch aktive E.
mgr. chronisch aktive E.
ggr. chronische E.
ggr. chronische E.
ggr. chronisch aktive E.
minimal chronisch aktive E.
6787 ggr. chronische E.
mgr. chronische E.
ggr. chronische E.
ggr. chronische E.
ggr. chronische E.
minimale chronische E.
6795 mgr. chronisch aktive E.
mgr. chronisch aktive E.
minimale chronisch aktive E.
ggr. chronische E.
minimale chronisch aktive E.
minimale chronische E.
6821 ggr. chronische E.
ggr. chronische E.
ggr. chronisch aktive E.
mgr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
6859 ggr. chronische E.
ggr. chronische E.
mgr. chronisch aktive E.
minimale chronische E.
minimale chronische E.
minimale chronische E.
6869 mgr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronische E.
minimale chronische E.
minimale chronische E. keine E.
6905 minimale chronische E.
minimale chronische E.
minimale chronische E.
minimale chronische E.
minimale chronische E. keine E.
6931 ggr. chronische E.
mgr. chronisch aktive E.
mgr. chronische E.
minimale chronische E.
mininmale chronisch aktive E.
minimale chronisch aktive E.
6940 mgr. chronische E.
ggr. chronische E.
hgr. chronisch aktive E.
mgr. chronische E.
mgr. chronisch aktive E.
hgr. chronische E.
7035 ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronische E.
ggr. chronisch aktive E.
minimale chronische E.
minimale chronisch aktive E.
minimale chronisch aktive E.
7079 ggr. chronisch aktive E. hgr. akute E. ggr. chronisch
aktive E.mgr. chronisch
aktive E.
minimale chronisch aktive E.
minimale chronische E.
7092 ggr. chronische E.
mgr. chronische E.
hgr. chronische E.
minimal chronisch aktive E.
minimal chronisch aktive E.
minimale chronische E.
7096 ggr. chronische E.
mgr. chronische E.
minimale chronische E.
ggr. chronische E.
minimale chronische E.
minimale chronische E.
Eigene Untersuchungen 75
Bei der Beurteilung des zeitlichen Verlaufs fiel auf, dass bei den Weißbüschelaffen
der DPZ - Kolonie mit einer Ausnahme ausschließlich chronische und chronisch
aktive Enteritiden diagnostiziert wurden (Abb. 15). Ein akutes
Entzündungsgeschehen konnte nur in einem Fall nachgewiesen werden. Bei dem
Tier mit der G - Nummer 7079 lag eine hochgradige akute Jejunitis vor. Mit
Ausnahme des Kolons wurden in allen Darmlokalisationen am häufigsten chronische
Enteritiden nachgewiesen, die regelmäßig mit einer GALT-Hyperplasie und häufig
mit atrophischen Schleimhautveränderungen einher gingen. Chronische Enteritiden
mittelgradiger und hochgradiger Ausprägung wiesen darüber hinaus häufig eine
Abflachung des Epithels auf. Im Kolon überwogen die chronisch aktiven Enteritiden,
die neben den Merkmalen einer chronischen Entzündung eine akut entzündliche
Komponente (polymorphkernige Zellen, Kryptabszesse) aufwiesen. Auch bei den
chronisch aktiven Enteritiden wurde regelmäßig eine Zotten/-Kryptatrophie und eine
Hyperplasie des GALT-Systems nachgewiesen. Die übrigen untersuchten
Entzündungskriterien standen in keinem erkennbaren Zusammenhang mit dem
zeitlichen Verlauf der Entzündung.
2
1
2
1
10
9
11 11
5
8
7
5 5
6
12
7
Duodenum Jejunum Ileum Zäkum Kolon Rektum
Anz
ahl d
er W
eißb
üsch
elaf
fen
keineEnteritis
akuteEnteritis
chronischeEnteritis
chronischaktiveEnteritis
Abb. 15: Zeitlicher Verlauf der entzündlichen Darmveränderungen bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie.
76 Eigene Untersuchungen
Hinsichtlich des Schweregrades der entzündlichen Veränderungen lag unabhängig
von der Darmlokalisation eine annähernd gleiche Verteilung der Schweregrade bei
der chronischen Enteritis und bei der chronisch aktiven Enteritis vor (Diagr. 11).
Bezogen auf die Gesamtzahl der gestellten Diagnosen waren fast die Hälfte der
Befunde geringgradiger Natur. Bei den chronisch aktiven Enteritiden konnten gleich
viele minimale und mittelgradige Veränderungen festgestellt werden. Dagegen
überwogen bei den chronischen Enteritiden die minimalen Ausprägungen.
Chronisch aktive Enteritis
26%
43%
5%
26%
Chronische Enteritis
35%
44%
19%2%
minimal
geringgradig
mittelgradig
hochgradig
Abb. 16: Verteilung der Schweregrade bei den chronisch aktiven und chronischen Enteritiden der Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie.
Bezogen auf die jeweiligen Darmlokalisationen konnte eine deutliche Akzentuierung
des Schweregrades in den vorderen Darmabschnitten nachgewiesen werden (Abb.
17). Während in Duodenum und Zäkum die geringgradigen entzündlichen
Veränderungen überwogen, konnte im Jejunum ein hoher Anteil an mittelgradigen
Enteritiden festgestellt werden. Im Ileum lagen ebensoviele minimale wie
geringgradige Enteritiden vor. In den kaudalen Anteilen des Dickdarms (Kolon und
Rektum) wurden vermehrt minimale Enteritiden nachgewiesen, während die Inzidenz
der geringgradigen Darmentzündungen abnahm.
Eigene Untersuchungen 77
0
2
4
6
8
10
12
1 2 3 4 5 6
Darmlokalisationen
Anz
ahl d
er W
eißb
üsch
elaf
fen
min.
ggr.
mgr.
hgr.
Abb. 17: Verteilung des Schweregrades der chronischen und chronisch aktiven Enteritiden in Abhängigkeit von der Darmlokalisation bei den Weißbüschelaffen der DPZ – Kolonie (1 = Duodenum, 2 = Jejunum, 3 = Ileum, 4 = Zäkum, 5 = Kolon, 6 = Rektum).
Für die 6 Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim ergab sich für die
Diagnose des zeitlichen Verlaufs und des Schweregrades der Enteritiden ein
ähnliches Bild (Tab. 7). Entzündliche Veränderungen waren bei fast allen Tieren
nachweisbar und hatten im Dünndarm sowohl chronischen als auch chronisch
aktiven Charakter. Im Bereich des Dickdarms lagen in erster Linie chronisch aktive
Entzündungen geringen und mittleren Schweregrades vor.
78 Eigene Untersuchungen
Tab. 7: Zeitlicher Verlauf und Schweregrad der Enteritiden bei den Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim.
G-Nr. Duodenum Jejunum Ileum Zäkum Kolon Rektum
7062 ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronische E.
ggr. chronische E.
mgr. chronisch aktive E.
mgr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
7063 ggr. chronisch aktive E.
mgr. chronische E.
mgr. chronisch aktive E.
mgr. chronisch aktive E.
ggr. chronische E.
minimale chronisch aktive E.
7064 minimale chronische E.
ggr. chronische E.
ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
minimale chronisch aktive E.
7065 ggr. chronische E.
minimale chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
minimale chronisch aktive E.
keine E.
7066 minimale chronische E.
minimale chronische E.
ggr. chronisch aktive E.
mgr. chronisch aktive E.
ggr. chronisch aktive E.
minimale chronisch aktive E.
7067 mgr. chronische E.
mgr. chronisch aktive E.
minimale chronische E.
ggr. chronisch aktive E.
minimale chronisch aktive E.
keine E.
Eigene Untersuchungen 79
3.2.3.2 Immunhistochemische Untersuchungen der Darmproben
Die immunhistochemischen Untersuchungen zur Charakterisierung der
mononukleären Entzündungsreaktion ergaben bei den Weißbüschelaffen aus dem
DPZ und den Tieren von der Firma Boehringer Ingelheim gleichartige Ergebnisse
(Abb. 18 bis 23). In allen Darmlokalisationen wurde die mononukleäre
Entzündungsreaktion von T-Zellen dominiert, wobei die Anzahl der markierten Zellen
im Dünndarm insgesamt höher war als in den kaudalen Darmabschnitten (Abb. 24).
Insbesondere im Kolon und im Rektum wurden bei einigen Weißbüschelaffen ähnlich
geringe Zellzahlen wie bei den 3 Kontrolltieren nachgewiesen. Die vergleichende
Darstellung von T-Zellen, B-Zellen und Makrophagen in den 6 Darmlokalisationen
macht deutlich, dass der Anteil von B-Lymphozyten an der mononukleären
Entzündungsreaktion mit Werten von weniger als 100 Zellen durchweg als minimal
einzustufen war. Dagegen wurden in den Lymphfollikeln des GALT-Systems in
Abhängigkeit vom Aktivierungszustand neben T-Lymphozyten große Mengen an CD
20 positiven Zellen nachgewiesen (Abb. 25). Die GALT-assoziierten B-Lymphozyten
wurden bei der Auszählung der mononukleären Zellen allerdings nicht berücksichtigt.
Die Beteiligung von Makrophagen am Entzündungsgeschehen war ebenfalls als
gering einzustufen, zeigte aber bezüglich der Zellzahlen im Gegensatz zu den B-
Zellen eine größere Variationsbreite. So wurden bei einzelnen Weißbüschelaffen
Werte von 150 Zellen erreicht (Abb. 26). Allerdings war ein vermehrter Nachweis von
Makrophagen nicht über den gesamten Darmkanal existent, sondern bezog sich
ausschließlich auf einzelne Darmabschnitte. Eine tendenziell erhöhte Beteiligung von
histiozytären Zellen an der mononukleären Zellinfiltration konnte lediglich bei einem
Tier (G 6821) im Bereich der 3 Dickdarmabschnitte festgestellt werden.
Bei den 3 Kontrolltieren wurden in allen Darmlokalisationen deutlich weniger als 150
mononukleäre Zellen nachgewiesen, wobei auch hier die T-Lymphozyten im
Vordergrund standen.
80 Eigene Untersuchungen
Duodenum
0
150
300
450
600
750
900
6634
6650
6687
6688
6694
6787
6795
6821
6859
6869
6905
6931
6940
7035
7079
7092
7096
7062
7063
7064
7065
7066
7067
6699
6701
6707
Weißbüschelaffen (G-Nr.)
Zellzahl CD3 CD20 MAC
Abb. 18: Verteilung der Zellzahlen von T-Lymphozyten (CD 3), B-Lymphozyten (CD 20) und Makrophagen (MAC) im Duodenum bei allen untersuchten Weißbüschelaffen (links von der ersten Trennlinie: DPZ - Kolonie; links von der zweiten Trennlinie: Boehringer Ingelheim; rechts von der zweiten Trennlinie: Kontrolltiere).
Jejunum
0
150
300
450
600
750
900
6634
6650
6687
6688
6694
6787
6795
6821
6859
6869
6905
6931
6940
7035
7079
7092
7096
7062
7063
7064
7065
7066
7067
6699
6701
6707
Weißbüschelaffen (G-Nr.)
ZellzahlCD3 CD20 MAC
Abb. 19: Verteilung der Zellzahlen von T-Lymphozyten (CD 3), B-Lymphozyten (CD 20) und Makrophagen (MAC) im Jejunum bei allen untersuchten Weißbüschelaffen.
Eigene Untersuchungen 81
Ileum
0
150
300
450
600
750
900
6634
6650
6687
6688
6694
6787
6795
6821
6859
6869
6905
6931
6940
7035
7079
7092
7096
7062
7063
7064
7065
7066
7067
6699
6701
6707
Weißbüschelaffen (G-Nr.)
Zellzahl CD3 CD20 MAC
Abb. 20: Verteilung der Zellzahlen von T-Lymphozyten (CD 3), B-Lymphozyten (CD 20) und Makrophagen (MAC) im Ileum bei allen untersuchten Weißbüschelaffen.
Zäkum
0
150
300
450
600
750
900
6634
6650
6687
6688
6694
6787
6795
6821
6859
6869
6905
6931
6940
7035
7079
7092
7096
7062
7063
7064
7065
7066
7067
6699
6701
6707
Weißbüschelaffen (G-Nr.)
Zellzahl CD3 CD20 MAC
Abb. 21: Verteilung der Zellzahlen von T-Lymphozyten (CD 3), B-Lymphozyten (CD 20) und Makrophagen (MAC) im Zäkum bei allen untersuchten Weißbüschelaffen.
82 Eigene Untersuchungen
Kolon
0
150
300
450
600
750
900
6634
6650
6687
6688
6694
6787
6795
6821
6859
6869
6905
6931
6940
7035
7079
7092
7096
7062
7063
7064
7065
7066
7067
6699
6701
6707
Weißbüschelaffen (G-Nr.)
Zellzahl CD3 CD20 MAC
Abb. 22: Verteilung der Zellzahlen von T-Lymphozyten (CD 3), B-Lymphozyten (CD 20) und Makrophagen (MAC) im Kolon bei allen untersuchten Weißbüschelaffen.
Rektum
0
150
300
450
600
750
900
6634
6650
6687
6688
6694
6787
6795
6821
6859
6869
6905
6931
6940
7035
7079
7092
7096
7062
7063
7064
7065
7066
7067
6699
6701
6707
Weißbüschelaffen (G-Nr.)
Zellzahl CD3 CD20 MAC
Abb. 23: Verteilung der Zellzahlen von T-Lymphozyten (CD 3), B-Lymphozyten (CD 20) und Makrophagen (MAC) im Rektum bei allen untersuchten Weißbüschelaffen.
Eigene Untersuchungen 83
A
B
Abb. 24: A: Minimale chronisch aktive Enteritis mit CD 3-markierten T-Lymphozyten (Pfeile) im Rektum eines Weißbüschelaffen mit WMS (G - Nr. 6694, IHC-SABC, Scalebar = 100 μm). B: Mittelgradige chronisch aktive Enteritis im Jejunum eines Weißbüschelaffen mit WMS; bei nahezu allen Zellen des entzündlichen Infiltrates handelt es sich um CD 3-markierte T-Lymphozyten (Pfeile) (G - Nr. 6694, IHC-SABC, Scalebar = 50 μm).
84 Eigene Untersuchungen
A
B
Abb. 25: A: Geringgradige chronisch aktive Enteritis mit CD 20-markierten B-Lymphozyten im Kolon eines Weißbüschelaffen mit WMS; während im Bereich des GALT-Systems zahlreiche markierte Zellen nachweisbar sind (Pfeile), finden sich in der Lamina propria nur vereinzelt B-Lymphozyten (G - Nr. 6650, IHC-SABC, Scalebar = 100 μm). B: Minimale chronische Enteritis mit CD 20-markierten B-Lymphozyten (Pfeile) im Ileum eines Weißbüschelaffen mit WMS (G - Nr. 7076, IHC-SABC, Scalebar = 50 μm).
Eigene Untersuchungen 85
A
B
Abb. 26: A: Mittelgradige chronisch aktive Enteritis mit MAC-markierten Makrophagen im Ileum eines Weißbüschelaffen mit WMS; nur einzelne Zellen des mononukleären entzündlichen Infiltrates weisen eine Markierung auf (Pfeile) (G - Nr. 7063, IHC-SABC, Scalebar = 50 μm). B: Geringgradige chronisch aktive Enteritis im Zäkum eines Weißbüschelaffen mit WMS; es liegt eine tendenziell erhöhte Beteiligung von histiozytären Zellen an der mononukleären Zellinfiltration vor (Pfeile) (G - Nr. 7064, IHC-SABC, Scalebar = 50 μm).
86 Eigene Untersuchungen
3.2.3.3 Pathohistologie der übrigen Organe
Harnapparat
Pathohistologische Veränderungen des Harnapparates umfassten ausschließlich
Alterationen der Nieren und traten bei 15 von 17 Weißbüschelaffen aus der DPZ -
Kolonie auf. Im Mittelpunkt der Ergebnisse standen Entzündungsreaktionen, die
überwiegend das interstitielle Gewebe betrafen. Bei 13 Tieren waren darüber hinaus
Glomerulumalterationen nachweisbar. Die interstitiellen Nephritiden waren in erster
Linie gering- bis mittelgradiger chronischer Natur und durch ein mononukleäres, teils
perivaskulär angeordnetes Entzündungszellinfiltrat gekennzeichnet, an dem
vereinzelt neutrophile Granulozyten beteiligt waren (Abb. 27 A). In einem Fall (G
6940) lagen im Bereich des Nierenbeckens umfangreiche lymphozytäre
Entzündungszellherde vor. Ein weiteres Tier (G 6687) zeigte anstelle einer
chronischen Nephritis ein geringgradiges akut purulentes Entzündungsgeschehen.
Bei dem Tier mit der G-Nummer 6931 wurden ausgeprägte Nierenveränderungen
nachgewiesen, die durch eine mittelgradige gemischtzellige
Entzündungszellinfiltration im Interstitium und in den Tubuluslumina gekennzeichnet
waren und daher als chronisch aktive Tubulonephritis bezeichnet wurden. Bei
diesem Tier wurden außerdem hochgradig dilatierte Tubuli mit hochgradiger
Eiweißspeicherung, abschnittsweise hochgradige Degeneration der
Tubulusepithelien mit Abschilferung von Epithelzellen in das Lumen und hyaliner
Rückresorption sowie mittelgradig dilatierte Bowmann Kapseln und teils atrophische
Glomerula nachgewiesen (Abb. 27 B). Bei den Glomerulumalterationen handelte es
sich insbesondere um mesangial-proliferative Glomerulopathien unterschiedlichen
Schweregrades, die bei 13 Weißbüschelaffen nachgewiesen werden konnten.
Weitere Befunde im Bereich der Nieren bestanden in diffuser Hyperämie,
multifokalen interstitiellen und intratubulären Verkalkungsherden, Kalkablagerungen
im Bereich glomerulärer und tubulärer Basalmembranen sowie intratubulären
Proteinzylindern. Die Berliner-Blau-Reaktion bestätigte das Vorliegen einer
geringgradigen Hämosiderose der Tubulusepithelien bei 4 Weißbüschelaffen.
Eigene Untersuchungen 87
Von den Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim waren bei 3 von 6 Tieren
entzündliche Veränderungen in den Nieren nachweisbar, die mit mesangialer
Proliferation einher gingen. Bei den Entzündungszellinfiltraten handelte es sich um
geringgradige mononukleäre Infiltrate im Interstitium. Weitere Nierenalterationen
bestanden in diffuser Hyperämie, geringgradiger Fibrosierung und Dilatation der
Bowmann Kapseln und geringgradigen intratubulären Kalkzylindern.
Hämosiderinablagerungen in den Tubulusepithelien konnten bei keinem Tier
nachgewiesen werden.
Leber und Gallenwege
Pathohistologische Veränderungen der Leber traten bei allen Weißbüschelaffen der
DPZ - Kolonie auf und umfassten in erster Linie den Nachweis entzündlicher
Reaktionen sowie das Auftreten degenerativer Prozesse. Hepatitiden wurden bei 9
von 17 Weißbüschelaffen nachgewiesen und bestanden überwiegend aus
geringgradigen mononukleären Zellinfiltraten mit teils interstitiellem und teils
perivaskulärem/ periportalem Verteilungsmuster. Die interstitiellen Rundzellinfiltrate
zeigten typischerweise eine noduläre Anordnung (Abb. 28 A). Bei 2 Tieren (G 6694
und G 7035) waren außerdem neutrophile Granulozyten am Entzündungsgeschehen
beteiligt. Degenerative Veränderungen der Hepatozyten lagen bei 10
Weißbüschelaffen vor und manifestierten sich in Form einer teils diffusen, teils
zentrolobulären hydropischen bzw. vakuolären Degeneration als Folge von zellulärer
Wassereinlagerung (Abb. 28 A). Weitere sporadisch nachgewiesene Leberbefunde
umfassten eine geringgradige Verfettung der Hepatozyten, eine geringgradige bis
mittelgradige Dilatation der Zentralvenen und der zentrolobulären Sinusoide, eine
geringgradige bis mittelgradige periportale Fibrose und eine geringgradige
Hyperämie. Außerdem wurden vereinzelt Megakaryozyten als Hinweis auf
extramedulläre Hämatopoese im Leberparenchym nachgewiesen. Mit Hilfe der
Berliner-Blau-Reaktion konnte gezeigt werden, dass bei 16 von 17 Weißbüschelaffen
größtenteils hochgradige, meist zentrolobuläre Hämosiderinablagerungen in den
Hepatozyten und Kupfferschen Sternzellen vorhanden waren (Abb. 28 B). Nur bei
88 Eigene Untersuchungen
dem Weißbüschelaffen mit der G - Nummer 6634 wurde keine Hämosiderose der
Leber nachgewiesen. Von den 3 Kontrolltieren aus dem Anthropologischen Institut
der Georg-August Universität in Göttingen konnten nur in einem Fall (G 6701)
minimale Eisenablagerungen in den Hepatozyten nachgewiesen werden. Die beiden
anderen Weißbüschelaffen wiesen keine Hämosiderose der Leber auf.
