1
2010 1
Farbstoffe
und
Färbungen
Farben,
BiologischesMaterial
Esther Osterwalder
Esther Osterwalder / 2010 2
Mögliche Darstellung von Strukturen, Krankheiten
Braune Käppchen bei den Zellkernen (Virusproteine)
OrceinHepatitis-B-Antigen
Blaue, kurze, kommaförmige Stäbchen
Giemsa CHelicobacter pylori
Rostrot bis grünbraunRhodaninKupfer
LM: lachsfarbigPolar.: apfelgrün
KongorotAmyloidose
Fuchsinfarbige StäbchenZiehl NeelsenSäurefeste Stäbchen bei Verdacht auf Tuberkulose
Diastase verdaut allfällige Glykogenschollen: die Differenz der beiden Nachweise (pink) zeigt auf, ob Glykogen vorhanden war oder nicht
Immer 2 Färbungen:PAS + D-PAS
Chemisches Färbeprinzip
Glykogen
Kalk schwarzvon Kossa = eine Silberimprägnation
Kalk, Mikroverkalkungen z:B. in der Mamma
Proteindepots rotSFOG = eine Trichromfärbung
Proteinablagerungen in der Niere bei Kimmelstiel-Wilson
dargestelltNachweisBezeichnung
2
Esther Osterwalder / 2010 3
Gewebespezifische Färbungen an Kleinbiopsien
HE, EVG,Ab-PASDarmbiopsien
HE, EVG,Ab-PAS, Gic (Giemsa C)Magenbiopsien
HE, EVGGefässe (Blut-)
HE, EVGHerzbiopsien
HE, EVG, Ab-PAS, EisenLungenbiopsien
HE, Giemsa, GomöriLymphknoten
HE, EVG, PAS, D-PAS, CAB, Eisen,
Gomöri, Orcein
Leberbiopsie
HE, PAS, Silbermethenamin SFOG,Nierenbiopsie
Färbungen, NachweiseOrgan/Gewebe
Esther Osterwalder / 2010 4
Voraussetzungen für Färbungen in allen Fachgebieten
Licht, Auge, Farbe
Vorhandensein von biologischem Material
Brauchbare Farbstoffe und richtige Farbstoffwahl
Korrekte Ausführung des Färbevorganges
Qualitätskontrolle am Mikroskop
3
Esther Osterwalder / 2010 5
Farben
Esther Osterwalder / 2010 6
Farben
4
Esther Osterwalder / 2010 7
Farben
Esther Osterwalder / 2010 8
Farben
5
Esther Osterwalder / 2010 9
BiologischesMaterial Herpes-simplex-Virus infizierte Verozellen
mit Phasenkontrast, links ungefärbt 200x, rechts ungefärbt, 100x
links: TUNEL-Reaktion (Rotfärbung), ca 300x, rechts: gleiches Präparat ohne Phasenkontrast
Esther Osterwalder / 2010 10
Blutaustrich normal, nach Pappenheim gefärbtBiologischesMaterial
Blutaustrich normal, ungefärbt
6
Esther Osterwalder / 2010 11
FarbenBiologischesMaterial
+
Mikroskop:Spongiosa, KM / Goldner /Kallus am Knochenbälckchen /Osteoporose
Esther Osterwalder / 2010 12
BiologischeBausteine
ProteineKohlenhydrateLipideMineralien
Zusammenfassung:
sind die Partner der Farbstoffe und Reaktionslösungen.
7
Esther Osterwalder / 2010 13
Woher stammen die Farbstoffe?
Was sind Farbstoffe?
Welche Farbstoffe werden für diemikroskopischen Färbungen
gebraucht?
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 14
Färbende Mittel
Farbstoffe Pigmente
werden mit einem Bindemittel aufgestrichen
anorganischeRussorganische
gehen mit dem biologischen Material
eine feste Bindung ein
TierePflanzenTeerderivate
Woher stammen die Farbstoffe?Farbstoffe
8
Esther Osterwalder / 2010 15
Anorganische Pigmente stammen aus dem
Mineralreich:
Umbra-Braun
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 16
Rötel
Ocker
Farbstoffe
9
Esther Osterwalder / 2010 17
Eisen- und ManganhaltigeTonarten
Zinnober
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 18
Lapislazuli
Farbstoffe
10
Esther Osterwalder / 2010 19
TuscheFarb-Russe
Russ besteht zu 80 - 99.5% aus Kohlenstoff und ist ein schwarzer, pulverförmigerFeststoff.
