Unterscheidung von vakzinierten und infiziertenSchweinebeständen durch Salmonella-
spezifische Antikörper mittelsSALMOTYPE Pig STM-WCE ELISA
Jörg Lehmann1, Thomas Lindner2, Thomas Kramer1, Matthias Naumannund Jörg Gabert1
1 Labor Diagnostik GmbH Leipzig, Leipzig; 2 Impfstoffwerk Dessau-Tornau GmbH,Rosslau; 3 Qualitype AG, Dresden
Inaktivierte Vakzine
Vorteile: - sicher - hohe Ig-Titer
Nachteile: - schwache zelluläre Immunität - kurze Wirksamkeitsdauer - eingeschränkter Schutz (Stamm-abhängig) - wiederholte Applikation - hohe Dosen
JL 09/2003
Attenuierte Lebend-Vakzine
Vorteile:- starke zelluläre Immunität- lange Wirksamkeitsdauer- breiter Schutz
Nachteile:- lebende Bakterien- Differenzierung zwischen Impf- und Wildtyp-Stamm ist erforderlich
... Salmonellenproblem???Wie wär‘s mit Impfen?!
Problem:
Erkennung einer möglichen Infektion im geimpften Bestand
2 Lösungsansätze:
Diskriminierung zwischen Salmonella-Impfstamm und -Wildstamm
(z.B. Markervakzine)
Exaktes serologisches Monitoring der Immun-antwort nach Impfung
(z.B. Salmotype Pig STM-WCE)
JL 09/2003
Testprinzip:
Substrat (H2O2) + Chromogen (TMB)
Enzym (POD)
Detektions-Ak-Enzym-Konjugat (z.B. Anti-Schwein-IgA – POD)
Testserum
Salmonella-WCE-Ag
JL 09/2003
Basisvorausetzungen:
• Tiergruppen-spezifische Cut-off-Werte(SPF-Schweine, Ferkel, Läufer/Mastschweine, Zucht-sauen/-eber) ⇒ anwendungsspezifische Untersuchung
• große Antigenbreite ⇒ höhere analytische Sensitivität, bei ausreichend hoher Spezifität
• Erfassung der Immunglobulinklasse der Anti-Salmonellen-Antikörper
• Berücksichtigung des Antikörpertiters (Titration jeder Probe) ⇒ präziser als Einpunktbestimmung
JL 09/2003
Auswertung:
Referenzstandard-Methode ⇒ Software SalmoSoft
JL 09/2003
1. Immunisierungs-/Challenge-Experimentmit SPF-Schweinen
Experimentelles Design:
Kontrollgruppe
Geimpfte GruppeGeimpfte Gruppe
Kontrollgruppe
Vor Challenge, 42. LT(Tag 21 post vacc.)
Nach Challenge, 75. LT(Tag 7/12 post chall.)
4 Versuchsgruppen:
JL 09/2003
Ergebnis:
1. Immunisierungs-/Challenge-Experimentmit SPF-Schweinen
JL 09/2003Statistische Prüfung mittels u-Test nach Mann u. Whitney
Erkennung STm-infizierter SPF-Schweine über die Detektion antigenspezifischer IgA-Antikörper
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
1
10
100
1000
10000
Kontr
olle
geim
pft
Kontro
lle
geim
pft
vor Challenge nach Challenge
Cut-off
P=0.001P=0.005
P=0.001P=0.005
2. Immunisierungs-Feldexperiment
Experimentelles Design:
Kontrollgruppe
(3 Blutungszeitpunkte)
Geimpfte Gruppe
• Nach 1. Impfung• Nach Boosterung
(8 Blutungszeitpunkte)
2 Versuchsgruppen:
JL 09/2003
2. Immunisierungs-Feldexperiment
Ergebnis:
JL 09/2003
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
102
103
104
105
IgM IgG IgA
Tag 0
Kontrollgruppe geimpfte Gruppe
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
102
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104
105
IgM IgG IgA
Tag 4 p. vacc.
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
102
103
104
105
IgM IgG IgA
Tag 7 p. vacc.
1. Imm
un
isierun
g
Ant
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per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
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IgM IgG IgA
Tag 9 p.vacc.
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
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103
104
105
IgM IgG IgA
Tag 11 p.vacc.
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
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104
105
IgM IgG IgA
Tag 14 p.vacc.
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
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105
IgM IgG IgA
Tag 21 p.vacc.
Ant
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per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
102
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IgM IgG IgA
Tag 2 p. 2. vacc.
2. Imm
un
isierun
g
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
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IgM IgG IgA
Tag 4 p.2. vacc.
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
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103
104
105
IgM IgG IgA
Tag 7 p.2. vacc.
Ant
ikör
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Akt
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100
101
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104
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IgM IgG IgA
Tag 9 p.2. vacc.
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ikör
per-
Akt
ivitä
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100
101
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IgM IgG IgA
Tag 11 p.2. vacc.
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ikör
per-
Akt
ivitä
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IgM IgG IgA
Tag 14 p.2. vacc.
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ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
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101
102
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IgM IgG IgA
Tag 21 p.2. vacc.
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
.U.]
100
101
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IgM IgG IgA
Tag 28 p.2. vacc.
Ant
ikör
per-
Akt
ivitä
t [E
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101
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IgM IgG IgA
Tag 43
Ant
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per-
Akt
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t [E
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IgM IgG IgA
Tag 42 p.2. vacc.
Ant
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Akt
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IgM IgG IgA
Tag 64
Zusammenfassung:
JL 09/2003
• Anwendung des Salmotype Pig STM-WCE gewährleistet eine detaillierte und präzise Erfassung der Immunantwort gegen Salmonella Typhimurium nach Impfung und Infektion
• Identifikation frischer Salmonellen-Infektionen über spezifische IgM-Antikörper
• Identifikation akuter Salmonellen-Infektionen über spezifische IgA-Antikörper bei geimpften und ungeimpften Tieren
• Salmonella-spezifischer IgG-Titer bleibt nach Immunisierung mit Lebendvakzine über längeren Zeitraum erhöht