Histologische Untersuchungen der Gallenwege ergaben bei 10 Weißbüschelaffen
besondere Befunde, die sowohl das Gallengangsystem in der Leber als auch die
Gallenblasenwand betrafen. Bei 4 von 17 Weißbüschelaffen lag eine geringgradige
Gallengangsprolifertation vor, die bei 2 Tieren (G 6787 und G 6694) mit einer
geringgradigen chronisch-fibrosierenden Pericholangitis vergesellschaftet war. Die
Gallenblase wies bei 8 Tieren geringgradige entzündliche Infiltrate in der Lamina
propria auf, die aus mononukleären Zellen mit vereinzelter Beteiligung neutrophiler
Granulozyten bestanden.
Das Spektrum der Leberveränderungen der 6 Weißbüschelaffen der Firma
Boehringer Ingelheim deckte sich weitgehend mit dem der Weißbüschelaffen aus
dem DPZ. Im Vordergrund standen geringgradige degenerative Prozesse in Form
von hydropischer Degeneration mit zentrolobulärer Lokalisation sowie entzündliche
Veränderungen der Periportalfelder und des Interstitiums mit nodulärer Morphologie.
Weitere Befunde waren diffuse Hyperämie, Dilatation der Zentralvenen und der
zentrolobulären Sinusoide und diffuse Verfettung der Hepatozyten. Eine
Hämosiderose (Berliner-Blau-Reaktion) wurde bei allen 6 Tieren nachgewiesen,
wobei der Ausprägungsgrad der Hämosiderinablagerungen insgesamt schwächer
war als bei den Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie.
Bei 2 Weißbüschelaffen (G 7062 und G 7063) zeigten sich geringgradige
lymphozytäre bzw. granulozytäre Entzündungszellinfiltrate in der Lamina propria der
Gallenblase. Alterationen der intrahepatischen Gallenwege konnten bei keinem Tier
nachgewiesen werden.
Eigene Untersuchungen 89
Magen
Die histologische Untersuchung des Magens ergab bei 13 von 17 Weißbüschelaffen
keine besonderen Befunde. Ein Tier (G 6634) wies eine geringgradige diffuse
chronische Gastritis mit Ausbildung von Nekroseherden und dystrophischen
Verkalkungsaralen (von Kossa: positiv) auf. Die Entzündung der Magenschleimhaut
war gekennzeichnet durch ein gemischtzelliges Entzündungszellinfiltrat mit
Beteiligung von eosinophilen Granulozyten, insbesondere im Bereich der
Schleimhautbasis, sowie durch den Nachweis einzelner Kryptabszesse. Bei einem
anderen Tier (G 6795) lagen multifokale geringgradige Verkalkungsherde in der
Magenwand vor. Zwei Tiere (G 6687 und G7096) zeigten geringgradige
lymphozytäre bzw. granulozytäre Entzündungszellinfiltrate in den apikalen Anteilen
der Lamina propria.
Bei den Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim konnten hinsichtlich
der Magenhistologie bei einem Tier (G 7063) keine besonderen Befunde erhoben
werden. Die übrigen 5 Weißbüschelaffen wiesen geringgradige
Entzündungszellinfiltrate bzw. Lymphfollikelstrukturen in der Lamina propria auf.
Herz-Kreislauf-System
Bei 6 von 17 Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie konnten Alterationen im Herz-
Kreislauf-System festgestellt werden. Entzündliche Veränderungen des Herzens
lagen bei 2 Tieren (G 6634 und G 6694) in Form von geringgradigen mononukleären
Entzündungszellinfiltrationen im Myokard und im Bereich der Herzklappenbasis vor.
Das Herz eines Tieres (G 7035) zeigte eine geringgradige Myokardfibrose. Primäre
Veränderungen des Herz-Kreislauf-Systems fanden sich bei 6 Tieren und bestanden
in teils hochgradigen Kalkablagerungen im Bereich der Herzklappenbasis sowie in
der Tunica media der herznahen Anteile der Aorta (Abb. 29 A).
Das Herz-Kreislauf-System der Weißbüschelaffen Firma Boehringer Ingelheim zeigte
90 Eigene Untersuchungen
mit Ausnahme einer geringgradigen diffusen Hyperämie keine besonderen Befunde.
Respirationstrakt
Zu den häufigen Befunden der Lunge gehörten bei den Weißbüschelaffen aus dem
DPZ geringgradige bis mittelgradige interstitielle Pneumonien, die durch ein
gemischtzelliges Entzündungszellinfiltrat gekennzeichnet waren und bei 11 von 17
Tieren beobachtet wurden (Abb. 29 B). Die entzündlichen Veränderungen gingen bei
einem Tier mit einer Hyperplasie des BALT-Systems (G 6687) einher. Bei dem Tier
mit der G - Nummer 7035 lag eine geringgradige Alveolarhistiozytose vor. Der
Nachweis von geringgradigen bis mittelgradigen interstitiellen Verkalkungsherden
wurde bei 4 Weißbüschelaffen erbracht. Weitere Befunde der Lunge waren
ausschließlich geringen Schweregrades und bestanden in Anthrakose, Hyperämie,
einem diffusen alveolären Emphysem, einem diffusen interstitiellen bzw. alveolären
Ödem, peribrochialer Fibrose und dem Nachweis von Megakaryozyten als Hinweis
auf extramedulläre Hämatopoese.
Pathohistologische Befunde der Trachea konnten nur bei einem Weißbüschelaffen
erhoben werden. Das Tier mit der G - Nummer 6634 zeigte eine geringgradige
diffuse subakute Peritracheitis sowie fokal herdförmige Verkalkungen im Bereich der
Basalmembran größerer Gefäße (von Kossa: positiv).
Von den 6 Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim zeigten sich bei 2
Tieren entzündliche Lungenveränderungen in Form einer geringgradigen
chronischen interstitiellen Pneumonie. Bei den übrigen Tieren wurden ausschließlich
unspezifische Nebenbefunde wie Hyperämie und ein alveoläres Emphysem
beobachetet.
Lymphatisches System
Das Spektrum der pathohistologischen Befunde der Milz umfasste bei den
Eigene Untersuchungen 91
Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie das Auftreten einer follikulären Hyperplasie und
den Nachweis von Megakaryozyten als Hinweis auf extramedulläre Hämatopoese.
Eine geringgradige follikuläre Hyperplasie konnte bei 4 Weißbüschelaffen
nachgewiesen werden. Bei den übrigen Weißbüschelaffen waren die Milzfollikel nicht
aktiviert. Bei 5 Tieren konnten in der roten Pulpa Megakaryozyten nachgewiesen
werden. Bei einem Tier (G 6650) lag außerdem eine geringgradige neutrophile
Entzündungszellinfiltration in der roten Pulpa vor. Bei 15 von 17 Weißbüschelaffen
konnte eine geringgradige bis mittelgradige Hämosiderose nachgewiesen werden.
Gegenstand der pathohistologischen Untersuchungen des lymphatischen Systems
waren außerdem die Lymphknoten, von denen in erster Linie die
Mesenteriallymphknoten zur Untersuchung gelangten. Bei 9 Tieren war eine
geringgradige bzw. mittelgradige follikuläre Hyperplasie der Lnn. mesenteriales
ausgebildet. Die Lymphknoten von 2 Weißbüschelaffen (G 7035 und G 6940) zeigten
eine geringgradige bis mittelgradige Depletion des lymphatischen Gewebes. In
einem Fall konnte eine Sinushistiozytose nachgewiesen werden.
Die Untersuchung der Tonsillen ergab bei 3 Weißbüschelaffen (G 7092 und 7096)
eine mittelgradige follikuläre Hyperplasie. Die Tonsillen eines Tieres (G 6694) zeigte
geringgradige entzündliche Veränderungen mit Nachweis von bakteriellen
Strukturen. Der Thymus war, sofern in Resten vorhanden, bei allen Tieren ohne
besonderen Befund.
Von den Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim zeigte sich bei 3 Tieren
eine geringgradige bis mittelgradige follikuläre Hyperplasie der Milz. Außerdem
wurden bei einem Tier (G 7067) Megakaryozyten in der roten Pulpa nachgewiesen.
Hämosiderinablagerungen konnten bei 4 von 6 Weißbüschelaffen festgestellt
werden. Die Mesenteriallymphknoten wiesen bei allen 6 Tieren eine mittelgradige
follikuläre Hyperplasie auf. In einem Fall (G 7063) lag eine geringgradige follikuläre
Hyperplasie der Tonsillen vor.
92 Eigene Untersuchungen
Endokrinum
Von den 17 Weißbüschelaffen aus dem DPZ wurden bei 13 Tieren die Nebennieren
pathohistologisch untersucht. In 5 Fällen zeigten sich geringgradige multifokale
Hämatopoeseherde, die durch aggregierte Erythroblasten gekennzeichnet waren.
Bei einem Tier (G 6694) lag eine mittelgradige großtropfige Verfettung der Zona
fascicularis vor. Im Rinden- und Markbereich der Nebennieren von 2 Tieren (G 6687
und G 7079) wurde eine mittelgradige gemischtzellige Entzündungszellinfiltration
nachgewiesen.
Eine Untersuchung der Schilddrüsen erfolgte bei allen 17 Weißbüschelaffen.
Pathohistologische Veränderungen traten bei 12 Weißbüschelaffen auf und äußerten
sich in einer unregelmäßigen Follikelgröße sowie einer geringgradigen bis
mittelgradigen, meist fokalen C-Zell-Hyperplasie.
Die Hypophyse gelangte bei 5 von 17 Weißbüschelaffen zur Untersuchung und war
bei 3 Tieren ohne besonderen Befund. Bei 2 Tieren (G 7092 und G 6687) lag eine
geringgradige Zystenbildung in der Peripherie der Neurohypophyse vor.
Die pathohistologische Untersuchung der Schilddrüsen ergab bei 4 von 6 Tieren der
Firma Boehringer Ingelheim eine geringgradige bis mittelgradige C-Zell-Hyperplasie.
Die Nebennieren wiesen nur bei einem Weißbüschelaffen (G 7066) Veränderungen
in Form von einzelnen Rundzellinfiltraten im Grenzbereich zwischen Rinde und Mark
auf. Extramedulläre Hämatopoeseherde waren bei diesen Tieren nicht nachweisbar.
Die Hypophyse wurde bei 3 Weißbüschelaffen untersucht und enthielt bei 2 Tieren
(G 7063 und G7065) Zysten im Bereich der Adenohypophyse.
Haut
Die histologische Untersuchung der Hautbioptate der 6 Weißbüschelaffen von der
Firma Boehringer Ingelheim ergab in allen untersuchten Lokalisationen
Eigene Untersuchungen 93
ausschließlich physiologische Verhältnisse, die durch Haarfollikel in anagenen oder
telogenen Stadien gekennzeichnet waren.
Weitere Organveränderungen
Das zentrale Nervensystem zeigte bei den 17 Weißbüschelaffen aus dem DPZ keine
besonderen Befunde. Im Bereich des Pankreas wurden bei einem Tier (G 7079)
vereinzelt periduktale Entzündungszellinfiltrate nachgewiesen. Bei dem gleichen Tier
lag außerdem eine fokale Blutung mit Ablösung des Epithels im Ösophagus vor. Die
Untersuchung der Geschlechtsorgane ergab bei 5 Weißbüschelaffen besondere
Befunde. In der Uterusschleimhaut von 3 Tieren zeigten sich fokale
Verkalkungsherde innerhalb der Tunica muscularis. Bei einem Tier (G 6931) wurde
innerhalb des Perimetriums ein noduläres Granulationsgewebe mit zentraler
Fibrinansammlung, markanter Gefäßausbildung und flächenhaften Blutungen
festgestellt. Das Tier mit der G-Nummer 6787 wies eine hochgradige interstitielle
Fibrose der Prostata mit eiweißreichem, teils verkalkten Sekret in den Drüsenlumina
auf. Die Untersuchung der Skelettmuskulatur aus dem Oberschenkelbereich lieferte
nur bei einem Tier (G 6940) einen pathohistologischen Befund in Form einer
geringgradigen hyalinscholligen Degeneration, die mit einer entzündlichen Reaktion
einher ging.
Die 6 Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim zeigten keine
pathohistologischen Befunde bei der Untersuchung des zentralen Nervensystems,
des Pankreas und der Geschlechtsorgane. Bei einem Tier (G 7063) wurde im
untersuchten Skelettmuskelanteil eine geringgradige Fibrosierung festgestellt.
Von den 3 Kontrolltieren gelangten ausschließlich die Berliner-Blau-gefärbten
Gewebeproben aus der Leber und die Darmproben (siehe Kapitel 3.2.3.1
Pathohistologie der Darmproben) zur pathohistologischen Untersuchung. Weitere
Organe standen für vergleichende lichtmikroskopische Erhebungen nicht zur
Verfügung, da sie für andere wissenschaftliche Untersuchungen verwendet wurden.
94 Eigene Untersuchungen
A
B
Abb. 27: A: Mittelgradige interstitielle Nephritis mit interstitiellem lymphohistiozytären Entzündungszellinfiltrat und geringgradiger Hyperämie bei einem Weißbüschelaffen mit WMS (G - Nr. 6859, H.&E.-Färbung, Scalebar = 100 μm). B: Hochgradige Glomerulopathie mit glomerulärer Sklerosierung (durchgehende Pfeile) und Dilatation des Bowmannschen Kapselraums. Mittelgradige chronische Tubulonephritis mit Tubulusdilatation, ausgeprägter Eiweißspeicherung und multifokal degenerativen Epithelveränderungen (unterbrochene Pfeile) (G - Nr. 6931, H.&E.-Färbung, Scalebar = 50 μm).
Eigene Untersuchungen 95
A
B
Abb. 28: A: Leber eines Weißbüschelaffen mit WMS, die eine diffuse hydropische Schwellung der Hepatozyten und nodulär angeordnete, herdförmige Rundzellinfiltrate aufweist. Das Sinusoidsystem ist geringgradig dilatiert (G - Nr. 6688, H.&E.-Färbung, Scalebar = 50 μm). B: Hochgradige Hämosiderinablagerungen in den Hepatozyten, die bei der Berliner-Blau-Reaktion positiv reagieren und einen häufigen Befund bei Weißbüschelaffen mit WMS darstellen (G - Nr. 7092, Berliner-Blau-Reaktion, Scalebar = 20 μm).
96 Eigene Untersuchungen
A
B
Abb. 29:
A: Hochgradige Verkalkungen im Bereich der Tunica media der Aorta abdominalis, die auf eine Überversorgung mit Vitamin D zurückgeführt werden (G - Nr. 6795, H.&E.-Färbung, Scalebar = 100 μm). B: Bei zahlreichen Weißbüschelaffen mit WMS finden sich geringgradige bis mittelgradige interstitielle Pneumonien, die durch ein gemischtzelliges Entzündungszellinfiltrat und eine geringgradige Hyperämie gekennzeichnet sind (G - Nr. 7092, H.&E.-Färbung, Scalebar = 50 μm).
Eigene Untersuchungen 97
3.2.4 Blutuntersuchungen
Bei fast allen Weißbüschelaffen mit WMS-Verdacht wurde vor der Euthanasie Blut
durch Herzpunktion entnommen, um hämatologische und serologische
Untersuchungen durchführen zu können.
3.2.4.1 Hämatologische Untersuchungen
Im Differentialblutbild zeigten sich bei zahlreichen Tieren auffallend niedrige
Leukozytenwerte (Leukopenie), die bei 5 Weißbüschelaffen mit einer Erhöhung der
neutrophilen Granulozyten (Neutrophilie) einher gingen. Die Beurteilung einer
Linksverschiebung war aufgrund fehlender Referenzwerte für stabkernige neutrophile
Granulozyten nicht möglich. Bei einem Tier (G 6634) lag die Häufigkeit der
stabkernigen Granulozyten bei 8 %, was eine Linksverschiebung vermuten lässt.
Weiterhin ergab die Untersuchung der Häufigkeitsverteilung der einzelnen
Leukozytenklassen bei 5 Weißbüschelaffen erniedrigte und bei 3 Weißbüschelaffen
erhöhte Werte der relativen Lymphozytenzahl. Eine Monozytose konnte bei 4
Weißbüschelaffen nachgewiesen werden, unter ihnen 3 Tiere von der Firma
Boehringer Ingelheim.
Die Ergebnisse des roten Blutbildes ergaben vereinzelt Hinweise auf eine Anämie.
Bei 5 Weißbüschelaffen aus dem DPZ lagen erniedrigte Hämatokritwerte vor.
Allgemein war der Hämatokrit der Weißbüschelaffen aus dem DPZ eher im Bereich
der unteren Grenze des Referenzbereichs angesiedelt, während die Hämatokritwerte
der Weißbüschelaffen der Firma Boehringer Ingelheim tendenziell höher waren und
im mittleren bis oberen Referenzbereich lagen. Bei 9 Tieren traten erniedrigte
Hämoglobinwerte auf, wobei der mittlere Hämoglobingehalt des einzelnen
Erythrozyten (MCH) bei allen Tieren innerhalb des Normbereichs lag. Dagegen war
das mittlere Volumen des Einzelerythrozyten (MCV) bei 8 Weißbüschelaffen erhöht.
Der mittlere zelluläre Hämoglobingehalt (MCHC) wurde als Blutparameter bei 8
Weißbüschelaffen untersucht und zeigte in allen Fällen deutlich erniedrigte Werte.
98 Eigene Untersuchungen
Eine tabellarische Zusammenstellung der Differentialblutbilder aller untersuchten
Weißbüschelaffen findet sich im Anhang (Kapitel 8.6., Anhangstab. 1).
3.2.4.2 Serologische Untersuchungen
Bei der vergleichenden Untersuchung von Serumproben auf diverse klinisch
chemische Parameter konnten bei den Weißbüschelaffen aus dem DPZ und den
Tieren von der Firma Boehringer Ingelheim ähnliche Tendenzen festgestellt werden.
Bei allen untersuchten Tieren lag eine Hypalbuminämie vor, die in den meisten
Fällen mit einer Erniedrigung der Gesamteiweißkonzentration einher ging. Weiterhin
wurden bei einigen Tieren beider Gruppen erniedrigte Kreatinin- und BUN- (blood
urea nitrogen) Werte im Serum nachgewiesen. Dagegen lagen bei 3 Tieren (G 6931,
G 6650, G 6694) erhöhte Harnstoffkonzentrationen im Blut vor. Die
pathohistologischen Nierenveränderungen dieser Tiere umfassten geringgradige
interstitielle Nephritiden bzw. eine mittelgradige chronisch aktive Tubulonephritis. Zu
den besonderen Befunden der serologischen Untersuchung gehörten außerdem
erniedrigte Cholesterinwerte bei einigen Weißbüschelaffen. Hinsichtlich der
Glukosewerte zeigten sich bei den Tieren aus dem DPZ größere Schwankungen als
bei den Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim. Deutliche
Abweichungen dieses Parameters vom Normbereich wurden aber nur vereinzelt
beobachtet. Dagegen waren die Konzentrationen bestimmter Serumenzyme teils
stark erhöht. So wurden bei den untersuchten Weißbüschelaffen regelmäßig erhöhte
Werte für die Lakatdehydrogenase (LDH), die Aspartat-Amino-Transferase (AST),
die Kreatinkinase (CK) und die Alkalischen Phosphatase (AP) gemessen. Die
Phosphatwerte waren bei den Weißbüschelaffen der DPZ - Kolonie teils erhöht und
teils erniedrigt, während die meisten Tiere von der Firma Boehringer Ingelheim
erhöhte Phosphatwerte aufwiesen. Der Kalziumspiegel unterlag nur bei den
Weißbüschelaffen aus dem DPZ einigen Schwankungen, wobei sowohl erhöhte als
auch erniedrigte Kalziumkonzentrationen im Serum nachgewiesen wurden. Bei
Weißbüschelaffen mit erhöhten Serumkalziumwerten konnten gleichzeitig
ausgeprägte Verkalkungen im Bereich des Gefäßsystems nachgewiesen werden.