Darstellung von Gang-systemen
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 20
Organische Pigmente
Melanin
Hämosiderin
Farbstoffe
11
Esther Osterwalder / 2010 21
Tierreich
Sekrete und Extrakte
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 22
Purpur
6,6 -Dibromindigo
Farbstoffe
12
Esther Osterwalder / 2010 23
Karmin
Cochenille
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 24
Pflanzenreich
Textilfärberei
aller Kulturen
Farbstoffe
13
Esther Osterwalder / 2010 25
Indigo
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 26
Farbstoffe
14
Esther Osterwalder / 2010 27
Hämatoxylin
Blauholzbaum
Hämalaun nach P. Mayer
**PflanzenFarbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 28
· Bleihämatoxylin nach McConaill· Chrom-Hämatein nach Hansen· Eisenhämatoxylin nach Faure· Eisenhämatoxylin nach Hansen· Eisenhämatoxylin nach Häggqvist· Eisenhämatoxylin nach Heidenhain· Eisenhämatoxylin nach Weigert· Hämalaun-Erythrosin-Safran nach Masson
Hämatoxylin nach Gill· Hämatoxylin nach Delafield· Hämatoxylin nach Harris· Hämatoxylin-Chrysoidin-Färbung· Hämatoxylin-Eosin (HE-Färbung)· Hämatoxylin-Safranin-Färbung· Molybdänhämatoxylin nach Held· Saures Hämalaun nach Mayer
· Saures Hämatoxylin nach Ehrlich
**Pflanzen
Farbstoffe
15
Esther Osterwalder / 2010 29
Teerderivate
Synthetische Farbstoffe
Erster synthetischer Farbstoff:
die Pikrinsäure
1777
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 30
Muskulatur durch Pikrinsäure gelbVG - Färbung
***TeerderivateFarbstoffe
16
Esther Osterwalder / 2010 31
Was sind Farbstoffe?
oder
Wann ist ein Stoff ein Farbstoff?
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 32
Merkmale der Farbstoffe
a) Sie besitzen ganz bestimmte Absorptionsmaxima
b) Farb Kationen+ oder Farb Anionen-
können an Gegen Ionen gebunden sein
c) Farbstoffe können echt färben
Wann ist ein Stoff ein Farbstoff?Farbstoffe
17
Esther Osterwalder / 2010 33
Farbstofflösungen absorbieren bestimmteWellenlängen des sichtbaren Lichtes.
a)Sie besitzen ganz bestimmte Absorptions-maxima:
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 34
Der Farbstoff erscheint in der Farbe desdurchgelassenen Restlichtes (Mischfarbe)
Mischfarbe
Farbstoffe
18
Esther Osterwalder / 2010 35
Jeder Farbstoff besitzt seine typischeAbsorptionskurve.
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 36
Jeder Farbstoff hat weltweit seine
C.I.-Nummer
(Color Index)
Farbstoffe
19
Esther Osterwalder / 2010 37
Nicht jeder farbige Stoff ist ein Farbstoff.
Ein Farbstoff enthält:
Chromophore Gruppen
und
Auxochrome Gruppen
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 38
Chromophore
Azo Gruppe - N = N
Nitro Gruppe - NO2
Karbonyl Gruppe - C = O
Farbstoffe
20
Esther Osterwalder / 2010 39
Die Gruppen wirken nur farbig in Verbindung miteinem oder mehreren Benzolringen.
Chromophor
Chromophor
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 40
Auxochrome
Hydroxyl Gruppe - OH
Amino Gruppe - NH2
Sulfonsäure Gruppe - SO3H
Karboxyl Gruppe - COOH
Farbstoffe
21
Esther Osterwalder / 2010 41
Chromophor
Chromophor
(Aminoazobenzol)
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 42
Die auxochromen Gruppen wirken nicht nur Farbvertiefend, sie stellen vielmehr die Ver-bindung zwischen Farbstoff und färbendemMaterial her.