Eigene Untersuchungen 99
Darüber hinaus wurden sporadisch erniedrigte Natrium- und erhöhte Kaliumwerte
beobachtet. Eine Übersicht über die Ergebnisse der klinischen Chemie ist für beide
untersuchten Tiergruppen im Anhang aufgeführt (Kapitel 8.6., Anhangstab. 2 und 3).
3.2.5 Urinuntersuchungen
Die Ergebnisse der Urinuntersuchungen, die bei 2 Weißbüschelaffen aus der DPZ -
Kolonie durchgeführt wurden, sind in Tabelle 8 aufgeführt. Aus Ermangelung an
Referenzwerten für Weißbüschelaffen wurden zur Bewertung der Ergebnisse
Normwerte des Menschen herangezogen. Bei dem Tier mit der G - Nummer 7092
war ausschließlich der Kreatiningehalt im Urin erniedrigt. Die Ergebnisse des Tieres
mit der G - Nummer 7096 zeigten deutlichere Abweichungen von den angegebenen
Referenzwerten. Es lag eine ausgeprägte Proteinurie vor, wobei insbesondere die
Albuminfraktion im Harn erhöht war. Der pathohistologische Nierenbefund dieses
Tieres bestand in einer geringgradigen interstitiellen Nephritis.
Tab. 8: Ergebnisse der Urinuntersuchungen von 2 Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie.
G - Nr. Gesamtprotein (mg/l) Kreatinin (mg/dl) Albumin (mg/l)7092 75 17 117096 484 15 70
Referenzwerte 30 - 150 50 - 150 < 20
3.2.6 Mikrobiologische und parasitologische Untersuchungen
Mit Hilfe der mikrobiologischen Untersuchungen konnte bei den Weißbüschelaffen
mit WMS ein relatives breites Spektrum aerober, bakterieller Erregerstrukturen
nachgewiesen werden. Während im Bereich des Dickdarms bei jedem untersuchten
Tier ein positiver Bakteriennachweis gelang, wurden im Dünndarm nur bei etwa der
Hälfte der Weißbüschelaffen Bakterienkolonien isoliert. Die bakterielle Untersuchung
des Organspektrums ergab nur bei einem Weißbüschelaffen ein positives Ergebnis.
100 Eigene Untersuchungen
Bei dem Tier mit der G - Nummer 7035 lag eine hochgradige Besiedlung der Niere
mit Serratia liquefacies vor. Die bakteriellen Befunde des Dünn- und Dickdarms und
des Organspektrums sind für die einzelnen Weißbüschelaffen mit WMS aus dem
DPZ und von der Firma Boehringer Ingelheim im Anhang aufgeführt (Anhangstab. 4).
Eine Übersicht über das Vorkommen von Mono- bzw. Mehrfachinfektionen im
Intestinaltrakt der untersuchten Weißbüschelaffen liefert Tabelle 9. Im Dünndarm
wurden maximal 3 verschiedene Bakterienstämme gleichzeitig nachgewiesen.
Dagegen lag im Bereich des Dickdarms in jeweils einem Fall eine Vierfachinfektion
(G 6795) und eine Fünffachinfektion (G 6787) vor. Der überwiegende Anteil der
bakteriellen Befunde des Dickdarms bestand allerdings bei beiden Weißbüschelaffen
- Gruppen aus dem alleinigen Nachweis von E. coli. Mit Ausnahme der
Monoinfektionen des Dünndarms mit Streptococcus sp. und einem hämolytischen E.
coli sowie der Monoinfektion des Dickdarms mit Streptococcus sp. und der
Doppelinfektion des Dickdarms mit Campylobacter sp. und Klebsiella ozeaneae
wurde bei allen Tieren E. coli als Bestandteil der normalen Darmflora isoliert.
Eigene Untersuchungen 101
Tab. 9: Erregerkombinationen im Intestinaltrakt bei den Weißbüschelaffen mit WMS aus dem DPZ und von der Firma Boehringer Ingelheim (BI).
DPZ BIMonoinfektionen
E. coli 1hämolytischer E. coli 1Streptococcus sp. 1
DoppelinfektionenE. coli + Streptococcus sp. 1 1E. coli + Acinetobacter sp. 1E. coli + Klebsiella sp. 1
DreifachinfektionenE. coli + Streptococcus sp.+ Klebsiella sp. 1E. coli + Streptococcus sp.+ Campylobacter sp. 1
DPZ BIMonoinfektionen
E. coli 8 5Streptococcus sp. 1
DoppelinfektionenE. coli + Streptococcus sp. 2 1E. coli + hämolytischer E. coli 2Campylobacter sp. + Klebsiella ozeaneae 1
DreifachinfektionenE. coli + Klebsiella sp. + Proteus sp. 1
VierfachinfektionenE. coli + hämolytischer E. coli + Campylobacter sp. + Klebsiella sp. 1
FünffachinfektionenE. coli + Klebsiella sp. + Streptococcus sp. + Campylobacter sp. + Citrobacter freundii 1
Häufigkeit
Häufigkeit
Dünndarm
Dickdarm
Ein ELISA zum spezifischen Nachweis von Clostridium difficile wurde bei 21 von 23
Weißbüschelaffen durchgeführt. Der Test verlief bei allen untersuchten Tieren
negativ. Bei der Typisierung der hämolytischen E. coli - Stämme wurden die
Serovaren O6:H1 bzw. O4:H6 nachgewiesen.
Die parasitologischen Untersuchungen von Dünndarm- und Dickdarmkot ergaben bei
3 Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie (G 6931, G 6940 und G 7035) und bei
einem Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim (G 7062) ein positives
102 Eigene Untersuchungen
Ergebnis für Giardia lamblia. Andere parasitäre Strukturen wurden nicht
nachgewiesen.
3.2.7 Stammbaumanalysen
Um mögliche genetische Einflüsse bei der Entstehung des Wasting Marmoset
Syndroms untersuchen zu können, wurden für 3 Weißbüschelaffen - Paare
Familienstammbäume über insgesamt 3 Generationen erstellt. Diese Stammbäume
sind unter der Angabe von Tiernummern im Anhang aufgeführt (Kapitel 8.7.). Die
vergleichende Betrachtung der Nachkommen der 3 untersuchten Paare hinsichtlich
des Auftretens von WMS - Erkrankungen ergab keine eindeutigen Hinweise auf eine
genetische Komponente bei der Ätiologie des Wasting Marmoset Syndroms. Die
Nachkommen der beiden Paare mit Merkmalsträgern (WMS) zeigten keine Häufung
von Erkrankungen im Vergleich zu den Nachkommen des Paares ohne
Merkmalsträger. Im Gegenteil konnten bei dem Paar ohne WMS in der 2. Generation
insgesamt 4 Merkmalsträger identifiziert werden, während die Paare mit
Merkmalsträgern nur jeweils ein erkranktes Tier in der 1. (Paar mit einem
Merkmalsträger) bzw. 2. (Paar mit zwei Merkmalsträgern) Generation aufwiesen.
Erkrankte Tiere waren sowohl männlichen als auch weiblichen Geschlechts, wobei
unter den Nachkommen die männlichen Merkmalsträger überwogen. Aufgrund des
Verteilungsmusters der Krankheitsfälle innerhalb der untersuchten Stammbäume ist
anzunehmen, dass es sich bei dem WMS nicht um einen rein erblichen Defekt mit
monogenetischem Hintergrund handelt.
Diskussion 103
4 Diskussion
Ziel der vorliegenden Arbeit war die Identifizierung und detaillierte
pathomorphologische Charakterisierung des zentralen pathogenetischen
Geschehens sowie der assoziierten Sekundärveränderungen bei dem Wasting
Marmoset Syndrom der Weißbüschelaffen (Callithrix jacchus). Gegenstand der
Untersuchungen waren insgesamt 25 Weißbüschelaffen mit klinischer WMS -
Symptomatik, die aus zwei unterschiedlichen Labortierhaltungen stammten. Da
vorangegangene Untersuchungen zum Wasting Marmoset Syndrom auf eine
zentrale Rolle entzündlicher Darmveränderungen in der Pathogenese des WMS
hindeuteten (QUOHS 2003), lag der Schwerpunkt dieser Studie auf
pathohistologischen und immunhistochemischen Untersuchungen der verschiedenen
Abschnitte des Intestinaltraktes. Aufgrund der klinischen und pathologischen
Komplexität der Erkrankung und der bislang ungeklärten Ätiologie wurden darüber
hinaus klinische Verlaufsuntersuchungen, pathomorphologische Untersuchungen der
übrigen Organsysteme und diverse ätiologische Untersuchungen durchgeführt mit
dem Ziel, das Krankheitsbild des WMS einheitlich zu definieren und Hinweise auf
mögliche kausale Faktoren zu erhalten.
4.1 Klinische Aspekte
Aufgrund der in der Literatur beschriebenen Heterogenität des klinischen Bildes des
Wasting Marmoset Syndroms mussten für die vorliegende Studie zunächst
einheitliche, definierte klinische Kriterien zur Erkennung von erkrankten
Weißbüschelaffen geschaffen werden. Da bei der klinischen Symptomatik des WMS
ein progressiver, nicht reversibler Gewichtsverlust bei erhaltener Futteraufnahme als
Leitsymptom angesehen wird (TRIBE 1978; BRACK u. ROTHE 1980; MORIN 1983;
LOGAN u. KHAN 1996), wurde bei der Aufnahme der Weißbüschelaffen in die
Untersuchungsgruppe in erster Linie der Gewichtsverlauf der Tiere berücksichtigt.
Vor dem Hintergrund physiologischer Tiergewichte und veröffentlichter Daten über
die Gewichtsverläufe und therapeutischen Erfolge bei Weißbüschelaffen mit WMS
104 Diskussion
wurden folgende Kriterien zur Erkennung und Auswahl von potenziellen Wastern
festgesetzt:
• bei adulten Tieren: Gewichtsverlust von mehr als 50 g innerhalb weniger Tage
oder langsam fortschreitende Gewichtsreduktion (mehrere Wochen bzw. Monate)
mit finalen Gewichten von weniger als 300 g bei erhaltener Futteraufnahme
oder
• bei juvenilen bzw. subadulten Tieren (männlich: 16 Monate, weiblich: 12 Monate):
mangelhafte Gewichtsentwicklung sowie Entwicklungsstörungen
und
• Therapieresistenz gegenüber gängigen Antibiotika bzw. Auftreten von Rezidiven
nach kurzfristigem therapeutischen Erfolg
Die anhand dieser Auswahlkriterien gebildete Untersuchungsgruppe bestand
zunächst aus 19 Weißbüschelaffen aus dem DPZ und 6 Weißbüschelaffen von der
Firma Boehringer Ingelheim. Im Anschluss an die postmortalen Untersuchungen
wurde allerdings bei 2 Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie ein neoplastisches
Geschehen (malignes Lymphom) als Krankheitsursache festgestellt. Dies zeigt, dass
die oben aufgeführten klinischen Kriterien eine nur bedingte Aussagekraft hinsichtlich
des Vorliegens eines WMS besitzen. Bei den verbleibenden 17 Weißbüschelaffen
aus dem DPZ und den 6 Tieren von der Firma Boehringer Ingelheim wurde die
Diagnose WMS im Verlauf der weiteren pathomorphologischen Untersuchungen
bestätigt.
Bei den Tieren mit WMS - Verdacht aus dem Deutschen Primatenzentrum handelte
es sich um adulte Weißbüschelaffen im Alter zwischen 1 und 9 Jahren, wobei eine
Häufung von Krankheitsfällen zwischen dem 3. und dem 8. Lebensjahr festgestellt
wurde. Diese Beobachtungen entsprechen weitgehend den Angaben in der Literatur,
nach denen in der Regel adulte, geschlechtsreife Tiere von dem Wasting Marmoset
Syndrom betroffen sind (KING 1976; LOGAN u. KHAN 1996). Während die von
QUOHS (2003) ermittelte Hauptaltersklasse mit WMS - Erkrankungen das 5. bis 7.
Diskussion 105
Lebensjahr umfasst, geben SAINSBURY und Mitarbeiter (1992) das
Durchschnittsalter der Tiere mit WMS mit 6,8 Jahren an. Die von SHIMWELL und
Mitarbeitern (1979) bei Jungtieren beschriebene Manifestationsform des WMS, die
durch Entwicklungsstörungen und schlechte Gewichtszunahmen gekennzeichnet ist,
konnte in der Weißbüschelaffen - Kolonie des DPZ nicht nachgewiesen werden.
Dagegen wurden bei den 5 subadulten Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer
Ingelheim schwankende Gewichtsverläufe und mangelhafte Gewichtszunahmen
beobachtet, die den Beschreibungen von SHIMWELL et al. (1979) entsprechen.
Somit scheint es sich bei dem WMS um eine altersunabhängige Erkrankung mit zwei
verschiedenen Manifestationsformen bei juvenilen/ subadulten und adulten Tieren zu
handeln.
Die Analyse der Geschlechtsverteilung ergab für die untersuchten Weißbüschelaffen
der DPZ - Kolonie eine Verschiebung in Richtung des weiblichen Geschlechts (7,12),
während die Tiere von der Firma Boehringer Ingelheim fast alle männlich waren
(5,1). Aufgrund der Tatsache, dass in den bisherigen Abhandlungen über das WMS
fast ausschließlich von einer ausgewogenen Geschlechtsverteilung berichtet wird,
erscheint eine Geschlechtsdisposition für die Erkrankung eher unwahrscheinlich
(SHIMWELL et al. 1979; LOGAN u. KHAN 1996). Gegen eine
Geschlechtsdisposition sprechen auch die Ergebnisse der Stammbaumanalysen, bei
denen überwiegend männliche Merkmalsträger auftraten. Dagegen wies QUOHS
(2003) in einer umfassenden, retrospektiven Studie über das WMS bei
Weißbüschelaffen eine Häufung von Krankheitsfällen bei den weiblichen Tieren nach
und bestätigte damit die Beobachtungen von BRACK und ROTHE (1980), nach
denen Fälle von WMS vor allem bei alpha-Weibchen auftreten. Es handelt sich dabei
allerdings nicht um eine echte, genetisch bedingte Geschlechtsdisposition, sondern
um ein ethologisch bedingtes Phänomen, dass sich aus der Sozialstruktur der
Weißbüschelaffen ergibt. Danach setzen sich ranghohe alpha-Weibchen gegenüber
den anderen Gruppenmitgliedern am Futterplatz durch und nehmen von gemischten
Futterrationen oftmals nur bestimmte, schmackhafte, aber ernährungsphysiologisch
ungünstige Futterkomponenten zu sich, was sie für die Entwicklung eines WMS
106 Diskussion
empfänglicher macht (BRACK u. ROTHE 1980).
Bei der Dokumentation der Gewichtsentwicklung der untersuchten adulten Tiere
konnten sowohl langsam progrediente Gewichtsabnahmen als auch schnell
fortschreitende Gewichtsverluste nachgewiesen werden, wobei eine langsam
fortschreitende, kontinuierliche Gewichtsreduktion über mehrere Wochen bzw.
Monate tendenziell häufiger auftrat als Gewichtsverluste von mehr als 50 g innerhalb
weniger Tage. Zum Zeitpunkt der Sektion lagen die Gewichte der meisten
Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie zwischen 230 g und 320 g. Nach RICHTER
(1984) beträgt das Normalgewicht adulter wildlebender Weißbüschelaffen 300 g bis
350 g, wobei Tiere in Gefangenschaft deutlich schwerer werden können. Die
Ausgangsgewichte der in dieser Studie untersuchten Weißbüschelaffen aus dem
DPZ lagen mit 300 g bis 500 g teils deutlich über den von RICHTER (1984)
angegebenen Werten. Unter Berücksichtigung der entsprechenden
Ausgangsgewichte verloren die betroffenen Weißbüschelaffen im Verlauf der
Erkrankung demnach bis zu 45 % ihres Körpergewichtes, bevor sie - mit einer
Ausnahme - euthanasiert wurden. Ohne die aus ethischen Gründen indizierte
Euthanasie wären bei den meisten Tieren vermutlich noch weitaus geringere
Gewichte nachzuweisen und in Bezug auf den maximalen prozentualen
Gewichtsverlust ein deutlich höherer Wert zu verzeichnen gewesen (CHALIFOUX et
al. 1982, BARNARD et al. 1988; BEGLINGER et al. 1988). Im Vergleich zu den
Weißbüschelaffen aus dem DPZ zeigten die Tiere von der Firma Boehringer
Ingelheim mit Werten zwischen 250 g und 300 g ausgesprochen niedrige
Ausgangsgewichte, wobei zu berücksichtigen ist, dass 5 der 6 Tiere ein Alter
zwischen 10 und 16 Monaten hatten und dementsprechend als subadult eingestuft
wurden. Die Gewichtsverläufe dieser Weißbüschelaffen waren durch starke
Gewichtsschwankungen unterhalb der 300 g - Grenze und mangelhafte
Gewichtszunahmen charakterisiert, die auch von SHIMWELL und Mitarbeitern (1979)
beobachtet wurden. Ein interessanter Befund innerhalb der DPZ - Kolonie war ein in
der postpartalen Phase beginnender, progressiver Gewichtsverlust bei mehreren
weiblichen Tieren. Eine gleichartige Beobachtung machte auch KING (1976), der von
Diskussion 107
einer in der Laktationsphase auftretenden Gewichtsreduktion bei einem weiblichen
Weißbüschelaffen berichtete. Der zeitliche Zusammenhang zwischen einer mit
vermehrtem Stress und metabolischen Belastungen verbundenen Situation und dem
Auftreten des Wasting Marmoset Syndroms legt den Verdacht nahe, dass Stress in
Kombination mit Stoffwechselimbalanzen bei der Ätiologie des WMS von zentraler
Bedeutung ist.
Neben der Gewichtsreduktion konnten bei den Weißbüschelaffen der
Untersuchungsgruppe nur wenige weitere Symptome nachgewiesen werden. Ein
häufiger Befund bei der klinischen Untersuchung der Tiere war intermittierender
wässriger, teils blutiger Durchfall. Dieses von zahlreichen Autoren für das WMS
beschriebene klinische Merkmal (KING 1976; BRACK u. ROTHE 1980;
POLESHCHUK et al. 1988; POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN 1996) trat allerdings
nicht bei allen untersuchten Tieren auf, so dass es sich nicht als Kriterium für die
Erkennung potentieller Waster eignet. Weitere regelmäßig in der Literatur
beschriebene klinische Anzeichen für das WMS, zu denen Bewegungsstörungen,
anämische Erscheinungen und Veränderungen des Haarkleides gehören (IALEGGIO
u. BAKER 1995), konnten bei den Weißbüschelaffen aus dem DPZ nicht
nachgewiesen werden, was erneut die Heterogenität des Krankheitsbildes
unterstreicht. Dagegen konnten bei den Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer
Ingelheim in einem Fall Haarkleidveränderungen in Form von Alopezie
nachgewiesen werden, die mit den Beschreibungen von MCNEES und Mitarbeitern
(1983), SHIMWELL und Mitarbeitern (1979) und LOGAN und KHAN (1996)
übereinstimmen. Die Tatsache, dass therapeutische Ansätze bei Weißbüschelaffen
mit WMS zu keinem dauerhaften Erfolg führen, wurde in diversen Berichten über das
WMS bestätigt (SHIMWELL et al. 1979; CHALIFOUX et al. 1985; SAINSBURY et al.
1992) und diente in der vorliegenden Studie als weiteres klinisches Auswahlkriterium
bei der Aufstellung der Untersuchungsgruppe. Als Konsequenz dieser klinischen
Beobachtungen ist festzustellen, dass Gewichtsverluste bzw. mangelhafte
Gewichtszunahmen und fehlendes Ansprechen auf therapeutische Ansätze als
einzige obligat intravital erfassbare Merkmale einer WMS - Erkrankung anzusehen
108 Diskussion
sind, und dass bei der Beurteilung von Weißbüschelaffen hinsichtlich des Vorliegens
eines WMS demnach ausschließlich die Analyse von Gewichtsdaten in Kombination
mit der Feststellung einer Therapieresistenz sinnvoll erscheint. Die beiden Fälle der
Weißbüschelaffen mit malignen Lymphomen aus der ursprünglichen Untersuchungs
- Gruppe des DPZ machen allerdings deutlich, dass es sich bei den beiden
genannten klinischen Beurteilungsmerkmalen um relativ unspezifische Kriterien
handelt, die auch bei anderen Erkankungen, z. B. bei Tumorerkrankungen, auftreten
können. Die Diagnose WMS kann daher nicht ausschließlich anhand klinischer
Kriterien gestellt werden, so dass finale pathohistologische Untersuchungen zum
Ausschluss anderer Erkrankungen unerlässlich sind.
Zusätzlich zu der klinischen Beurteilung der erkrankten Weißbüschelaffen standen
als ergänzende Untersuchungen intra vitam labordiagnostische Methoden in Form
von hämatologischen bzw. serologischen Untersuchungen zur Verfügung. Bei der
Analyse der Differentialblutbilder zeigte sich bei zahlreichen Tieren (78 %) eine
ausgeprägte Leukopenie, die im Widerspruch zu der gelegentlich im Zusammenhang
mit dem WMS nachgewiesenen Leukozytose als Folge einer Sekundärinfektion steht
(BARNARD et al. 1988; SAINSBURY et al. 1992). Niedrige Leukozytenwerte werden
grundsätzlich bei zwei pathophysiologischen Zuständen beobachtet. Zum einen
kommt es im Rahmen lokaler Entzündungsprozesse, hervorgerufen durch bakterielle
Infektionen oder zellschädigende Immunreaktionen, zu einer Emigration
funktionstüchtiger Granulozyten ins Gewebe und damit zu einer reaktiven
Produktionssteigerung mit beschleunigter Ausschüttung von Leukozyten ins Blut. Im
Blut ist im Verlauf dieser sogenannten leukozytären Reaktion in der akuten Phase
eine Leukopenie mit Linksverschiebung nachweisbar, während in späteren Stadien
eine überkompensatorische Leukozytose mit Linksverschiebung vorliegt. Als zweite
Ursache für eine Leukopenie kommen Störungen in der Leukozytopoese in Frage,
die durch diverse knochenmarkschädigende Einflüsse (u. a. Mikroorganismen,
Mykotoxine, Chemikalien etc.) hervorgerufen werden können und sich in einer
Leukopenie mit Rechtsverschiebung oder sogar einer Panzytopenie im Blut
manifestieren (KRAFT u. DÜRR 1999). Aufgrund fehlender Referenzwerte für
Diskussion 109
stabkernige Granulozyten bei Weißbüschelaffen konnten in der vorliegenden Studie
keine Aussagen über eine Links- bzw. Rechtsverschiebung gemacht werden. Die
vereinzelt nachgewiesene Neutrophilie, Lymphozytose und Monozytose sprechen
allerdings mehr für eine leukozytäre Reaktion infolge akuter, lokaler
Entzündungreaktionen als für eine Schädigung des Knochenmarks. Eine Anämie, die
häufig in Verbindung mit dem WMS beschrieben wird (BEGLINGER et al. 1988;
PFISTER et al. 1990; PRITZKER u. KESSLER 1998), konnte auf der Grundlage
hämatologischer Untersuchungen nur bei 5 Weißbüschelaffen aus der DPZ - Kolonie
festgestellt werden und scheint damit ebenfalls kein obligates Charakteristikum einer
WMS - Erkrankung darzustellen. Die für eine weitere Unterteilung der Anämie
notwendige Bestimmung des MCV, MCH und MCHC erfolgte bei 2 der 5 anämischen
Weißbüschelaffen, ergab allerdings aufgrund widerspüchlicher Daten (MCV erhöht,
MCHC erniedrigt) keine eindeutigen Hinweise auf die vorliegende Anämieform. Eine
morphologische Beurteilung der Erythrozyten sowie eine quantitative Bestimmung
der Normoblasten und Retikulozyten wurde nicht durchgeführt. Auch serologische
Parameter, die zur weiteren Differenzierung von Anämien herangezogen werden
(Bilirubin, Eisen, Gesamtprotein), ergaben keine eindeutigen Hinweise auf den
Anämiecharakter. Aufgrund der bei beiden Tieren vorliegenden Hypoproteinämie ist
allerdings denkbar, dass es sich um eine nutritiv bedingte Anämie infolge
Proteininsuffizienz handelt, die von WIXSON und GRIFFITH (1986) bei nicht
humanen Primaten beschrieben ist. In der Literatur wird bei der Anämie der
Weißbüschelaffen mit WMS dagegen von einer hämolytischen Form ausgegangen
(RICHTER 1984; LOGAN u. KHAN 1996).
Mithilfe von serologischen Untersuchungen konnte bei allen untersuchten
Weißbüschelaffen (100 %) aus dem DPZ und von der Firma Boehringer Ingelheim
eine Hypalbuminämie festgestellt werden, die in den meisten Fällen mit einer
erniedrigten Gesamteiweißkonzentration (76 %) einher ging. Auch in der Literatur
wird regelmäßig von einer Hypoproteinämie bei Weißbüschelaffen mit WMS
berichtet, wobei fast immer die Albuminfraktion im Serum vermindert ist (SHIMWELL
et al. 1979; POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN 1996). Zu den Ursachen derartiger
110 Diskussion
serologischer Befunde gehören u. a. nutritiver Eiweißmangel bei Hungerzuständen,
Malassimilation, Proteinverlustenteropathien, Nephropathien (nephrotisches
Syndrom) und chronische Hepatopathien (KRAFT u. DÜRR 1999). Unter
Berücksichtigung der histologischen Befunde des Organspektrums bei den in dieser
Studie untersuchten Weißbüschelaffen ist zu vermuten, dass insbesondere die
intestinalen Ursachen, v. a. die unter dem Begriff der Malassimilation
zusammengefassten Prozesse der Malabsorption und Maldigestion, in diesem
Zusammenhang von Bedeutung sind. Zu den charakteristischen serologischen
Kennzeichen einer Hypoproteinämie gehören außerdem erniedrigte BUN - (blood
urea nitrogen) und Cholesterin - Spiegel. Eine Abweichung dieser klinisch-
chemischen Parameter als Ausdruck eines Proteinmangels, die bereits von
BARNARD und Mitarbeitern (1988) bei Schnurrbarttamarinen mit WMS festgestellt
wurden, waren auch bei zahlreichen Tieren in der vorliegenden Studie nachweisbar.
Von den 3 Tieren mit WMS, bei denen serologisch erhöhte Harnstoffwerte
nachgewiesen wurden, konnten histologisch in allen Fällen Nierenalterationen
nachgewiesen werden. Eine im Zuge von Filtrationsstörungen der Niere ebenfalls zu
erwartende Erhöhung der Kreatininwerte im Serum blieb bei diesen Tieren allerdings
aus. Im Gegenteil lagen bei den meisten untersuchten Weißbüschelaffen (62 %) die
Kreatininwerte unterhalb des Referenzbereiches. Dagegen deuten die Ergebnisse
der Urinuntersuchungen zumindest in einem Fall (G 7096) auf einen renalen
Proteinverlust und damit auf eine klinisch manifeste Funktionsstörung der Nieren hin.
Eine Erniedrigung der Kreatininwerte wurde in der Literatur über das WMS bislang
nicht beschrieben, tritt aber ausschließlich im Rahmen kachektischer Zustände auf
und stellt somit bei den teils stark abgemagerten Weißbüschelaffen mit WMS keinen
ungewöhnlichen Befund dar. Weiterhin lagen bei vielen Weißbüschelaffen aus
beiden Untersuchungsgruppen erhöhte Serumenzymwerte (LDH, AST, CK, AP) vor,
die in der Literatur ebenfalls häufig im Zusammenhang mit dem WMS beschrieben
werden (SHIMWELL et al. 1979; BEGLINGER et al. 1988; PFISTER et al. 1990;
POTKAY 1992; LOGAN u. KHAN 1996). Mögliche Ursachen für eine Erhöhung
dieser Enzymaktivitäten sind Myopathien, Osteopathien und/ oder Hepatopathien
(KRAFT u. DÜRR 1999). Nach BARNARD und Mitarbeitern (1988) treten
Diskussion 111
Funktionsstörungen der Leber mit vermehrter Freisetzung von Leberenzymen ins
Blut wiederum als Folge einer Proteindefizienz auf. Zusammenfassend ist zu sagen,
dass die Auswertung der serologischen Untersuchungsergebnisse Hinweise auf
intestinale, hepatische, renale, ossäre und/ oder muskuläre Krankheitsprozesse
ergibt. In der vorliegenden Studie konnten entsprechende pathomorphologische
Befunde allerdings nur im Intestinaltrakt, in den Nieren, in der Leber und im
knöchernen Skelett nachgewiesen werden. Die Ursache für die Erhöhung der
muskelspezifischen Kreatinkinase (CK) liegt wahrscheinlich nicht in
myodegenerativen Veränderungen, sondern ist die Folge von intramuskulären
Injektionen, die bei therapeutischen Maßnahmen im Rahmen der Vorbehandlung
verabreicht wurden. Unsere Untersuchungen zeigen aber, dass für die Diagnose
WMS, abgesehen von einer Hypalbuminämie, keine serologischen Marker
entscheidende Aussagekraft haben.
4.2 Pathomorphologie des Intestinaltraktes
Im Zentrum der pathomorphologischen Erhebungen der vorliegenden Arbeit standen
die histologischen und immunhistochemischen Untersuchungen des Darmtrakts
unter Berücksichtigung der 6 verschiedenen Darmlokalisationen. Histologisch konnte
gezeigt werden, dass alle untersuchten Weißbüschelaffen (100 %) entzündliche
Veränderungen in der Schleimhaut des Dünndarms und/ oder Dickdarms aufwiesen,
die überwiegend durch einen minimalen bis geringen Schweregrad sowie einen
chronisch aktiven oder chronischen Verlauf gekennzeichnet waren. Als Reaktion auf
die entzündlichen Darmreaktionen zeigten die regionalen Lnn. mesenteriales bei fast
allen Tieren eine geringgradige bzw. mittelgradige follikuläre Hyperplasie. Diese
Ergebnisse stimmen mit den Befunden verschiedener Studien über das Wasting
Marmoset Syndrom überein, nach denen Weißbüschelaffen mit WMS regelmäßig
eine meist geringgradige chronische bzw. chronisch aktive Enteritis aufweisen
(CHALIFOUX et al. 1982; TUCKER 1984; QUOHS 2003). Hinsichtlich der Verteilung
der entzündlichen Darmveränderungen unterscheiden sich die Ergebnisse der
vorliegenden Studie allerdings von den Beschreibungen in der Literatur. Während die
112 Diskussion
meisten Autoren im Zusammenhang mit dem WMS über chronische Kolitiden
berichten (CHALIFOUX et al. 1982; POTKAY 1992; SAINSBURY et al. 1992;
IALEGGIO u. BAKER 1995; QUOHS 2003), konnten bei den untersuchten
Weißbüschelaffen aus dem DPZ und von der Firma Boehringer Ingelheim
gleichermaßen entzündliche Veränderungen im Duodenum, Jejunum, Ileum, Zäkum,
Kolon und Rektum nachgewiesen werden, wobei eine deutliche Akzentuierung des
Schweregrades in den vorderen Darmabschnitten vorlag. Insbesondere im Jejunum
wurde ein hoher Anteil an mittelgradigen Enteritiden festgestellt. Dagegen lagen im
Kolon und im Rektum fast ausschließlich minimale und geringgradige
Darmentzündungen vor. Mit Ausnahme des Kolons wurden in allen Darmabschnitten
am häufigsten chronische Enteritiden nachgewiesen, wohingegen im Kolon die
chronisch aktive Verläufe dominierten. Unter der Voraussetzung, dass die
entzündlichen Veränderungen in den vorderen Darmabschnitten mit einer
Beeinträchtigung der Dünndarmfunktion einher gehen, kann schlussfolgernd
angenommen werden, dass eine Malassimilation bei der Entstehung des WMS von
zentraler pathogenetischer Bedeutung ist. Die akute Komponente bei der Mehrzahl
der Kolitiden spricht wiederum für eine wiederkehrende schleimhautschädigende
Noxe im Kolon, die zu einer rezidivierenden Aktivierung der zugrundeliegenden
chronischen Darmentzündung führt. In jedem Fall scheinen die intestinalen
Entzündungen bei der Pathogenese des Wasting Marmoset Syndroms ein frühes
Ereignis darzustellen, auf dessen Grundlage die Entwicklung der weiteren
nachgewiesenen Organveränderungen basiert.
Unabhängig von der Darmlokalisation bestanden die entzündlichen Zellinfiltrate in
der Lamina propria bei den untersuchten Weißbüschelaffen aus mononukleären
Zellen, die im Falle eines chronisch aktiven Verlaufs von polymorphkernigen
Granulozyten begleitet wurden. Weitere sporadisch nachweisbare histologische
Merkmale der Enteritiden umfassten eine minimale bis mittelgradige Hyperplasie des
GALT - Systems als Ausdruck einer immunologischen Sekundärreaktion und
Enterozytenatypien in Form von nekrotischen Zellen, Vakuolisierungen und
intraepithelialen Mikroabszessen, deren Ursache in einer unregelmäßig erhöhten
Diskussion 113
Turnover-Rate des Schleimhautepithels liegt. Vereinzelt wurden in den
verschiedenen Darmlokalisationen Kryptabszesse nachgewiesen, die durch einen
Verschluss der Krypten entstehen. In der Folge entwickelt sich eine Kryptdilatation
und eine lokale Dysbakteriose, die wiederum zu einer Einwanderung neutrophiler
Granulozyten führt. Im weiteren Verlauf kommt es zu einer Abflachung des
Kryptepithels, das schließlich der Nekrose unterliegt (CHALIFOUX et al. 1982). Bei
den flächenhaften Epitheldesquamationen, die regelmäßig in den verschiedenen
Darmabschnitten nachweisbar waren, handelt es sich vermutlich nicht um eine Folge
der entzündlichen Darmveränderungen, sondern um artefiziell bedingte Läsionen, die
im Verlauf der Schnittherstellung entstanden sind. Die im Zusammenhang mit
chronischen Enteritiden zu erwartenden atrophischen Schleimhautveränderungen
zeigten sich im Dünndarm zahlreicher Tiere in Form von Zottenatrophie und -
fusionen und Kryptdilatationen, während im Dickdarm atrophische und dilatierte
Krypten mit teils verzweigter Struktur und abgeflachtem Epithel nachgewiesen
werden konnten. Derartige Alterationen der Zotten- bzw. Kryptmorphologie traten
allerdings in der Regel im Zusammenhang mit schwereren Entzündungsprozessen
auf. Bei zahlreichen Tieren zeigte sich außerdem eine Dilatation der duodenalen
Brunnerschen Drüsen, die nach OKAZAKI und Mitarbeitern (1996) häufig auch bei
gesunden Weißbüschelaffen nachgewiesen werden kann, so dass es sich dabei
wahrscheinlich nicht um eine entzündlich bedingte Veränderung handelt. Weiterhin
lag bei zahlreichen Tieren eine Dysbakteriose mit stäbchenförmiger
Bakterienmorphologie an der epithelialen Oberfläche vor. Vergleichbare
histologische Untersuchungen über die Darmmorphologie von Weißbüschelaffen mit
WMS wurden von der Arbeitsgruppe CHALIFOUX et al. (1982) durchgeführt. Im
Rahmen dieser retrospektiven Studie über das Wasting Marmoset Syndrom bei
Lisztaffen (Saguinus oedipus) fanden detaillierte histopathologische Untersuchungen
des Intestinaltrakts von Wastern mit chronischer Kolitis statt. Wie auch in der
vorliegenden Studie waren die in dieser Arbeit beschriebenen Darmentzündungen
gekennzeichnet durch eine vorwiegend mononukleäre, teils polymorphnukleäre
Zellinfiltration in der Lamina propria sowie durch Epithelatypien und Alterationen der
Krypten. Um mögliche Assoziationen zwischen bestimmten Merkmalen der
114 Diskussion
Enteritiden erkennen zu können, quantifizierten CHALIFOUX und Mitarbeiter (1982)
sämtliche Befunde der histopathologischen Untersuchungen und analysierten sie
statistisch mit Hilfe des Chi-Square-Tests. Anhand der statistischen Methoden
konnte gezeigt werden, dass bei der chronischen Kolitis des WMS signifikante
Assoziationen zwischen epithelialer Atypie, Kryptabszessen, mononukleärer und
polymorphnukleärer Zellinfiltration, lymphatischer Hyperplasie und Gewichtsverlust
bestehen. Folglich stehen alle diese Kriterien im Zusammenhang mit derselben
Erkrankung und stellen gemeinsam die Manifestationsform der chronischen Kolitis
des WMS dar.
Immunhistochemische Untersuchungen zur Charakterisierung der intestinalen
Entzündungszellinfiltration sind im Rahmen der WMS - Forschung bislang nicht
durchgeführt worden. Mit Hilfe der immunhistochemischen Markierung von T-
Lymphozyten, B-Lymphozyten und Makrophagen konnte gezeigt werden, dass die
Entzündungszellinfiltration in der Darmschleimhaut der Weißbüschelaffen mit WMS
von T-Zellen dominiert wurde, während Makrophagen und B-Zellen nur einen
geringen Teil der mononukleären Entzündungszellinfiltration ausmachten. Eine
weitere Differenzierung der T-Lymphozyten in CD 4-Zellen und CD 8-Zellen gelang
nicht, da die entsprechenden Antikörper mit den zellulären Antigenen der
Weißbüschelaffen nicht kreuzreagierten. Eine Aussage über das Vorliegen einer
zellvermittelten oder humoralen Immunantwort kann demnach nicht getroffen
werden. Die vorliegenden Untersuchungen stellen einen ersten Schritt in der
Erforschung immunologischer Abläufe im Darm bei Weißbüschelaffen mit WMS dar.
Daher sollte im Rahmen der weiteren WMS - Forschung immunhistochemischen und
immunologischen Untersuchungen des Intestinaltraktes besondere Aufmerksamkeit
gewidmet werden.
Nach unseren Untersuchungen ist zusammenfassend davon auszugehen, dass dem
WMS eine chronische Enteritis zugrunde liegt, die besonders durch aktive Prozesse
im Bereich des Kolons weiter unterhalten wird.
Diskussion 115
4.3 Pathomorphologie des Organspektrums
Neben den entzündlichen Veränderungen des Darmtrakts, die bei allen
Weißbüschelaffen mit WMS nachgewiesen wurden, konnten bei den
makroskopischen und histologischen Untersuchungen eine Reihe weiterer
pathologischer Veränderungen in verschiedenen Organsystemen nachgewiesen
werden, wobei insbesondere in der Leber und in den Nieren regelmäßig gleichartige
Läsionen ausgebildet waren.