Der Farbstoff wird salzartig an dasbiologische Material gebunden.
ProteineKohlenhydrateLipideMineralien
Na+ Cl-
Farbstoffe
22
Esther Osterwalder / 2010 43
b) Farb Kationen+ oder Farb Anionen-können an Gegen ionen gebunden sein
Giemsa
Farbstoffe
neutraler Farbstoff
Esther Osterwalder / 2010 44
c) Farbstoffe können echt färben
Rep.: Coulomb / van der Waal
Farbstoffe
23
Esther Osterwalder / 2010 45
Einteilung der Farbstoffe:
positive Ladung negative Ladung
Kationische Farbstoffe Anionische Farbstoffe
AlcianblauAzur A + B (Giemsa)BismarckbraunFuchsin bas.GentianaviolettKarbolfuchsinKristallviolettMethylenblauParafuchsinKernechtrot (Lack)Hämalaune (Lacke)Harris Hämatoxylin (Lack)
Lichtgrün SFSäurefuchsinHämatoxylin resp. HämateinPikrinsäureEosin YOrange GKernechtrot
Farbstoffe
Esther Osterwalder / 2010 46
Buchstaben interpretieren
X = indifferent (in Lösung pH un-abhänig)
M = Mischung
Y = yellowish = gelblichL = lichtecht
W = wasserlöslichH = hitzebeständig
T = tiefer FarbtonG = grünstichig
S = besser löslich (solubel)F = klare Töne
R = rotstichigD = zum Drucken
P = PigmentC = chlorecht
O = orangeB = blaustichig
N = neuA = Acetatseide
Anzahl vor dem Buchstaben deutet auf die Farbintensität hin.
Luxol Fast Blue MBSN: Mischung, blaustichig, besser löslich, neuAlcianblau 8GX: 8x grünstichig, indifferentChromotrop 2R: 2x rotstichigToluidinblau O: orangeSiriusrot F3B: klare Töne, 3x blaustichigOrange G: grünstichig
Farbstoffe
24
Esther Osterwalder / 2010 47
HE - PAS - VG EVG Alcianblau-PASGic - CAB Berlinerblau -
Gomöri von Kossa -Fettnachweis - Kongo
Färbungenin der
Histologie
Esther Osterwalder / 2010 48
Färbungen zuordnen nach:
Übersichtsfärbungen (HE, Giemsa)NachweisenReaktionsprinzipien (3)Trichromfärbungen (VG, CAB, Goldner, SFOG)Spezialfärbungen (ZN, Versilberung)Routinefärbungen
HE - PAS - VG EVG Alcianblau-PAS - Gic - CAB Berlinerblau -Gomöri von Kossa Fettnachweis - Kongo
25
Esther Osterwalder / 2010 49
Färbungen zuordnen: Übersichtsfärbung
Die Übersichtsfärbung verschafft einen Überblick über das Gewebe, die Strukturen, die Zellverteilung, Anfärbbarkeitund Kern-Plasma-Relationen.Sie besteht aus Kernfärbung und Zytoplasmafärbung.
zB: Hämatoxylin-EosinGiemsa
Esther Osterwalder / 2010 50
Zellen/Zellkernanfärben:
Für alle Färbungen gültig:
26
Esther Osterwalder / 2010 51
+
---
-
Für alle Färbungen gültig:
Esther Osterwalder / 2010 52
Schematischer Aufbau eines Zellkernes:
Nukleoproteid
Protein:
Histon+
Nukleotidkette:diese besteht aus
Nukleinsäuremolekülen,von denen jedes aus
- Phosphorsäure-
- Pentose- N-haltige Base
besteht
Hämalaunv. HE
Übersichtsfärbung
Für alle Färbungen gültig:
27
Esther Osterwalder / 2010 53
Die Kernfarbstoffe sind meist Farblacke
das Eisen III Hämatoxylin nach Weigert
Hämalaun : Hämatein + Alaun
Hämalaun nach P. Mayer besteht aus Kalium-Aluminiumsulfat plus Hämatein. Alaune sind so genannte Doppelsalze.