Pathologische Veränderungen des Harnapparates betrafen ausschließlich die Nieren
und konnten bei fast allen untersuchten Weißbüschelaffen (78 %) nachgewiesen
werden. In der Mehrzahl der Fälle handelte es sich dabei um chronische interstitielle
Nephritiden geringen Schweregrades. Die von BRACK und ROTHE (1981) bei
Weißbüschelaffen mit WMS beschriebene tubulointerstitielle Nephritis konnte nur bei
einem Tier nachgewiesen werden. Bei insgesamt 16 Weißbüschelaffen wurden
darüber hinaus mesangial-proliferative Glomerulopathien festgestellt. Inwieweit die
interstitiellen und glomerulären Nierenalterationen zu einer Einschränkung der
Nierenfunktion geführt haben, konnte anhand der Serologie und der
Urinuntersuchungen nicht eindeutig geklärt werden. Harnpflichtige Substanzen im
Serum konnten nur bei 3 Tieren nachgewiesen werden, und die Urinuntersuchungen
ergaben nur in einem Fall Hinweise auf einen renalen Proteinverlust. Von
chronischen interstitiellen Nephritiden wird im Zusammenhang mit dem WMS relativ
häufig berichtet, wobei die Ursache dieser entzündlichen Veränderungen unklar ist
(BRACK u. ROTHE 1980; BEGLINGER et al. 1988; POTKAY 1992; SAINSBURY et
al. 1992). Dagegen werden mesangial-proliferative Glomerulopathien insbesondere
im Rahmen von Immunkomplexerkrankungen beobachtet, die bei Krallenaffen mit
einer mesangialen Ablagerung von IgA und/ oder IgM einher gehen und
dementsprechend als IgM/ IgA-Nephropathie bzw. IgA-Nephropathie bezeichnet
werden (BRACK et al. 1999; EITNER et al. 2005). Untersuchungen zu mesangialen
Immunglobulinablagerungen bei Weißbüschelaffen mit WMS wurden von
SCHROEDER et al. (1997, 1999) und EITNER et al. (2005) durchgeführt und
116 Diskussion
ergaben den regelmäßigen Nachweis glomerulärer IgA-Ablagerungen. Gleichzeitig
wurden im Serum der erkrankten Tiere im Vergleich zu Weißbüschelaffen ohne WMS
erhöhte Mengen an zirkulierenden IgA-Immunkomplexen und IgA-Antikörpern gegen
Gliadin nachgewiesen. Eine derartige Immunreaktion lässt sich entweder durch eine
mit der Zöliakie des Menschen vergleichbare Gliadinunverträglichkeit oder durch eine
gestörte Darmbarrierefunktion infolge chronischer Enteritis erklären. Eine der
menschlichen Zöliakie entsprechende Erkrankung scheint bei Weißbüschelaffen mit
WMS allerdings nicht vorzuliegen, da die für die Diagnose entscheidenden
Endomysium- und Retikulinantikörper weder bei gesunden noch bei kranken Tieren
nachgewiesen werden konnten (BONGARD 2005). Daher ist als mögliche Ursache
für die hohen zirkulierenden IgA-Immunkomplexe und IgA-Gliadin-Antikörper eine
Störung der Darmpermeabilität infolge chronisch entzündlicher Darmveränderungen
anzusehen. Es wird vermutet, dass durch die erhöhte Permeabilität großmolekulare
Nahrungsproteine die Darmbarriere überwinden und das lokale Immunsystem
aktivieren. Die Aktivierung des Immunsystems kann wiederum zu einer
Nahrungsmittelintoleranz (v. a. gegen Gliadin) führen, die sich in einer IgA-
Immunantwort äußert. Die Folge sind weitere chronische Darmläsionen und die
Ablagerung von Immunkomplexen in den Nieren (SCHROEDER et al. 1997).
Die histologisch nachweisbaren Veränderungen der Leber, die bei allen
Weißbüschelaffen (100 %) dieser Studie nachgewiesen wurden, umfassten
entzündliche Reaktionen, degenerative Prozesse und Pigmentspeicherungen
(Hämosiderose). Die auch von CHALIFOUX und seiner Arbeitsgruppe (1982) bei
Weißbüschelaffen mit WMS beobachteten Hepatitiden hatten einen überwiegend
geringgradigen nonpurulenten Charakter und wiesen ein teils interstitielles, teils
periportales Verteilungsmuster auf. Die interstitiellen Rundzellinfiltrate, die
typischerweise eine noduläre Anordnung zeigten, werden von OKAZAKI et al. (1996)
als Mikrogranulome bezeichnet. Aufgrund der ausgeprägten Pigmenthepatose sind
auch reaktive Hepatitiden denkbar, die sich im Rahmen degenerativer
Zelluntergänge infolge Dystrophie entwickeln. Bei einigen Tieren (52 %) wurden die
entzündlichen Leberveränderungen von geringgradigen Entzündungen der
Diskussion 117
Gallenblase und der intrahepatischen Gallenwege begleitet. Degenerative
Veränderungen der Leber äußerten sich in Form einer zentrolobulären, hydropischen
bzw. vakuolären Degeneration, die nach QUOHS (2003) mit den
Pigmentablagerungen in den Leberzellen im Zusammenhang steht. Inwieweit die
beschriebenen Veränderungen zu einer funktionellen Einschränkung der Leber
geführt haben, konnte anhand der serologischen Untersuchungen nicht eindeutig
geklärt werden. Das leberspezifische Enzym ALT zeigte in keinem Fall erhöhte
Serumwerte, so dass die Ursache für die Erhöhung der nicht spezifischen
Leberenzyme AP, AST und LDH wahrscheinlich nicht in der Leberschädigung,
sondern in einer Erkrankung anderer Organe liegt, die ebenfalls eine solche
Enzymerhöhung nach sich ziehen können (Osteopathien, Myopathien). Auch die bei
chronischen Hepatopathien nachweisbare Hypalbuminämie, die bei allen Tieren der
beiden Untersuchungsgruppen nachweisbar war, kann extrahepatische Ursachen
haben (Nephropathien) (KRAFT u. DÜRR 1999). Mit Hilfe der Berliner-Blau-Rektion
konnte gezeigt werden, dass bei fast allen untersuchten Weißbüschelaffen (96 %)
größtenteils hochgradige Hämosiderinablagerungen in den Hepatozyten und den
Kupfferschen Sternzellen vorhanden waren. Hämosiderosen der Leber wurden im
Zusammenhang mit dem Wasting Marmoset Syndrom bereits von BRACK und
ROTHE (1981), CHALIFOUX et al. (1982) und QUOHS (2003) beschrieben.
Allerdings sind Eisenablagerungen in der Leber auch bei Weißbüschelaffen ohne
WMS und anderen Neuweltaffen ein häufig nachweisbarer Befund, wobei die
klinische bzw. pathologische Relevanz dieses Befundes unklar ist (CHALMERS et
al.1983; TUCKER 1984; POTKAY 1992). MILLER und seine Arbeitsgruppe (1997)
untersuchten bei Krallenaffen den Einfluss von eisenhaltigem Futter auf die
Ausbildung hepatischer Hämosiderosen und stellten eine positive Korrelation
zwischen dem Eisenanteil in der Nahrung und dem Hämosideringehalt in der Leber
fest. Demnach sind bei Krallenaffen in Gefangenschaftshaltung Diäten mit hohem
Eisengehalt als Ursache für Hämosiderosen der Leber anzusehen. MILLER et al.
(1997) gehen weiterhin davon aus, dass hepatische Hämosiderosen zu einer
Schwächung des Immunsystems und einer erhöhten Mortalitätsrate bei Krallenaffen
führen und somit als klinisch relevant zu betrachten sind. Auch GOTTDENKER et al.
118 Diskussion
(1998) sehen einen nutritiven Eisenüberschuss als Ursache die für regelmäßig
nachweisbaren intrahepatischen Hämosiderosen und die in ihrer Ausprägung
variierenden extrahepatischen Hämosiderinablagerungen (Niere, Herz, Lunge, Milz,
Pankreas usw.) der Callitrichiden an. Die Autoren gehen davon aus, dass
Krallenaffen eine erhöhte genetisch bedingte Affinität für die intestinale Absorption
von Eisen haben, die in einer evolutionsbedingten Anpassung an eisenarme Diäten
in der freien Wildbahn begründet ist. Dagegen vermuten CLAUS und Mitarbeiter
(2002) einen Mangel an Tanninen im Futter von Callitrichiden als Ursache für eine
vermehrte Eisenabsorption im Darm. Tannine sind Chelatbildner, die freie
Eisenionen binden und dadurch die Verfügbarkeit von Eisen im Darm herabsetzen.
Die Tatsache, dass Tannine in der Nahrung freilebender Callitrichiden enthalten sind,
unterstützt diese Hypothese. In diesem Zusammenhang erscheint es interessant,
dass die untersuchten Weißbüschelaffen aus dem DPZ vorwiegend hochgradige
Hämosiderosen der Leber aufwiesen, während die Eisenablagerungen bei den
Tieren von der Firma Boehringer Ingelheim insgesamt schwächer ausgeprägt waren.
Bei den 3 Kontrolltieren wurden keine oder nur minimale Eisenablagerungen
nachgewiesen. Diese Befunde lassen zwei Erklärungsansätze zu. Zum einen könnte
der unterschiedliche Ausprägungsgrad der Hämosiderosen bei den Tieren der 3
verschiedenen Haltungssysteme auf Unterschiede in der Diät (Eisen- und
Tanningehalt) zurückzuführen sein. Zum anderen ist eine Assoziation zwischen der
hepatischen Hämosiderose und dem WMS zu vermuten, da die Kontrolltiere ohne
WMS im Vergleich zu den erkrankten Tieren deutlich weniger bzw. keine
Eisenablagerungen in der Leber zeigten. Allerdings stammten diese
Weißbüschelaffen wiederum aus einer anderen Tierhaltung (Anthropologisches
Institut der Universität Göttingen) mit einem abweichenden Fütterungsmanagement.
Entscheidende pathologische Befunde des Bewegungsapparates, die insgesamt bei
6 Weißbüschelaffen (26 %) mit WMS beobachtet wurden, waren im Bereich des
knöchernen Skeletts lokalisiert und bestanden einerseits aus einer herabgesetzten,
teils gummiartigen Konsistenz der Schädeldecke und andererseits aus
rosenkranzähnlichen Auftreibungen der Rippenfugen. Auch die serologischen
Diskussion 119
Untersuchungen deuten auf das Vorliegen einer Osteopathie hin, da erhöhte Werte
für die alkalische Phosphatase nachgewiesen wurden. Da keine histologischen
Untersuchungen der Knochen eingeleitet wurden, kann über das Vorliegen
osteolytischer Prozesse keine Aussage gemacht werden (LOGAN u. KHAN 1996).
Störungen des Knochenstoffwechsels (MBD) sind ein relativ häufiger Befund bei
Weißbüschelaffen in Gefangenschaftshaltung und werden auf einen Vitamin D- bzw.
Kalziummangel zurückgeführt (HATT u. SAINSBURY 1998). Das Ergebnis ist eine
mangelhafte Mineralisierung knöcherner Strukturen, die sich insbesondere im
Bereich der Schädeldecke und der langen Röhrenknochen manifestiert und zu
Frakturen und Verbiegungen derselbigen führen kann (CHALMERS et al. 1983).
Inwieweit es sich bei dieser Symptomatik von Wastern um eine eigenständige
Erkrankung handelt (MBD) oder um ein WMS-assoziiertes Krankheitszeichen, bleibt
weiterhin unklar (IALEGGIO u. BAKER 1995). In jedem Fall ist davon auszugehen,
das mehr als nur 6 Weißbüschelaffen beider Untersuchungsgruppen unter
Knochenveränderungen litten, da eine mangelhafte Knochenmineralisation in der
Regel klinisch erst manifest wird, wenn mehr als die Hälfte der Knochenmineralien
resorbiert sind (FOWLER 1986; SAINSBURY et al. 1992). Als Ursache für die
herabgesetzte Verfügbarkeit von Kalzium bzw. Vitamin D wird ein zu geringer Gehalt
dieser Substanzen in den kommerziellen Diäten für Krallenaffen angenommen
(HATT u. SAINSBURY 1998). Darüber hinaus wird vermutet, dass intestinale
Infektionen die Absorption von Vitamin D aus dem Darm und somit auch die
Kalziumabsorption inhibieren (FOWLER 1986; BEGLINGER et al. 1988; HATT u.
SAINSBURY 1998). Als weitere Möglichkeit für einen Vitamin D - Mangel wird eine
unzureichende renale Bildung der aktiven Metaboliten dieses Vitamins aufgrund von
Nephropathien diskutiert (FOWLER 1986; SAINSBURY et al. 1992). Es ist bekannt,
dass Neuweltaffen einen weitaus höheren Bedarf an Vitamin D3 haben als
Altweltaffen und dementsprechend empfänglicher für metabolische Erkrankungen
der Knochen sind (MONTALI u. BUSH 1999). Daher wird bei der Fütterung von
Krallenaffen in Gefangenschaftshaltung regelmäßig Vitamin D3 substituiert, um
Mangelerscheinungen vorzubeugen. Auch im Deutschen Primatenzentrum werden
die Futterrationen der Weißbüschelaffen durch Vitamine ergänzt, so dass ein rein
120 Diskussion
nutritiver Mangel an Vitamin D3 eher unwahrscheinlich ist. Die pathohistologischen
Befunde des Intestinaltraktes und der Nieren unterstützen die Hypothese, dass eine
verminderte Absorption von Vitamin D im Darm und/ oder eine mangelhafte Bildung
aktiver Vitamin D - Metaboliten die Ursache für eine Hypovitaminose und die damit
verbundenen Störungen des Knochenmetabolismus sind. In diesem Zusammenhang
stellen die Verkalkungen des Gefäßsystems, die bei 6 Weißbüschelaffen der DPZ -
Kolonie auftraten und in allen Fällen mit erhöhten Serumkalziumwerten einher
gingen, einen wichtigen Befund dar. In Kombination mit den
Mineralisationsstörungen der Knochen ist dabei an einen sekundären
Hyperparathyroidismus als zentralen pathogenetischen Faktor zu denken. In diesem
Fall führt die durch einen Mangel an Vitamin D hervorgerufene Hypokalzämie zu
einer vermehrten Freisetzung von Parathormon aus der Nebenschilddrüse.
Parathormon bewirkt die Mobilisierung von Kalzium aus dem Knochen mit dem Ziel,
die Kalziumhomöostase aufrechtzuerhalten. Im Falle einer Überkompensation kann
es allerdings zu Hyperkalzämie mit metastatischer Verkalkung kommen (FOWLER
1986). Hinsichtlich der Gefäßverkalkungen bei den Weißbüschelaffen der
vorliegenden Studie wird jedoch angenommen, dass es sich nicht um metastatische
Kalkablagerungen infolge eines Hyperparathyroidismus handelt, sondern um
iatrogen bedingte Artefakte infolge einer Überdosierung von Vitamin D im Futter.
Insbesondere die an WMS erkrankten Weißbüschelaffen erhielten im Rahmen der
Vorbehandlung wiederholt Vitamin D - Gaben, die möglicherweise zu einer
Überversorgung mit diesem Vitamin geführt haben. Im Deutschen Primatenzentrum
wurde die Verabreichung von Vitamin D im Anschluss an diese Ergebnisse deutlich
reduziert, und es wurden danach keine weiteren Fälle von Gefäßwandverkalkungen
bei Weißbüschelaffen beobachtet.
Die Vielfach in der Literatur über das WMS beschriebenen Veränderungen der
Skelettmuskulatur konnten in der vorliegenden Studie nur bedingt nachvollzogen
werden. Pathologische Befunde wurden bei 2 Weißbüschelaffen erhoben und
bestanden aus einer hyalinscholligen Degeneration mit geringgradiger Myositis sowie
einer geringgradigen Muskelfibrose in einer Muskelprobe. Von der bei jedem
Diskussion 121
Weißbüschelaffen nachgewiesenen Reduktion der Körpermasse war natürlich auch
die Skelettmuskulatur betroffen, so dass der Gewichtsverlust bei jedem Tier mit
WMS auch von einer Muskelatrophie infolge des Abbaus von Energiereserven
begleitet wurde. Klinisch manifeste Bewegungsstörungen konnten allerdings nicht
nachgewiesen werden. Die Atrophie der Skelettmuskulatur wird bei Krallenaffen mit
WMS in den meisten Fällen auf einen Vitamin E - und/ oder Selenmangel
zurückgeführt (PRITZKER u. KESSLER 1998; JUAN-SALLES et al. 2003). Bezüglich
der Pathogenese des Vitamin E -/ Selenmangels wird wiederum von einer nutritiven
Unterversorgung oder einer Störung der intestinalen Resorption ausgegangen. Zu
den Folgen eines Vitamin E - Mangels gehören unter anderem Anämie und
Myopathie (CHALMERS et al. 1983; JUAN-SALLES et al. 2003). Zum anderen
können chronische Hepatopathien durch mangelhafte Bereitstellung von Glukose zu
einer negativen Energiebilanz führen, in deren Folge es zu einem katabolen
Muskelstoffwechsel mit Abbau alternativer Energiereserven kommt.
Die in der Literatur beschriebenen Veränderungen des Haarkleides konnten nur bei
einem Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim nachgewiesen werden.
Bei diesem Tier war das Fell insgesamt wenig dicht und struppig und wies haarlose
Bezirke im Bereich des Schwanzansatzes auf. Als Ursache für Fellveränderungen
bei Weißbüschelaffen mit WMS wird von CHADWICK und Mitarbeitern (1979) ein
Zinkmangel angesehen. Da bei Tieren mit WMS häufig Diarrhoe auftritt und die
Haarkleidveränderungen mit Alopezie besonders im Bereich des Schwanzansatzes
auffallen, sind auch direkte Einflüsse auf die betroffenen Hautregionen denkbar.
Bei den übrigen Organveränderungen, die sporadisch bei den untersuchten
Weißbüschelaffen nachgewiesen wurden, ist davon auszugehen, dass es sich um
unspezifische sekundäre Veränderungen handelt, die sich erst in fortgeschrittenen
Stadien der Erkankung manifestieren und die Folge des sich verschlechternden
Allgemeinbefindens und der damit einher gehenden Immunschwäche der erkrankten
Tiere sind. Die pathologische Bedeutung der extramedullären Hämatopoeseherde in
den Nebennieren und der regelmäßig nachgewiesenen C-Zell-Hyperplasie in den
122 Diskussion
Schilddrüsen ist dagegen unklar, da sie einen häufigen Befund bei der
pathohistologischen Untersuchung offensichtlich gesunder Weißbüschelaffen
darstellen und daher als sogenannte ‘background lesions‘ bezeichnet werden
(TUCKER 1984; OKAZAKI et al. 1996).
4.4 Ätiologische Untersuchungen
Die ätiologischen Untersuchungen zum Wasting Marmoset Syndrom umfassten zum
einen bakteriologische und parasitologische Untersuchungen, die schwerpunktmäßig
den Intestinaltrakt betrafen. Weiterhin wurde eine Stammbaumanalyse von
Merkmalsträgern zur Überprüfung der Beteiligung hereditärer Faktoren an der
Entstehung des WMS vorgenommen.
Die im Rahmen dieser Studie durchgeführten intravitalen und postmortalen
bakteriologischen und parasitologischen Untersuchungen ergaben keine Hinweise
auf das Vorliegen einer einheitlichen infektiösen Ursache für das Wasting Marmoset
Syndrom. An obligat pathogenen enteralen Infektionserregern wurden nur bei
einzelnen Tieren Campylobacter sp. nachgewiesen, die bekannterweise
Durchfallerkrankungen bei Krallenaffen hervorrufen können (GIBSON 1998). Bei der
Typisierung der hämolytischen E. coli - Stämme wurden die Serovare O6:H1 bzw.