Kernechtrot : Kernechtrot + AluminiumsulfatÜbersichtsfärbung
GewebeMetallsalz
FeIII-chlorid
Farbstoff
Hämatein
Farblack+
Farblack+
Für alle Färbungen gültig:
Esther Osterwalder / 2010 54
Zellen/Zyto-
plasmaanfärben:
z.B.Eosin Y v. HE
Übersichtsfärbung
Für alle Färbungen gültig:
28
Esther Osterwalder / 2010 55
Wasser 80,5 85 % Proteine 10 15 %
Lipide 2 4 % Polysaccharide 0,1 1,5 %
DNA 0,4 % RNA 0,7 %
kleine organische Moleküle 0,4 % anorganische Moleküle und Ionen 1,5 %
Zusammensetzung des Zytoplasmas
Für alle Färbungen gültig:
Esther Osterwalder / 2010 56
Zu den basischen Aminosäuren gehören:Lysin
ArgininHistidin
Zu den sauren Aminosäuren gehören:Asparaginsäure (Aspartat) Glutaminsäure (Glutamat)
Weitere Aminosäuren mit ionisierbaren Resten:CysteinTyrosin
Für alle Färbungen gültig:
29
Esther Osterwalder / 2010 57
12,48 basischArg
9,3 9,510,53basischLys
9,7 10,110,07 semisauerTyr
8,8 9,18,33semisauerCys
6,7 7,16,0basischHis
4,2 4,54,25sauerGlu
3,7 4,03,68sauerAsp
im ProteinfreiBezeichnungAminosäure
Für alle Färbungen gültig:
Esther Osterwalder / 2010 58
Eosin Y
Orange G
Pikrinsäure
Anilinblau
Säurefuchsin
Chromtrop 2R
Lichtgrün
Wichtige Zytoplasma-Farbstoffeneg
Wichtige Zellkern-farbstoffepos
Hämalaun
Kernechtrot
Weigert s Eisenhämatoxylin
Methylenblau
Färbungen
30
Esther Osterwalder / 2010 59
Jeder der basischen Teerfarbstoffe ist in der Lage mit Eosin ein Salz zu bilden (Methylenblau-Eosinat, Azur-Eosinat).
Mischungen dieser Farbstoffe und ihrer Eosinate färben das Zytoplasma und die Zellkerne je nach pH Wert der Lösung.
Giemsa
Der neutrale Farbstoff färbt das Chromatinvon Leukozyten rötlich-violett/marron (Eosin, Methylenblau).
Das kationische Azur bindet an DNA unddie Eosin-Anionen an das bereits gebundene Azur.
pH-Wert ist massgeblich(um pH 4)
: ein zu blaues Ergebnis wird durch Differenzieren in0.01% Eisessiglösung in Richtung Rosa verändert
Übersichtsfärbung
Esther Osterwalder / 2010 60
Nachweise
EVG/VG-El, OrceinElastisches Bindegewebe
Gomöri, NovotnyRetikuläres Bindegewebe
Van Gieson, CAB, Sirius, SFOGKollagenes Bindegewebe
KongorotAmyloid
Berlinerblau-ReaktionEisen
Alcianblau - PASNeutrale + saureGlycosaminglycane = GAG
PASNeutrale Glycosaminglycane = GAG, Kohlenhydrate, Glykogen
Giemsa C / GicHelicobacter pylori
Sudan III, Sudan schwarz, ÖlrotFettnachweis
Ziehl NeelsenSäurefeste Bakterien (Tb)
von Kossa, Alizarinrot SKalk
FärbungSubstanz
Färbungen zuordnen:
31
Esther Osterwalder / 2010 61
GoldnerKnochengewebe
GallyasAlzheimer Plaque Neurohistologie
Bodian, BielschowskyNeurofibrillen Neurohistologie
Klüver Barrera, Luxol Fast BlueMarkscheiden Neurohistologie
GiemsaParasiten
Rubeansäure-Färbung, RhodaninKupfer
Orcein, ViktoriablauHepatitis B-Antigen
ToluidinblauMastzellen
Warthin StarrySpirochäten
Gram, Brown BrennBakterien
GrocottPilze (Soor, Candida sp.)
Diastase-PAS: immer im Vergleich mit PAS!
Glycogen
SFOGProteinablagerungen
FärbungSubstanz
Weitere wichtige Nachweise
Esther Osterwalder / 2010 62
Färbungen zuordnen: Reaktionsprinzipien (3)
1.Chemisches Färbeprinzip: Die Reaktion zwischen Farbstoff und Substratverläuft nach den Gesetzmässigkeiten der chemischen Bindung. Die Färbe-ergebnisse lassen sich durch eine chemische Reaktionsgleichungcharakterisieren = Histochemie.z.B. PAS, Berlinerblau, (Enzymnachweise = Enzymhistochemie)
z.B Nachweis von dreiwertigem Eisen mit der Berlinerblau-Reaktion:
3 K4 [Fe(CN)6] + 4 FeCl3 4 Fe [Fe(CN6)] 3 + 12 KClBerlinerblau
Gelbes Blutlaugensalz = Ferro-zyankalium = Kaliumhexazyanoferrat II (Fe II)
32
Esther Osterwalder / 2010 63
PAS Reaktion periodic acid Schiff s reaction
1. Hydrolyse mit Perjodsäure HJO4 :das Zuckermolekül öffnet sich unter Bildung zweier dichtgelagerter Aldehydgruppen und H2O
2. Anlagerung des Schiff schen Reagens (Fuchsinsulfit) an diese Aldehyd-Gruppen
+ F (SO2H)2
FFuchsinsulfit
kationischer Farbstoff
Aldehydfuchsin
Reaktionsprinzipien
Esther Osterwalder / 2010 64
PAS positive Substanzen/StrukturenChitinStärkeZellulose (Pollen)DextraneGlycogen (PAS + D-PAS zusammen)GlycoproteineSialomuzine (Sialo- = Speichel )BasalmembranSchleimbildende Drüsen, bzw. deren SekreteLeukozyten, Plasmazellen
Reaktionsprinzipien
33
Esther Osterwalder / 2010 65
Chemische Färbeprinzipien nennt man in der Histologie meist Histochemie .
Histochemische Nachweise lassen sich nicht mehr entfärben, da das Produkt auf einer chemischer Reaktion beruht.
Verunreinigungen können bei histochemischenNachweisen zu Fehlreaktionen führen, besondersbei den Enzymnachweisen.
Merke
Reaktionsprinzipien
Esther Osterwalder / 2010 66
2. Physikalisches Färbeprinzip
Löslichkeit eines Farbstoffes in verschiedenen Medien (z.B. Ethanol / Fett)
z.B. Fettnachweis mit Sudan III, Ölrot
Reaktionsprinzipien
34
Esther Osterwalder / 2010 67
3. Physikalisch-chemisches oder physiko-chemisches Färbeprinzip
Elektroabsorption: Coulomb
Dispersität: Farbstoffgrösse + Zeit spielen eine grosse Rollez.B. bei den Trichromfärbungen
Grenzflächenadsorption: Adsorption ist ein physikalischer Prozess Aktivkohle hält Farbstoff aufgrundder aufgerauten Oberfläche fest. Meist van der Waal involviert.
z.B. HE, VG, EVG, AP, Gic, CAB, Kongo
Reaktionsprinzipien
Esther Osterwalder / 2010 68
Als Adsorption (lat.: adsorptio bzw. adsorbere = (an-)saugen) bezeichnet man die Anreicherung von Stoffen aus Gasen oder Flüssigkeiten an der Oberfläche eines Festkörpers, allgemeiner an der Grenzfläche zwischen zwei Phasen.Adsorption unterscheidet sich von der Absorption, bei der die Stoffe in das Innere eines Festkörpers oder einer Flüssigkeit eindringen. Der Oberbegriff für diese Anreicherungsvorgänge lautet Sorption.Adsorbieren zwei oder mehr Spezies an eine Oberfläche, nennt man dies Koadsorption. Dies spielt vor allem bei Katalysatoreneine wichtige Rolle, bei denen die verschiedenen Atomsorten auf einer Oberfläche adsorbiert werden und dort reagieren.