O4:H6 identifiziert, die aufgrund ihrer Pathogenitätsmerkmale auch als ExPEC
(extraintestinale pathogene E. coli) oder NTEC1 (necrotoxigenic E. coli) bezeichnet
werden. Dabei handelt es sich um fakultativ pathogene Darmkommensalen, die bei
immunschwachen Tieren opportunistische Durchfallerkrankungen und diverse
extraintestinale Infektionen hervorrufen können (JOHNSON u. RUSSO 2002). Bei
den übrigen nachgewiesenen bakteriellen Erregerstrukturen handelt es sich
entweder um apathogene Bestandteile der normalen Darmflora von nicht humanen
Primaten (E. coli, Klebsiella sp., Acinetobacter sp., Citrobacter sp.) oder ebenfalls um
fakultativ pathogene Keime, die im Falle einer Immunsuppression zu
opportunistischen intestinalen Infektionen führen (Streptococcus sp., Staphylococcus
sp., Proteus sp.) (GIBSON 1998). Als Ursache für die Dysbakteriose, die bei einigen
Diskussion 123
Tieren mit WMS vorlag, wurde aufgrund der Bakterienmorphologie ein Befall mit
Clostridien vermutet. Der spezifische Nachweis von Clostridium difficile als relevanter
anaerober Erreger von Durchfallerkrankungen gelang allerdings nicht. Zu den
parasitären Infektionserregern mit pathogenem Effekt gehört Giardia lamblia, der im
Darmtrakt von 4 Weißbüschelaffen nachgewiesen wurde. Ein intestinaler Befall mit
Giardia lamblia wird zwar bei nicht humanen Primaten als Ursache von
Durchfallerkrankungen angesehen; es handelt sich allerdings nicht um einen obligat
pathogenen sondern einen fakultativ pathogenen Erreger (TOFT u. EBERHARD
1998). Aus den Ergebnissen lässt sich schließen, dass weder bakterielle noch
parasitäre Erregerstrukturen kausale Faktoren bei der Entstehung des WMS
darstellen. Bezüglich der Pathogenese des WMS ist allerdings zu vermuten, dass die
fakultativ pathogenen Keime eine bedeutende Rolle bei der Unterhaltung der
entzündlichen Prozesse im Darmkanal spielen und somit das Fortschreiten der
Erkrankung entscheidend beeinflussen. Virologische Untersuchungen wurden bei
Krallenaffen mit WMS bislang nicht durchgeführt. Interessanterweise sind Formen
von ‚wasting disease‘ bei anderen Säugetieren meist infektiöser Ätiologie. So wird
das bei Schweinen beschriebene Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome
(PMWS) durch eine Circovirus-Infektion (PCV-2) hervorgerufen (STAEBLER et al.
2005). Die bei Hirschen und Elchen auftretende Chronic Wasting Disease (CWD)
stellt dagegen eine Prionerkrankung dar, die auf eine Infektion mit dem Protease-
resistenten Prionprotein PrPCWD zurückzuführen ist (MILLER et al. 2004).
Die Stammbaumanalysen zur Untersuchung des Einflusses hereditärer Faktoren bei
der Ätiologie des WMS ergaben keine eindeutigen Hinweise auf eine erbliche
Komponente bei dem Wasting Marmoset Syndrom. Aufgrund des Verteilungsmusters
der Krankheitsfälle innerhalb der untersuchten Stammbäume ist anzunehmen, dass
es sich nicht um einen erblichen Defekt mit monogenetischem Hintergrund handelt.
Ein polygenetisches bzw. multifaktorielles Geschehen mit Beteiligung hereditärer und
Umwelt - Einflüsse kann allerdings weiterhin nicht ausgeschlossen werden.
124 Diskussion
4.5 Überlegungen zur Pathogenese
In der Literatur beziehen sich Hypothesen bezüglich der Pathogenese des WMS in
den meisten Fällen auf diätetische Faktoren. Im Zentrum der Überlegungen stehen
insbesondere ernährungsbedingte Mangelzustände, die sich auf Proteine, Vitamine
und Mineralstoffe beziehen (KING 1976, BRACK u. ROTHE 1980; BARNARD et al.
1988; JUAN-SALLES et al. 2003). Bei den Weißbüschelaffen der vorliegenden
Studie wird nicht davon ausgegangen, dass eine nutritive Unterversorgung vorlag.
Unter Berücksichtigung aller erhobenen Befunde und Ergebnisse wird stattdessen
angenommen, dass bei der Entstehung des Wasting Marmoset Syndroms ein
Malassimilationssyndrom von zentraler pathogenetischer Bedeutung ist, da sich
sämtliche klinischen Symptome und pathologischen Befunde mit Hilfe dieser
Hypothese erklären lassen.
Unter dem Begriff der Malassimilation werden zwei verschiedene Formen von
Störungen der Darmfunktion zusammengefasst, die Maldigestion und die
Malabsorption. Beide Störungen treten häufig kombiniert bei degenerativ-
entzündlichen Veränderungen des Dünndarms (Enteritiden) auf und gehen mit einer
verminderten Nährstoffausnutzung und im Falle eines chronischen Verlaufes mit
diversen Mangelerscheinungen einher (KRAFT u. DÜRR 1999). Eine
Verdauungsinsuffizienz infolge intestinaler Läsionen wird auch von TRIBE (1978) als
entscheidender pathogenetischer Faktor bei dem Wasting Marmoset Syndrom
angesehen. Im Verlauf einer länger andauernden globalen Malassimilation, d. h.
einer Verwertungsstörung verschiedener Nahrungsbestandteile, können sich u. a.
eine Hypoproteinämie, Hypovitaminosen und diverse Mineralstoffdefizienzen
entwickeln. Zu den möglichen Folgen eines dauerhaften Proteinmangels gehören
Apathie, Anämie, progressiver Gewichtsverlust, Durchfall und degenerative
Leberveränderungen (BRACK u. ROTHE 1981). Länger anhaltende Durchfälle im
Sinne einer Proteinverlustenteropathie können den Proteinmangel zusätzlich
erhöhen. Ein Mangel an Vitamin D und/oder Kalzium führt durch Störungen des
Knochenmetabolismus zu Osteopathien mit mangelhafter Mineraliserung knöcherner
Diskussion 125
Strukturen (FOWLER 1986; BEGLINGER et al. 1988; HATT u. SAINSBURY 1998).
JUAN-SALLES und Mitarbeiter (2003) bringen eine zu geringe Aufnahme von
Vitamin E mit Anämie und Myopathie in Zusammenhang. Die Erythrozyten von
Weißbüschelaffen, die grundsätzlich wenig stabil und sehr empfänglich für
hämolytische Prozesse sind, unterliegen in Abwesenheit von Vitamin E einer
beschleunigten intravasalen Lyse, die klinisch als hämolytische Anämie in
Erscheinung tritt (CHALMERS et al. 1983; GHEBREMESKEL et al. 1990). Das
Auftreten hämolytischer Prozesse liefert außerdem die Grundlage für die Erklärung
der Leber - Hämosiderosen (BRACK u. ROTHE 1981; JUAN-SALLES 2003).
Haarkleidveränderungen treten nach CHADWICK et al. (1979) als Folge eines
Zinkmangels auf, während GHEBREMESKEL und Mitarbeiter (1991) einen Mangel
an ungesättigten Fettsäuren als Ursache für Alopezien bei Weißbüschelaffen
annehmen. Die mesangialen Veränderungen der Nieren sind dagegen nicht auf eine
Malabsorption zurückzuführen, sondern auf eine erhöhte Permeabiltität der
Darmbarriere bei chronischen Darmläsionen und der daraus resultierenden Passage
immunstimulierender Nahrungsbestandteile. Nach SCHROEDER et al. (1997) lagern
sich die bei der Immunantwort gebildeten Immunkomplexe bevorzugt in den
Mesangien der Nierenglomerula ab und führen zu mesangial-proliferativen
Glomerulopathien. Derartige Nierenveränderungen können wiederum durch eine
mangelhafte Bildung der aktiven Vitamin D - Metaboliten den Knochenstoffwechsel
negativ beeinflussen und über eine unzureichende Erythropoetinbildung anämische
Erscheinungen auslösen.
Die Grundlage der beschriebenen Hypothese bilden die chronisch-entzündlichen
intestinalen Läsionen, deren Ätiologie allerdings weiterhin unklar bleibt. CHALIFOUX
und Mitarbeiter (1982) stellen fest, dass die Ursache der chronischen Enteritiden
anhand der Entzündungsmorphologie nicht hergeleitet werden kann, da diese
unspezifisch ist und bei diversen Erkrankungen mit unterschiedlicher Ätiologie
auftreten kann. Als ursächliche Faktoren gibt die Arbeitsgruppe einen generellen
oder spezifischen Nährstoffmangel, enterale pathogene Mikroorganismen oder
allergische Reaktionen auf ein nahrungsbezogenes Antigen und Stress an. Ein
126 Diskussion
Nährstoffmangel sowie spezifische bakterielle und parasitäre Infektionserreger sind
in der vorliegenden Studie als ätiologische Faktoren auszuschließen. Dagegen kann
die Einwirkung von Stress in Labortierhaltungen mit intensiver tierärztlicher
Betreuung nicht vollständig vermieden werden. Dem Einfluss von haltungsbedingtem
Stress, der zu einer Verschiebung der normalen Darmflora führt, wird von
verschiedenen Autoren eine Bedeutung bei der Entstehung chronischer
Darmentzündungen und Durchfallerkrankungen bei Krallenaffen zugeschrieben
(CHALIFOUX et al. 1982; BARNARD et al. 1988; IALEGGIO u. BAKER 1995) und es
ist anzunehmen, dass Stressfaktoren einen Triggereffekt bei der Entwicklung des
WMS ausüben. Allerdings wurden Fälle von WMS auch in Zoologischen Gärten
beobachtet, ohne dass stressbedingte Faktoren evident waren. Einen interessanten
hypothetischen Ansatz bei den pathogenetischen und ätiologischen Überlegungen
zum Wasting Marmoset Syndrom stellt die Theorie über eine allergische Reaktion
auf Futtermittelbestandteile dar. SCHROEDER und Mitarbeiter (1999) vermuten,
dass es bei den betroffenen Weißbüschelaffen zu allergisch bedingten Enteritiden
kommt, deren Folge Immunkomplexablagerungen in den Nieren sind. Als kritischer
Bestandteil in der Nahrung der Krallenaffen wird das Gluten bzw. Gliadin angesehen,
dass auch bei der Zöliakie des Menschen von Bedeutung ist (GORE et al. 2001).
Eine der menschlichen Zöliakie entsprechende Erkrankung scheint bei
Weißbüschelaffen mit WMS allerdings nicht vorzuliegen, da die für die Diagnose
entscheidenden Endomysium- und Retikulinantikörper nicht nachgewiesen werden
konnten (BONGARD 2005). Dabei ist allerdings zu berücksichtigen, dass
möglicherweise eine fehlende Kreuzreaktivität des verwendeten Antikörpers mit dem
IgA der Krallenaffen besteht (SCHROEDER et al. 1999). Schließlich ist bei der
Ätiologie der Enteritiden noch an eine Fehlregulation des intestinalen Immunsystems
gegenüber der residenten Bakterienflora zu denken, die auch bei der IBD des
Menschen als pathogenetischer Faktor diskutiert wird (MONTELEONE et al. 2002).
Zur Abklärung dieser Hypothese sind in jedem Fall weitere immunhistochemische
und immungenetische Untersuchungen bei Weißbüschelaffen mit WMS erforderlich.
Zusammenfassend ist festzustellen, dass bei dem Wasting Marmoset Syndrom die
Diskussion 127
intestinalen Entzündungsreaktionen von zentraler pathogenetischer Bedeutung sind,
während sich die übrigen Organveränderungen sekundär im Verlauf der Erkrankung
entwickeln. Hinsichtlich der Entstehung der Enteritiden ist eine monokausale
Ätiologie als unwahrscheinlich anzusehen, so dass auch weiterhin von einer
multifaktoriellen Erkrankung auszugehen ist.
4.6 Vergleich der beiden Labortierhaltungen
In der Weißbüschelaffenkolonie des Deutschen Primatenzentrums liegt die jährliche
Morbiditätsrate für das WMS in den Jahren 2003 und 2004 bei etwa 1,4 %. Die in der
Literatur angegebenen Werte für die Inzidenz des WMS schwanken zwischen 4 %
und 6 % und liegen somit deutlich über der im DPZ ermittelten Prozentzahl
(IALEGGIO u. BAKER 1995, QUOHS 2003). Die von QUOHS (2003) durchgeführten
retrospektiven Untersuchungen über das WMS beziehen sich ebenfalls auf die
Weißbüschelaffenkolonie des DPZ und dokumentieren das Auftreten von WMS -
Erkrankungen zwischen 1977 bis 2000. Die jährliche Morbiditätsrate lag in diesem
Zeitraum bei 5,7 %. Die geringere Erkrankungsrate in der vorliegenden Studie ist
vermutlich auf die Umsetzung der von QUOHS (2003) entwickelten Vorschläge für
die Haltung von Callitrichiden zur Prävention des WMS zurückzuführen. Dazu
gehören u. a. die Optimierung der Haltungsbedingungen, Futteranalysen,
Stressminimierung und prophylaktische medizinische Maßnahmen.
Der Hauptunterschied zwischen den untersuchten Weißbüschelaffen des Deutschen
Primatenzentrums und den Tieren von der Firma Boehringer Ingelheim lag in der
Altersstruktur. Während die DPZ - Untersuchungsgruppe ausschließlich aus adulten
Tieren bestand, waren 5 von 6 Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer
Ingelheim als subadult einzustufen. Dieser Unterschied spiegelte sich in erster Linie
in der Gewichtsentwicklung der Tiere wieder, die auf zwei verschiedene
Manifestationsformen des WMS bei juvenilen/ subadulten und adulten Tieren
hindeutet. Die weiterführenden postmortalen Untersuchungen ergaben dagegen
kaum Differenzen im pathomophologischen Erscheinungsbild. Ein deutlicher
128 Diskussion
Unterschied bestand auschließlich hinsichtlich der Hämosiderinablagerungen in der
Leber, deren Ausprägungsgrad bei den Tieren von der Firma Boehringer Ingelheim
insgesamt schwächer war als bei den Weißbüschelaffen aus dem DPZ. Vor dem
Hintergrund unterschiedlicher Haltungsbedingungen sprechen die ausgeprägten
pathomorphologischen Ähnlichkeiten des WMS bei den zwei Untersuchungsgruppen
dafür, dass es sich bei der Erkrankung um eine abgrenzbare eigenständige Entität
handelt, bei der in Abhängigkeit von der Altersstruktur eine unterschiedliches
klinisches Bild vorliegt. Anhand der im Folgenden aufgeführten Kriterien kann das
WMS von anderen Krankheitsbildern abgegrenzt werden.
4.7 Definition für das Wasting Marmoset Syndrom
In der Literatur wird eine Vielfalt an Krankheitszeichen mit dem Wasting Marmoset
Syndrom in Verbindung gebracht, ohne dass bislang spezifische Ursachen
identifiziert werden konnten (POTKAY 1992). Unter diesen Voraussetzungen
erscheint eine einheitliche Definition des WMS und damit eine klare Abgrenzung
gegenüber anderen Erkrankungen schwierig. IALEGGIO und BAKER (1995) geben
für die WMS - Diagnose 6 Kriterien an, zu denen ein Gewichtsverlust von bis zu 30
%, Alopezie, chronische Diarrhoe, Muskelatrophie, chronische Kolitis und Anämie
gehören. Dagegen besteht nach MORIN (1983) das WMS aus den 3 Komponenten
Gewichtsverlust, Muskelatrophie und Alopezie, die durch weitere Befunde, wie
chronische Diarrhoe, chronische Kolitis und Anämie ergänzt werden können. Die
Untersuchungen der vorliegenden Studie zeigen, dass für die Diagnose des WMS
sowohl klinische als auch postmortale Kriterien herangezogen werden müssen, um
einen Waster eindeutig identifizieren zu können. Da Anämie, Alopezie und
chronische Diarrhoe keine obligaten Symptome einer WMS - Erkrankung darstellen,
dient als Grundlage für die intravitale Diagnose ein progressiver, nicht reversibler
Gewichtsverlust bei erhaltener Futteraufnahme bei adulten Tieren bzw. mangelhafte
Gewichtszunahmen bei subadulten Tieren. Gleichzeitig muss eine Therapieresistenz
gegenüber gängigen Antibiotika bzw. ein rezidivierender Verlauf nach kurzfristigem
therapeutischen Erfolg vorliegen. Infektiöse Ursachen sollten ausgeschlossen
Diskussion 129
werden. Wie die vorliegende Studie zeigt, können mit Hilfe dieser Kriterien
Krankheiten anderer Genese allerdings nicht vollständig abgegrenzt werden. So
enthielt die nach diesen Kriterien erstellte ursprüngliche Untersuchungsgruppe zwei
Weißbüschelaffen mit neoplastischen Erkrankungen (malignes Lymphom), die erst
im Verlauf der postmortalen Untersuchungen identifiziert werden konnten. Unter
Berücksichtigung der Ergebnisse der vorliegenden Arbeit sind als obligate
pathomorphologische Charakteristika einer WMS - Erkrankung entzündliche
chronische bzw. chronisch aktive Veränderungen der Darmschleimhaut anzusehen.
Dabei ist durchaus denkbar, dass die in Krallenaffenkolonien ebenfalls häufig
auftretenden chronischen Kolitiden das Initialstadium einer WMS - Erkrankung
repräsentieren. Während die meisten Tiere im weiteren Verlauf kein WMS
entwickeln, greifen bei einigen Tieren die pathogenetischen Abläufe des WMS und
sie gelangen in einen Circulus vitiosus. Für das Vorliegen eines WMS sprechen
außerdem geringgradige entzündliche Veränderungen in der Leber und in den
Nieren. Weitere Symptome und pathomorphologische Veränderungen, deren
Ausbildung möglicherweise von der individuellen Konstitution und Kondition
abhängig ist, können das Krankheitsgeschehen begleiten und somit zu der vielfach
beschriebenen Komplexität des Krankheitsbildes beitragen. Die unspezifischen
Frühstadien der Erkrankung und der schwierige klinische Ausschluss anderer
Grunderkrankungen schließen eine intravitale Früherkennung nahezu aus. Hinweise
auf das Vorliegen eines WMS ergeben sich eventuell aus serologischen
Untersuchungen, die durch Hypoproteinämie bzw. Hypalbuminämie gekennzeichnet
sind und auf hepatische, ossäre und renale Dysfunktionen hindeuten. Die von
MCNEES und Mitarbeitern (1983) zur Früherkennung von Wastern empfohlene
Erstellung von Glukose - Toleranzkurven, die bei Weißbüschelaffen mit WMS im
Gegensatz zu gesunden Tieren durch einen deutlich flacheren Verlauf
gekennzeichnet sind, erscheint aufgrund der wiederholten Blutentnahmen innerhalb
kurzer Zeit und der damit verbundenen Stresseinwirkung auf die Tiere wenig
praktikabel.
130 Diskussion
Zusammenfassend können folgende Kriterien für die Diagnose des Wasting
Marmoset Syndroms bei Weißbüschelaffen herangezogen werden:
Klinisch:
• hochgradiger Gewichtsverlust (mehr als 50 g innerhalb weniger Tage) oder
langsam fortschreitende Gewichtsreduktion mit finalen Gewichten von weniger als
300 g bei erhaltener Futteraufnahme bei adulten Tieren bzw. mangelhafte
Gewichtsentwicklung bei juvenilen/ subadulten Tieren
• Therapieresistenz gegenüber gängigen Antibiotika oder rezidivierender
Krankheitsverlauf
• häufig assoziiertes Symptom: Diarrhoe
• Serologie: Hypalbuminämie
Postmortal:
• chronische bzw. chronisch aktive Enteritis mit Schwerpunkt in den
Dünndarmabschnitten
WMS - assoziiert:
• Nephropathie (chronisch interstitielle Nephritis, IgA Nephropathie)
• Hepatopathie (chronische Hepatitis, Hämosiderose)
• Osteopathie (Osteodystrophie)
Zusammenfassung 131
5 Zusammenfassung
Martina Zöller (2005)
Pathogenetische Untersuchungen zum Wasting Marmoset Syndrom bei Weißbüschelaffen (Callithrix jacchus).
Das Wasting Marmoset Syndrom (WMS) ist eine Erkrankung, die bei Callitrichiden in
der Obhut des Menschen auftritt, und in Zoo- und Versuchstierhaltungen erhebliche
Probleme verursacht. Trotz zahlreicher Beschreibungen und Untersuchungen zu
diesem Krankheitsbild ist es bislang nicht gelungen, pathogenetische Abläufe und
ätiologische Faktoren dieser komplexen Erkrankung zu identifizieren. Klinisches
Leitsymptom des WMS ist ein fortschreitender Verlust an Gewicht bei normaler
Futteraufnahme, der mit einer progredienten Verschlechterung des
Allgemeinzustandes einher geht. Weitere assoziierte Krankheitsanzeichen umfassen
chronische Diarrhoe, Alopezie, Muskelatrophie, chronische Kolitis sowie Leber- und
Nierenalterationen. Obwohl es hinsichtlich der Entstehung und Entwicklung des
WMS keine gesicherten Erkenntnisse gibt, deuten neuere Untersuchungen auf eine
zentrale Rolle entzündlicher Darmveränderungen in der Pathogenese des WMS hin.