Abb. a) Adsorbens, b) Adsorbat an der Grenzfläche, c) Gasphase bzw. Lösung mit Adsorptiv
Im allgemeinen Sinn ist Adsorption ein physikalischer Prozess.
Für Interessierte
35
Esther Osterwalder / 2010 69
Färbungen zuordnen: Trichromfärbungen
Esther Osterwalder / 2010 70
VG CAB - Goldner - SFOG
Trichromfärbungen
36
Esther Osterwalder / 2010 71
Alle Variationen haben gemeinsam:
1 Farblack für die Kernfärbung
mindestens 2 anionische Farbstoffe (oft simultan angeboten)
davon
Trichromfärbungen
Esther Osterwalder / 2010 72
1x feindispers
zB. Ponceau de Xylidine, Pikrinsäure, Orange G, Chromotrop
davon:
1x grobdispers
zB. Säurefuchsin, Methylblau, Lichtgrün, Anilinblau
Trichromfärbungen
37
Esther Osterwalder / 2010 73
Proteindepots rotSFOGNierenerkrankung
gelbVG / EVGMuskulatur; glatte, Herzund Skelett
Blau-,Rot- und Violetttöne
GiemsaKnochenmark
orange + grünGoldnerKnochen
grünGoldnerFaserknorpel
dunkelviolettEl / EVGKnorpel elastisch
dunkelviolettEl / EVGBindegewebe elastisch
blaurot
CABVG / EVG
Bindegewebe kollagen
dargestelltNachweisBezeichnung
Welche Strukturen werden angefärbt ausser den Zellkernen?
VG CAB - Goldner - SFOGTrichromfärbungen
keine Trichrom-färbung!
Esther Osterwalder / 2010 74
Aussagen zu den Fasern im Bindegewebe:
Kollagene Fasern: Anfärbung mit grobdispersen anionischen Farbstoffen wegen der basischen Aminosäuren des Kollagens.
Retikuläre Fasern: Schwach anfärbbar mit anionischen Farbstoffen.
Elastische FasernDas Protein Elastin weist zum Kollagen eindeutig weniger basische Aminosäuren auf, dagegen die seltene saure AS Desmosin. Der saure Charakter der elastischen Fasern erlaubt die Anfärbung mit kationischen Farbstoffen zB. Orcein, Resorcin-Fuchsin
Trichromfärbungen
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Esther Osterwalder / 2010 75
Spezialfärbungen werden zur Darstellung bestimmter Strukturen durchgeführt. Sie bestehen aus einer geeigneten Farbstoff- oder Reaktionslösung und einer Gegenfärbung.(Kernfärbung oder Hintergrundfärbung erhöhen den Farb-kontrast)
SpezialfärbungenFärbungen zuordnen:
zB: Ziehl NeelsenSilberimprägnationen
Esther Osterwalder / 2010 76
Schematische Darstellung der Zellwand von Mykobakterienohne Berücksichtigung Speziesspezifischer Unterschiede.
Beachte: M tuberculosis hat keine Kapsel
Zellwandaufbau der Mykobakterien
Ziehl NeelsenZN
Spezialfärbungen
39
Esther Osterwalder / 2010 77
Mykolsäuren sind Bestandteile der säurefesten Zellwand. Durch ihre Einlagerung werden die Zellen stark hydrophob. Sie besitzen lange Alkylketten und sind über Arabinogalaktanan das Murein gebunden, das ein Peptidoglykan ist.
Ziehl NeelsenZN
Spezialfärbungen
basisches Fuchsin
Esther Osterwalder / 2010 78
Versilberung/Silberimprägnation
meist zur Darstellung von Aldehyden
Argentaffine oder argyrophile Stoffe lassen sich mit Silber imprägnieren .
- Argentaffine Strukturen können ohneVorbehandlung metallisches Silber ausSilbernitatlösungen reduzieren. Diese lagern sich dann dort ab. (Kalk)
- Argyrophile Strukturen benötigen eineoxidierende Vorbehandlung, um dieselbeWirkung zu erzielen. (retikuläre Fasern)
z.B. von Kossa Gomöri
Spezialfärbungen
40
Esther Osterwalder / 2010 79
Versilberung/Silberimprägnation
Silbersalze werden durch starke Laugen in Silberoxyd umgewandelt, das dann als schwarzer Niederschlag ausfällt.
2 AgNO3 + 2 NaOH Ag2O + 2 NaNO3 + H2OSilbernitrat Silberoxid
Durch Zugabe von Ammoniak entsteht Diaminsilberoxid, das sich durch Formalin reduzieren lässt.
AgO + 4 NH3 (Ag[NH3]2)2ODiaminsilberoxid
Dabei entsteht metallisches Silber als Niederschlag,Ammoniak und Ameisensäure.
(Ag[NH3]2)2O + HCHO Ag + 4 NH3 + HCOOH
Formaldehyd Ammoniakmetallisches Silber
Ameisensäure
Spezialfärbungen
Esther Osterwalder / 2010 80
1. Kaliumpermanganat (Oxidationsmittel) oxidiertEthanolgruppen der Glykoproteine zu Aldehyden
2. Eisenalaun imprägniert die Strukturen
3. Silberionen lagern sich an Aldehydgruppen
4. Formalin wirkt als Entwickler
(5. Mit Goldchlorid wird das Silber schwarz getönt)
6. Mit Na-thiosulfat wird fixiert (entfernen des noch ionisierten Ag)
Prinzip von GomöriSpezialfärbungen Versilberung/Silberimprägnation
41
Esther Osterwalder / 2010 81
Färbungen zuordnen:
meist maschinell gefärbt
HE Übersichtsfärbung für Kerne + Zytoplasma
VG Übersichtsfärbung für kollagenes Bindegewebe + Muskulatur; oft durch EVG ersetzt
PAS neutrale Zucker sind PAS-positiv (ungenaue Aussage)inkl. *D-PAS beim indirekten Glykogennachweis
Alcianblau (Ab) saure Muzine der Becherzellen
Ab-PAS saure + neutrale Muzine der Becherzellenunterscheiden
Routinefärbungen
Esther Osterwalder / 2010 82
1. Schnitt: normaler PAS-Nachweis + werden positiv pink2. Schnitt: zuerst mit Diastase das Glykogen verdauen, dann PAS ausführen
Glykogen ist verdaut; nur noch wird positiv pink
Diastase-behandlung
PAS nach Diastase-behandlung = D-PAS
= hier war Glycogenvorhanden
*D-PAS indirekter Glykogennachweis beim z.B. primären Leberzellkarzinom
Routinefärbungen
42
Esther Osterwalder / 2010 83
D-PASPAS
Parotistumor
Routinefärbungen
Esther Osterwalder / 2010 84
Routinefärbungen Alcianblau ist ein kationischer Kupferphthalocyanin-farbstoff und verbindet sich mit negativ geladenen Zellbestandteilen wie z.B. saure GAG.
Meist in Kombination mit PAS als Ab-PAS.
Ab-PAS
Ab-PAS
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Esther Osterwalder / 2010 85
Mögliche Darstellung von Geweben
blauLFBMyelin
dunkelviolettblauNisslNissl-Schollen
schwarzSilberimprägnationNervenzellen
gelbVG / EVGMuskulatur
Blau-,Rot- und VioletttöneGiemsaKnochenmark
orange + grünGoldnerKnochen
grünGoldnerFaserknorpel
dunkelviolettEVGKnorpel elastisch
violettblauHEKnorpel hyalin
orangerotSudan III /OelrotFettgewebe
schwarzGomöriBindegewebe retikulär
dunkelviolettEl / EVGBindegewebe elastisch
blaurotrot
CABVG / EVGSirius
Bindegewebe kollagen
pinkschwarz
PASSilberimprägnation
Basalmembran
pink/violettblauPAS / AB-PASBecherzellen/Drüsensekret
blaurot
HEHE
ZellkerneZytoplasma
dargestelltNachweisBezeichnung
Histologie