Vor diesem Hintergrund wurden bei insgesamt 23 Weißbüschelaffen mit klinischer
WMS - Symptomatik, die aus zwei verschiedenen Labortierhaltungen (DPZ und
Boehringer Ingelheim) stammten, postmortale lichtmikroskopische Untersuchungen
schwerpunktmäßig am Gastrointestinaltrakt durchgeführt, um Grad und Ausmaß der
jeweiligen Veränderungen festzustellen. Die histologischen Untersuchungen wurden
durch immunhistochemische Techniken ergänzt, um die Entzündungsreaktion im
Darm phänotypisch zu charakterisieren. Darüber hinaus wurden klinische
Verlaufsuntersuchungen, pathomorphologische Untersuchungen der übrigen
Organsysteme und diverse ätiologische Untersuchungen durchgeführt mit dem Ziel,
das Krankheitsbild des WMS einheitlich zu definieren und Hinweise auf mögliche
kausale Faktoren zu erhalten.
132 Zusammenfassung
Die Ergebnisse lassen sich wie folgt zusammenfassen:
1. Bei der klinischen Beurteilung von Weißbüschelaffen mit WMS wurden der
Gewichtsverlauf und der Therapieerfolg als entscheidende Kriterien der
Verdachtsdiagnose angesehen, wobei hinsichtlich der Gewichtsentwicklung
Unterschiede zwischen adulten und subadulten Tieren mit WMS bestanden.
Während bei ausgewachsenen Tieren Gewichtsreduktionen von bis zu 45 % im
Vordergrund standen, zeigten subadulte Tier mit WMS schwankende
Gewichtsverläufe und mangelhafte Gewichtszunahmen. Für die eindeutige
Charakterisierung eines Wasters waren labordiagnostische und postmortale
Untersuchungen unerlässlich.
2. Bei den Tieren mit WMS aus dem Deutschen Primatenzentrum handelte es sich
ausschließlich um adulte Weißbüschelaffen, die bevorzugt im Alter zwischen drei
und acht Jahren erkrankten und bei der Sektion zwischen 230 g und 320 g
wogen. Die Weißbüschelaffen von der Firma Boehringer Ingelheim waren
überwiegend als subadult einzustufen und wiesen bei der Sektion Gewichte
zwischen 200 g und 260 g auf. Eine Geschlechtsdisposition für das WMS schien
nicht vorzuliegen.
3. Die dominierenden Organveränderungen bei den Weißbüschelaffen mit WMS
waren im Bereich des Intestinaltraktes, der Nieren und der Leber lokalisiert, wobei
den chronischen und chronisch aktiven Darmentzündungen bei der Pathogenese
des WMS eine zentrale Rolle im Sinne einer Malassimilation zugeschrieben
wurde. Die übrigen Organveränderungen entwickelten sich vermutlich sekundär
im Verlauf der Erkrankung.
4. Die phänotypische Charakterisierung der intestinalen Entzündungsreaktion mit
Hilfe von immunhistochemischen Techniken ergab eine T-Zell dominierte lokale
Immunantwort.
5. Mikrobiologische Untersuchungen ergaben keine Hinweise auf das Vorliegen
einer infektiösen Ursache für das Wasting Marmoset Syndrom. Anhand der
Stammbaumanalysen wurde ein erblicher Defekt mit monogenetischem
Hintergrund ausgeschlossen. Es handelt sich demnach wahrscheinlich um eine
Zusammenfassung 133
multifaktorielle Erkrankung, bei der exogene und endogene Faktoren zu der
Krankheitsentstehung und -entwicklung beitragen.
6. Die vergleichende Betrachtung der beiden Labortierhaltungen (DPZ - Kolonie und
Untersuchungsgruppe von der Firma Boehringer Ingelheim) ergab mit Ausnahme
einer unterschiedlichen Altersstruktur der Weißbüschelaffen keine entscheidenen
Differenzen im klinischen und pathomorphologischen Erscheinungsbild des WMS.
Die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit lassen vermuten, dass immunpathologische
Prozesse bei dem Wasting Marmoset Syndrom von ätiologischer Relevanz sind. Im
Mittelpunkt der weiteren WMS - Forschung sollten demnach insbesondere
umfassende immunhistochemische und immungenetische Untersuchungen stehen.
134 Summary
6 Summary
Martina Zöller (2005)
Pathogenetic investigations into the Wasting Marmoset Syndrome in common marmosets (Callithrix jacchus).
The Wasting Marmoset Syndrome (WMS) is a disease that affects captive
callitrichids and causes substantial problems in zoological and experimental
marmoset husbandry. So far pathogenetic mechanisms and etiologic factors of this
complex syndrome could not be identified. The WMS is characterized by progressive
weight loss despite of normal food intake and a deteriorating general condition.
Chronic diarrhea, alopecia, muscle atrophy, chronic colitis as well as alterations of
liver and kidneys are regarded as associated features of the disease. Recent studies
about the WMS indicate that inflammatory intestinal changes play a decisive role in
the pathogenesis of the disease.
23 common marmosets from two laboratory facilities (German Primate Center and
Boehringer Ingelheim) with clinical signs of WMS were included in the present study.
Postmortal light microscopic investigations with main focus on the gastrointestinal
tract were carried out to evaluate grade and extent of the respective lesions. For
phenotypic characterization of the intestinal inflammation the histologic examinations
were completed by immunohistochemical techniques. Moreover clinical studies of
live wasters, pathomorphologic investigations of the remaining organ systems and
diverse etiologic analyses were carried out with the objective to define the WMS
uniformely and to obtain indices about causal factors.
The following results could be established:
1. Weight development and therapeutic success were regarded as decisive
diagnostic criteria for clinical evaluation of common marmosets with WMS. Adult
Summary 135
common marmosets showed severe weight losses up to 45 % of the body weight,
while subadult wasters were characterized by insufficient weight gain. Laboratory
diagnostic and postmortal examinations were essential for the definite
identification of a waster.
2. All common marmosets with WMS from the German Primate Center were adult
animals that mainly fell ill at the age of 3 to 8 years. Body weights at necropsy
varied between 230 g and 320 g. The common marmosets from Boehringer
Ingelheim were predominantly classified as subadult and had body weights
between 200 g and 260 g at the time of necropsy. A sex predisposition for the
WMS was not existent.
3. Predominant organ changes were located in the intestinal tract, the kidneys and
the liver. Chronic and chronic active enteritis was regarded as a decisive
pathogenetic factor in terms of malassimilation. The other organ lesions
presumably developed secondary in the course of disease.
4. Phenotypic characterization of the intestinal inflammation using
immunohistochemical techniques resulted in a T-cell mediated local immune
response.
5. Microbiological examinations were unsuggestive of infectious causes for the
WMS. By means of pedigree analyses a monogenetic hereditary defect could be
excluded. Thus it can be assumed that the WMS is a multifactorial disease with
exogenous and endogenous contributing factors.
6. Comparative observation of the two marmoset facilities (German Primate Center
and Boehringer Ingelheim) revealed no decisive differences regarding the clinical
and pathomorphologic picture of the WMS.
The results of the present study suggest that immunopathologic processes represent
a relevant factor in the pathogenesis of the WMS. Further research on WMS should
therefore focus on comprehensive immunohistochemical and immunogenetic
investigations.
136 Literaturverzeichnis
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Anhang 145
8 Anhang
8.1 Protokolle für die Histologie
8.1.1 Hypercenter XP-Protokoll
• Wasser (entmineralisiert) für 2 h bei Zimmertemperatur
• aufsteigende Alkoholreihe (50%ig-70%ig-80%ig-96%ig-96%ig-100%ig-100ig%)
für jeweils 45 min bei 35°C und Vakuum
• 2x Chloroform für 1,5 h bzw. 1 h bei Zimmertemperatur und Vakuum
• 2x Paraffin für jeweils 1,5 h bei 60°C und Vakuum
8.1.2 Fixierlösungen
• 4 %iges neutral gepuffertes Formalin
35 %ige Formaldehydlösung 114 ml
Aqua dest. 386 ml
Stammlösung A (Phosphatpuffer) 100 ml
Stammlösung B (Phosphatpuffer) 400 ml
• 10%iges neutral gepuffertes Formalin
35 %ige Formaldehydlösung 285 ml
Aqua dest. 215 ml
Stammlösung A (Phosphatpuffer) 100 ml
Stammlösung B (Phosphatpuffer) 400 ml
8.1.3 Phosphatpuffer
• Stammlösung A (0,2 M)
Natriumdihydrogenphosphat-Monohydrat (Fa. Merck, Darmstadt, Nr. 6346) 27,6 g
Aqua bidest. ad 1000 ml
146 Anhang
• Stammlösung B (0,2 M)
di-Natriumhydrogenphosphat-Dihydrat (Fa. Merck, Darmstadt, Nr. 6580) 35,6 g
Aqua bidest. ad 1000 ml
• Gebrauchslösung (0,1 M, pH 7,4 - 7,6)
Stammlösung A 10 ml
Stammlösung B 40 ml
Aqua bidest. 50 ml
8.1.4 Hämalaun&Eosin-Färbung
• Entparaffinierung und Rehydratisierung:
Xylol: 5 min
Xylol: 2 min
Xylol: 2 min
100%iger Alkohol: 2 min
96%iger Alkohol: 2 min
80%iger Alkohol: 1 min
70%iger Alkohol: 1 min
Aqua dest.: 1 min
• Zur Kernfärbung: Hämalaun nach Mayer (Fa. Merck, Darmstadt) für 3 min
• Zum Bläuen 10 min fließend wässern
• Zur Gegenfärbung: wässriges Eosin (Fa. Thermo Shandon, Frankfurt am Main)
für 5 min
• Fließend wässern für 5 s
• Entwässerung in der aufsteigenden Alkoholreihe:
70%iger Alkohol: 1 min
80%iger Alkohol: 1 min
96%iger Alkohol: 1 min
100%iger Alkohol: 1 min
Anhang 147
100%iger Alkohol: 2 min
Xylol: 1 min
Xylol: 3 min
Xylol: 3 min
• Eindecken mit Eukitt (Fa. Kindler, Freiburg)
8.1.5 Berliner-Blau-Reaktion (Eisennachweis nach Perls)
• Entparaffinierung und Rehydratisierung:
Xylol: 5 min
Xylol: 2 min
Xylol: 2 min
100%iger Alkohol: 2 min
96%iger Alkohol: 2 min
80%iger Alkohol: 1 min
70%iger Alkohol: 1 min
Aqua dest.: 1 min
• Kaliumferrozyanid 10 %ig: 5 min
• 1:1 HCl 20 %ig und Kaliumferrozyanid 20 %ig: 30 min
• 3 mal in Aqua dest. spülen
• Kernechtrot (für Kerne): 5 min
• 3 mal in Aqua dest. spülen
• Entwässerung in der aufsteigenden Alkoholreihe:
70%iger Alkohol: 1 min
80%iger Alkohol: 1 min
96%iger Alkohol: 1 min
100%iger Alkohol: 1 min
100%iger Alkohol: 2 min
Xylol: 1 min
Xylol: 3 min
Xylol: 3 min
148 Anhang
• Eindecken mit Eukitt (Fa. Kindler, Freiburg)
8.1.6 Periodic-Acid-Schiff-Reaktion (PAS)
• Entparaffinierung und Rehydratisierung:
Xylol: 5 min
Xylol: 2 min
Xylol: 2 min
100%iger Alkohol: 2 min
96%iger Alkohol: 2 min
80%iger Alkohol: 1 min
70%iger Alkohol: 1 min
Aqua dest.: 1 min
• 0,5 % Perjodsäure: 10 min
• Aqua dest. fließend: 10 min
• Schiff´s Reagenz (Fa. Merck, Darmstadt): 15 min
• Aqua dest.: wenige s
• Leitungswasser fließend: 10 min
• Gegenfärbung mit Hämalaun nach Mayer: 30 s
• Bläuen in Leitungswasser: 10 min
• Entwässerung in der aufsteigenden Alkoholreihe:
70%iger Alkohol: 1 min
80%iger Alkohol: 1 min
96%iger Alkohol: 1 min
100%iger Alkohol: 1 min
100%iger Alkohol: 2 min
Xylol: 1 min
Xylol: 3 min
Xylol: 3 min
• Eindecken mit Eukitt (Fa. Kindler, Freiburg)
Anhang 149
8.1.7 Giemsa-Färbung
• Entparaffinierung und Rehydratisierung:
Xylol: 5 min
Xylol: 2 min
Xylol: 2 min
100%iger Alkohol: 2 min
96%iger Alkohol: 2 min
80%iger Alkohol: 1 min
70%iger Alkohol: 1 min
Aqua dest.: 1 min
• 10 %ige Giemsalösung in 0,1 mol Phosphatpuffer, pH 6,8: 25 min
• Aqua dest.: wenige s
• Differenzieren in 0,5 %iger Essigsäure (1 ml konz. Essigsäure + 200 ml Aqua
dest.) bis die Schnitte einen rötlichen Schimmer bekommen
• 96 %iger Alkohol: wenige s
• Isopopropanol: 2 x 5 min
• Xylol: 1 min
Xylol: 3 min
Xylol: 3 min
• Eindecken mit Eukitt (Fa. Kindler, Freiburg)
8.1.8 Von Kossa-Färbung (Kalknachweis)
• Entparaffinierung und Rehydratisierung:
Xylol: 5 min
Xylol: 2 min
Xylol: 2 min
100%iger Alkohol: 2 min
96%iger Alkohol: 2 min
80%iger Alkohol: 1 min
150 Anhang
70%iger Alkohol: 1 min
Aqua dest.: 1 min
• 5 %ige Silbernitratlösung: 45-60 min im Dunkeln
• 3 mal in Aqua dest. spülen
• in Natriumkarbonat-Formaldehydlösung reduzieren: 2 min
Natriumkarbonat-Formaldehydlösung:
5 g Natriumkarbonat in 25 ml Formaldehyd (35-40 %) und 75 ml Aqua dest. lösen
• in Leitungswasser spülen: 10 min
• in 5 %iger Natriumthiosulfatlösung fixieren: 5 min
• in Leitungswasser spülen: 10 min
• in Aqua dest. spülen
• mit Kernechtrot gegenfärben: 5 min
Kernechtrot:
-5 g Aluminiumsulfat in 100 ml Aqua dest. lösen
-die Aluminiumsulfatlösung erhitzen und 0,1 g Kernechtrot einrühren, bis sich der
Farbstoff gelöst hat
-erkalten lassen, filtrieren
• in Aqua dest. spülen
• Entwässerung in der aufsteigenden Alkoholreihe:
70%iger Alkohol: 1 min
80%iger Alkohol: 1 min
96%iger Alkohol: 1 min
100%iger Alkohol: 1 min
100%iger Alkohol: 2 min
Xylol: 1 min
Xylol: 3 min
Xylol: 3 min
• Eindecken mit Eukitt (Fa. Kindler, Freiburg)
Anhang 151
8.2 Protokolle für die Mikrobiologie
8.2.1 Blutagar-Platte
• Columbia-Agar Basis (Fa. Merck, Darmstadt) 42 g
• Aqua dest. 1000 ml
bei 121° C 15 min autoklavieren, auf 50° C abkühlen lassen
• Schafblut (Fa. Oxoid, Wesel) 80 ml
in Petrischalen abfüllen
8.2.2 MacConkey-Agar
• MacConkey- Agar für die Mikrobiologie (Fa. Merck, Darmstadt) 50 g
• Aqua dest. 1000 ml
zu Platten gießen und bei 121° C 15 min autoklavieren
8.2.3 Salmonellen-Platte
• Salmonella-Agar nach ÖNÖZ zur Züchtung von Salmonellen (Fa. Merck,
Darmstadt) 80, 5 g
• Aqua dest. 1000 ml
lösen durch Erhitzen und zu Platten gießen
8.2.4 Campylobacter-Platte
• Campylobacter-Selektivagar (Basis) für die Mikrobiologie (Fa. Merck, Darmstadt)
40 g
• Aqua dest. 1000 ml
bei 121° C 15 min autoklavieren;
nach Abkühlung auf 45-50° C
• Campylobacter Selektivsupplement (Fa. Merck, Darmstadt) und
152 Anhang
• 5-7 % Blut einmischen
8.2.5 Salmonellen-Anreicherungsbouillon
• Salmonella-Anreicherungsbouillon nach RAPPAPORT für die Mikrobiologie (Fa.
Merck, Darmstadt) 54 g
• Aqua dest. 1000 ml
in Röhrchen abfüllen und 20 min bei 115° C autoklavieren
8.2.6 Herstellung mikroaerophiler Bedingungen
• CampyPak Plus (Becton Dickinson, Heidelberg) 1 Päckchen
• Aqua dest. 10 ml
mit Pipette 10 ml Aqua dest. in einen Brief eingeben und in den Anaerobiertopf
verbringen
8.3 Protokolle für die Parasitologie
8.3.1 Lugolsche Lösung
• 7,5 g Kalium-Iodid (KI) in 18 ml Aqua dest. lösen
• 0,5 g Jod dazu geben und auf 100 ml mit Aqua dest. auffüllen
• in einer braunen Flache aufbewahren
1Tropfen Lugolsche Lösung mit etwas Kot verrühren, mit einem Deckglas
abdecken und mikroskopieren (beginnend bei 10facher Vergrößerung)
8.3.2 Modifizierte Ziehl-Neelsen-Färbung (Kinyoun-Färbung)
• Karbolfuchsinlösung
Fuchsinlösung: 4 g basisches Fuchsin in 20 ml Ethanol 95 % lösen
Phenollösung: 8 g Phenolkristalle durch leichtes Erwärmen verflüssigen,
Anhang 153
dann 100 ml Aqua dest. zufügen
Zur Herstellung der Karbolfuchsinlösung die Fuchsin- und die Phenollösung
mit Magnetrührer über Nacht bei 36° C mischen. Vor Gebrauch filtrieren.
• Salzsäure-Alkohol
3 ml Salzsäure (HCl) konz. 97 ml Ethanol 95 %ig zugeben und vorsichtig mischen
• Methylenblaulösung
0,3 g Methylenblauchlorid in 100 ml Aqua dest. lösen
• Durchführung
-Stuhlausstrich ca. 1 Stunde lufttrocknen lassen
-Fixieren in Methanol 5 min
-Lufttrocknen lassen
-Karbolfuchsinlösung, kalt 20 min
-mit Wasser abspülen
-Entfärben in HCl-Alkohol ca. 2 min
-mit Wasser abspülen
-Gegenfärbung mit Methylenblau 1 min
-mit Wasser abspülen und trocknen lassen
-den gefärbten Objektträger mit einem Tropfen Öl und einem Deckglas bedecken
und mit bei 40facher Vergrößerung lichtmikroskopisch nach Kryptosporidien
durchsuchen
8.3.3 Methylenblaufärbung
• eine kleine Menge Kot auf einem Objektträger ausstreichen und lufttrocknen
lassen
• Methylenblau 0,05 %ige wässrige Lösung 10 min
154 Anhang
8.4 Protokolle und Lösungen für die Immunhistochemie
8.4.1 Zitratpuffer
• Stammlösung A: 0,1 M Zitronensäure (C6H8O7 H2O)
Zitronensäure 21,01 g
Aqua bidest. ad 1000 ml
• Stammlösung B: 0,1 M Natriumzitrat (C6H5Na3O7 2H2O)
Natriumzitrat 29,41 g
Aqua bidest. ad 1000 ml
• Gebrauchslösung: 0,01 M, pH 6,0
Stammlösung A 18 ml
Stammlösung B 82 ml
Aqua bidest. 900 ml
8.4.2 Versuchsprotokoll CD3, CD 20 und MAC
Schnitte entparaffinieren und rehydrieren durch absteigende Alkoholreihe im
Färbeautomat VaristainGemini (Fa. Shandon, Frankfurt)
• Xylol unter dreimaligem Wechsel (5 min, 2 min, 2 min)
• 100%iger Alkohol: 2 min
• 96%iger Alkohol: 2 min
• 80%iger Alkohol: 1 min
• 70%iger Alkohol: 1 min
• endet im Aqua dest.
Schnellkochtopf (zur Antigen-Demaskierung bei CD3 und CD20)
• 1 Liter Zitratpuffer im Topf zum Kochen bringen
• Paraffinschnitte in kochenden Puffer stellen, Deckel schließen, bei Erreichen des
Maximaldruckes im Topf Schnitte noch 1 min kochen lassen
• zum Druckausgleich Topf kalt wässern, Topfdeckel abnehmen und Schnitte ca.
20 min im Puffer stehen lassen
Anhang 155
NexES-IHC-Färbemodul vorbereiten
• Etiketten drucken und Reagenzienkarussell bestücken
• Waschpuffer und Öl auffüllen sowie Abfallbehälter kontrollieren
• Schnitte aus dem handwarmen Puffer entnehmen und in eine Küvette mit Aqua
dest. stellen
• Barcode-Etiketten auf die Objektträger kleben, diese im NexES einspannen und
mit APK-Waschpuffer bedecken
Durchführung
• Lauf starten, ab jetzt läuft die immunhistochemische Reaktion vollautomatisch im
Gerät nach der SABC-Methode (Streptavidin-Biotin-Komplex) ab
• Objektträger werden auf 37° C erwärmt
• 4 min I-VIEW Inhibitor (3 %ige H2O2 zur Hemmung der endogenen Peroxidase)
• bei MAC 387: 8 min Protease 1 (0,5 enzyme unit/ml) als enzymatische
Vorbehandlung
• Option 1 für 10 min (Ziegenserum 1:5 mit PBS verdünnt, zum Blockieren
unspezifischer Bindungsstellen)
• 32 min CD3- bzw. CD20- bzw. MAC-Antikörper in der jeweiligen Verdünnung
(CD3 1:100, CD20 1:300, MAC 1:100)
• 2 min Fixative 1 (20 µl Glutardialdehyd in 10 ml 0,9 %ige NaCl)
• 8 min I-VIEW Biotin Ig (Biotinylierter Sekundärantikörper, ein so genannter Multi-
Link-Antikörper, der sowohl Maus- als auch Kaninchenimmunglobuline erkennt)
• min I-VIEW SA-HRP (Streptavidin-Meerrettichperoxidase-Komplex)
• 8 min I-VIEW DAB und I-VIEW H2O2 (Enzymhistochemische Reaktion, DAB 2 g/l
als Chromogen und 0,04 - 0,08 %ige H2O2 )
• 4 min I-VIEW Copper (Kupfersulfat 5 g/l)
• 4 min Hämatoxylin (zur Gegenfärbung)
• 4 min Bluing Reagent (zum Bläuen)
• allen Inkubationsschritten im NexES-IHC-Färbemodul folgen definierte
Waschschritte mit dem APK-Waschpuffer von VENTANA (Cat. 250-042)
• Schnitte dem Gerät entnehmen, in einer Küvette mit Aqua dest. und Spülmittel
schwenken, um das im NexES verwendete Öl zu entfernen und anschließend in
156 Anhang
eine Küvette mit Aqua dest. überführen
Aufsteigende Alkoholreihe im Färbeautomaten VaristainGemini (Fa. Shandon,
Frankfurt am Main)
• 70%iger, 80%iger, 96%iger und 100%iger Alkohol jeweils für 1 min
• 100%iger Alkohol für 2 min
• Xylol unter dreimaligem Wechsel (1 min, 3 min, 3 min)
• eindecken der Objektträger mit Eukitt (Fa. Kindler, Freiburg)
8.5 Göttinger Mischung II
• Ketamin (100 mg/kg) 5 ml
• Xylazin (10 %ig) 1 ml
• Atropin (1 %ig) 0,1 ml
• Aqua ad injectionem 3,9 ml
Anhang 157
* nicht untersucht
Anhangstab. 1: Differentialblutbilder der Weißbüschelaffen mit WMS aus dem DPZ und von der Firma Boehringer Ingelheim mit Angabe von Referenzwerten für Callithrix jacchus nach FORTMAN et al. (2001).
8.6 Anhangstabellen
G-Nr.Eryt.
(106/µl)Leuko.
/µlStab. (%)
Seg. (%)
Eosin.(%)
Baso.(%)
Mono. (%)
Lymph. (%)
HTK (%)
Hb (g/dl)
MCH (pg)
MCV (µm3)
MCHC (g/dl)
6634 4,2 800 8 70 – – – 22 34 8,71 20,7 80,9 *6650 4,18 3600 1 55 – – – 44 44 12,4 29,7 105,2 *6687 – – 1 33 – – – 66 31 * * * *6688 3,73 1800 – 71 – – – 29 32 10,2 27,3 85,8 *6694 4,95 1950 * * * * * * 40 11,1 22,4 80,8 *6787 * * * * * * * * * * * * *6795 3,62 1900 – 63 – – – 37 36 * * 99,4 *6821 4,15 22506859 5,3 19006869 * *6905 3,84 48906931 * *6940 5,15 32207035 2,12 17207079 * *7092 3,75 44207096 4,8 8350
7062 6,51 10007063 4,68 55007064 7,28 48107065 5,01 81607066 6,57 83807067 6,41 567
Ref.-wert 4,6-6,6 4900-
11300
– 28 – – – 72 28 * * 67,47 *– 29 – – – 71 48 * * 91,8 ** * * * * * * * * * *1 71 1 1 1 25 42 * * * ** * * * * * * * * * *1 52 – – 1 46 30 * * * *– 31 1 – 13 55 18,5 5.05 23,9 87,4 27,3* * * * * * * * * * *– 64 1 – 2 33 29,5 8,43 22,5 78,7 28,6– 48 – 1 1 50 35,3 10,3 21,4 73,5 29,1
– 30 1 1 20 48 50,6 12,7 19,6 77,8 25,1– 39 – – 3 58 37,3 10,7 22,9 79,7 28,8– 48 – 1 7 44 50,1 15,1 20,7 68,8 30,1– 30 1 – 3 66 39,4 11,2 22,4 78,8 28,5– 25 – – 3 72 51,9 15 22,9 78,9 29– 60 – – 12 28 47,5 14,1 22 74,2 29,6
0-1,4 0-2,1 0,4-6,2 35-67 32-54 12,6-
19,6 14-32 66-78 34-5427-59
Anh
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tab.
2: K
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l. (2
001)
und
PR
YC
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(199
7).
6634
6650
6687
6688
6694
6787
6795
6821
6859
6869
6905
6931
6940
7035
7079
7092
7096
Albu
min
(g/d
l)4,
4-5,
83,
353,
843,
013,
313,
03*
3,82
2,94
4,19
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3,47
1,25
2,15
2,97
*2,
452,
88AP
(U/l)
34-8
856
101
4948
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295
6727
6*
150
589
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ase
(U/l)
337-
1523
781,
877
9,5
545,
577
4,1
1363
*11
4899
9,2
639,
986
5,7
643,
959
1,1
479,
257
5,1
*58
9,4
728
Ges
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(m
g/dl
)0-
1,02
0,06
0,08
0,07
0,09
0,15
*0,
090,
090,
090,
220,
070,
10,
040,
14*
0,14
0,18
Ca
(mm
ol/l)
2,3-
2,9
3,77
2,31
2,25
2,91
2,9
*3,
982,
952,
52,
031,
622,
322,
282,
2*
1,9
2,22
Cho
l (m
g/dl
)13
6-23
411
414
273
102
139
*13
511
511
417
310
819
712
657
*99
77C
K (U
/l)92
0-24
1016
3544
6846
7438
5933
49*
4756
5620
7873
3526
1432
654
2109
811
44*
1274
2283
Krea
tinin
(mg/
dl)
0,25
-1,9
0,33
0,23
0,19
0,29
0,57
*0,
260,
065
0,24
0,3
0,24
0,07
0,14
0,12
*0,
280,
15G
es.-E
iwei
ß (g
/dl)
6,4-
8,0
5,38
6,05
4,93
5,48
6,43
*6,
335,
516,
216,
525,
143,
074,
94,
56*
4,98
5,13
Glu
kose
(mg/
dl)
124-
220
145
106
159
169
250
*12
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149
138
190
105
184
*21
025
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T (U
/l)10
6-19
612
2,1
360,
317
214
8,5
207,
8*
59,6
468,
717
5,3
82,6
236
1105
3905
286,
4*
197,
158
5,4
ALT
(U/l)
38-7
20,
110
,98,
82
9,3
*2
36,8
13,3
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15,4
45,8
39,8
2,5
*11
,59
GG
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/l)5,
8-15
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41,
21,
30,
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3,2
5,2
2,3
3,8
*4,
14
Har
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g/dl
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02-8
0,97
1,06
1,27
1,47
2,47
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672,
312,
351,
131,
731,
140,
780,
53*
1,33
1,37
BUN
(mg/
dl)
15-2
99,
535
,912
,910
40,5
*4,
718
,918
,513
10,9
49,6
21,6
13,3
*25
,69
Eise
n (µ
mol
/l)6-
4521
,421
,727
,827
,211
,5*
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10,4
199
27,6
*13
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8359
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174
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(mg/
dl)
63-2
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183
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5082
5797
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Phos
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ol/l)
1,4-
2,3
1,58
2,33
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2,29
5,31
*1,
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212,
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1,21
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(mm
ol/l)
153-
169
150,
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2,3
152,
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125,
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156,
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150,
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152
155,
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141,
6K
(mm
ol/l)
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4,7
3,65
4,12
4,38
3,08
5,24
*4,
937,
194,
523,
775,
184,
12,
467,
85*
3,91
5,12
Cl (
mm
ol/l)
93-1
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112,
612
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116,
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8,7
118
111,
812
3,8
119
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6,9
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7
G-N
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*
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158 Anhang
Anhang 159
Anhangstab. 3: Klinische Chemie bei den Weißbüschelaffen mit WMS von der Firma Boehringer Ingelheim mit Angabe von Referenzwerten für Callithrix jacchus nach FORTMAN et al. (2001) und PRYCE et al. (1997).
7062 7063 7064 7065 7066 7067Albumin (g/dl) 4,4-5,8 4,08 3,19 3,12 3,96 4,35 4,08
AP (U/l) 34-88 442 197 212 276 239 266Amylase (U/l) 337-1523 896,5 791,2 772 715,4 853,9 688,4Ges.-Bilirubin
(mg/dl) 0-1,02 0,17 0,59 0,14 0,12 0,15 0,07
Ca (mmol/l) 2,3-2,9 2,44 2,3 2,45 2,37 2,54 2,78Chol (mg/dl) 136-234 124 128 128 106 233 160
CK (U/l) 920-2410 1160 14615 5708 * 9658 4238Kreatinin (mg/dl) 0,4-0,6 0,33 0,06 0,21 0,4 0,21 0,14
Ges.-Eiweiß (g/dl) 6,4-8,0 7,39 5,87 5,28 6,38 7,18 6,37
Glukose (mg/dl) 124-220 150 187 199 209 201 121
AST (U/l) 106-196 217,2 1436,7 311,2 * 322,5 264,4ALT (U/l) 38-72 2,8 23,3 20,2 78,3 23,9 13,4GGT (U/l) 5,8-15,3 0,2 37,4 1,6 1,7 2,7 1,8Harnsäure
(mg/dl) 0,02-8 1,57 1,3 1,37 1,56 1,36 1,01
BUN (mg/dl) 15-29 22,4 9,3 15,3 22,7 14,5 18,5Eisen (µmol/l) 6-45 21,2 23,3 24,6 17,9 26,5 18,7
LDH (U/l) 108-328 357 993 474 * 903 335Triglyceride
(mg/dl) 63-209 52 131 42 64 85 57
Phos (mmol/l) 1,4-2,3 2,35 2,15 2,6 2,58 2,69 3,03Na (mmol/l) 153-169 158,1 158,7 152,2 151,7 154,1 155,9K (mmol/l) 3,5-4,7 3,83 3,94 4,58 7,01 4,53 4,32Cl (mmol/l) 93-121 111,4 120,3 113,9 116,4 115,7 116,9
Parameter Ref.-wertG-Nummern
* nicht untersucht
160 Anhang
Anhangstabelle 4: Bakteriologische Befunde der Weißbüschelaffen mit WMS aus dem DPZ und von der Firma Boehringer Ingelheim.
G-Nr. Dünndarm Dickdarm andere Organe
6634 – E. coli +++ –6650 – Streptococcus sp. + –6687 – E. coli +++ –6688 – E. coli +++ –
6694 E. coli + Klebsiella sp. +
E. coli +++ Klebsiella sp. +
Proteus sp. +–
6787E. coli +
Streptococcus sp. ++ Klebsiella sp. ++
E. coli +++ Klebsiella sp. +
Streptococcus sp. + Campylobacter sp. +++
Citrobacter freundii +
–
6795 E. coli +
Staphylococcus sp. ++ Campylobacter sp. +++
E. coli +++ hämolyt. E. coli + Klebsiella sp. +
Campylobacter sp. +++
–
6821 – E. coli + Streptococcus sp. + –
6859 – Klebsiella ozaenae ++ Campylobacter sp. + –
6869 E. coli + Acinetobacter sp. + E. coli +++ –
6905 E. coli +++ E. coli +++ –6931 – E. coli + –
6940 – E. coli + Streptococcus sp. + –
7035 hämolyt. E. coli + hämolyt. E. coli +++ E. coli ++
Niere: Serratia liquefacies +++
7079 – E. coli ++ –
7092 – hämolyt. E. coli + E. coli ++ –
7096 E. coli ++ Streptococcus sp. ++ E. coli +++ –
7062 Streptococcus sp. + E. coli +++ –7063 – E. coli ++ –7064 – E. coli + –
7065 – E. coli + Streptococcus sp. + –
7066 – E. coli ++ –
7067 E.coli + Streptococcus sp. ++ E. coli +++ –
Anhang 161
8.7 Stammbäume
= weiblich
= männlich
grau unterlegte Felder = Merkmalsträger (WMS)
Paar 1 (ohne Merkmalsträger):
6892 6891 6038
5843
6405 6253 6254
7039 7163 6168 6130
9497
9496 7417
9128 8074
8329 8073
9475
8128 9474
7316 9170
7315 9169
7035 7317
7594 7036
6822 6823
5606
8328
8719
8720
9129
162 Anhang
Paar 2 (ein Merkmalsträger):
7484
5919
7483
7600 7727 6756
9733 9386
8801
8533
8043 8044 9498 9018
9219 8937
9218 8936
8532 8800
8284 8285
9499 10182
9273 9954
9274 9955
9019 9732
7238 7237 6775
6416
6774
9387 10183
Anhang 163
Paar 3 (zwei Merkmalsträger):
8095
9249
10170 9245
11370
11767
12093
10715
11347
11346
11081 10524
1078 10714 8937
10439 10440
11036 11080 11766
12094
11369
11559
11560
10782
3 10525
9740 9739
7960
9248
Göttingen, den 19.08.2005
Eidesstattliche Erklärung
Hiermit erkäre ich, dass ich die Dissertation mit dem Titel „Pathogenetische
Untersuchungen zum Wasting Marmoset Syndrom bei Weißbüschelaffen (Callithrix
jacchus)“ selbstständig verfasst habe. Bei der Anfertigung wurden folgende
Hilfsmittel und Hilfen Dritter in Anspruch genommen:
• Technisch-methodische Einweisung durch technische Assistentinnen der
Abteilung Infektionspathologie, Deutsches Primatenzentrum Göttingen.
• Redaktionelle Überarbeitung durch wissenschaftliche Mitarbeiter und Leiter der
Abteilung Infektionspathologie, Deutsches Primatenzentrum Göttingen.
• Veterinärmedizinische Daten der Weißbüschelaffenkolonie aus der Abteilung
Infektionspathologie, Deutsches Primatenzentrum Göttingen.
• Tiermaterial von der Firma Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG in
Biberach an der Riss und von der Ethologischen Station der Anthropologischen
Einrichtungen des Instituts für Zoologie, Anthropologie und Entwicklungsbiologie
der Universität Göttingen.
• Die E. coli-Typisierung wurde vom Nationalen Referenzzentrum für Salmonellen
und andere Enteritiserreger des Robert Koch - Instituts in Wernigerode
durchgeführt.
• Die hämatologischen und serologischen Untersuchungen wurden teilweise vom
Zentrallabor des Klinikums der Georg-August Universität Göttingen durchgeführt.
Ich habe keine entgeltliche Hilfe von Vermittlungs- bzw. Beratungsdiensten
(Promotionsberater oder anderen Personen) in Anspruch genommen. Niemand hat
von mir unmittelbar oder mittelbar entgeltliche Leistungen für Arbeiten erhalten, die
im Zusammenhang mit dem Inhalt der vorgelegten Dissertation stehen.
Die Dissertation wurde in der Abteilung Infektionspathologie des Deutschen
Primatenzentrums in Göttingen unter der Leitung von Herrn Univ. Prof. Dr. F.-J. Kaup
angefertigt und bisher nicht für eine Prüfung oder Promotion oder für einen ähnlichen
Zweck zur Beurteilung eingereicht.
Ich versichere, dass ich die vorstehenden Angaben nach bestem Wissen vollständig
und der Wahrheit entsprechend gemacht habe.
Martina Zöller
Danksagung
Zum Abschluss möchte ich allen danken, die zum Gelingen dieser Arbeit beigetragen
haben.
Bedanken möchte ich an erster Stelle bei meinem Doktorvater, Herrn Univ. Prof. Dr.
F.-J. Kaup, für die Überlassung des Themas, die uneingeschränkte Unterstützung
bei der Durchführung der Arbeit und deren kritischer Korrektur, aber auch für die
Ausbildung auf dem Gebiet der Veterinärpathologie.
Sehr herzlich bedanke ich mich bei Frau Dr. Mätz-Rensing für die Hilfe bei der
Materialgewinnung, die fachlichen Anregungen, die kritische Durchsicht der Arbeit
und die pathologischen Lehrstunden. Ebenfalls bedanken möchte ich mich bei Frau
Dr. B. Löblich-Beardi für die fachliche Hilfestellung bei histologischen
Fragestellungen.
Mein besonderer Dank gilt Frau N. Knöchelmann und Frau K. Kaiser-Jarry für die
gute methodische Einarbeitung in die Histologie und Immunhistochemie und die
Hilfen und Tipps bei allen technischen Belangen. Herrn W. Henkel, Frau L. Lischka
und Frau H. Zuri danke ich für ihre Hilfe und tatkräftige Unterstützung bei den
Tätigkeiten ‚hinter der Schleuse‘.
Weiterhin möchte ich Frau Dr. A. Schrod und Herrn U. Schönmann für die
Bereitstellung von Informationen über das Zuchtmanagement und von
veterinärmedizinischen Daten der Weißbüschelaffenkolonie des DPZ bedanken.
Herrn Dr. L. Schmid von der Firma Boehringer Ingelheim und Herrn Prof. Dr. H.
Rothe danke ich für die Überlassung des Tiermaterials.
Ebenso danke ich Frau I. Roßbach für die geduldige Hilfestellung bei
fremdsprachlichen und organisatorischen Fragen.
Allen nicht genannten Mitarbeitern und Mitarbeiterinnen der Abteilung
Infektionspathologie danke ich für die freundliche Atmosphäre und das gute
Arbeitsklima.
Bedanken möchte ich mich auch bei der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG),
die durch ein Stipendium im Rahmen des Graduiertenkollegs „Perspektiven der
Primatologie“ die Anfertigung dieser Dissertation unterstützte.
Ein großes Dankeschön für rat- und tatkräftigen Beistand geht an das aktuelle und
ehemalige „Doktorandenzimmer“ mit Frau Dr. A. Blankenburg, Frau Dr. C. Kott, Frau
Dr. A. Quohs, Herrn Dr. F. Runge und Herrn M. Caglar.
Mein herzlichster Dank gilt meinen Eltern für den liebevollen Rückhalt und die
moralische sowie finanzielle Unterstützung.