[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
Die nächste Generation der N-Glykan-Probenvorbereitung und -Analyse
3
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE] [LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
ANALYSE ABGESPALTENER
GLYKANE
BESTIMMUNG DER MONOSACCHARID-
ZUSAMMENSETZUNG
Kom
plex
ität d
er M
etho
dik
Erhöhung des Informationsgehalts
ANALYSE VON UNTEREINHEITEN
GLYKOPEPTID-MAPPING
ANALYSE VON INTAKTEN PROTEINEN
Kombination komplementärer Methoden zur Optimierung der Glykan-AnalyseWaters bietet komplette, Workflow-basierte Ansätze für die Analyse von Glykoproteinen auf allen Strukturebenen.
¡ Glykoprotein-Profiling ¡ Charakterisierung und routinemäßige Überprüfung
¡ Analyse von Untereinheiten abgespaltener Glykane
¡ Glykopeptid-Mapping ¡ Bestimmung der Monosaccharid-Zusammensetzung
2
Wie wäre es, wenn… Ihre N-Glykan-Analytik einfacher und
vom Ergebnis her empfindlicher liefe?
Endlich ein intelligenter Workflow ohne Kompromisse!
5
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
Workflow zur Analyse von intakten Proteinen
INJEKTION FÜR DIE LC-ANALYSE
MassPREP™ Entsalzungskartusche oder ACQUITY UPLC® BEH C4, 300Å Säule,
MassPREP Proteinstandardgemisch, und Intact Mass Analysis Kit
ANALYSE PER LCMIT TUV-DETEKTOR
ACQUITY UPLC Systeme
BESTÄTIGUNG DER MASSE MIT QTof MSXevo® G2-XS QTof MSSYNAPT® G2-Si HDMS
GLYKOPROTEIN
Intact mAb Mass Check Standard
Workflow zur Analyse von Untereinheiten
Workflow zum Glykopeptid-Mapping
Workflow zur Bestimmung der Monosaccharid-Zusammensetzung
INJEKTION FÜR DIE LC-ANALYSE
ACQUITY UPLC Protein BEH C4, 300Å Säule
INJEKTION FÜR DIE LC-ANALYSE
Umkehrphasen- oder Waters BEH Amide Säule
MARKIERUNG MIT EINEM FLUOROPHOR
ANALYSE PER LCMIT UV-DETEKTORAlliance® HPLC oder
ACQUITY UPLC
ANALYSE PER LC MIT TUV-DETEKTOR
ACQUITY UPLC Systeme
Injektion für die LC-Analyse
ACQUITY UPLC BEH C18, 130Å, 1,7-μm,
2,1 x 100 mm Säule
IdeS ENZYMATISCHER VERDAU MIT OPTIONALER REDUKTION
REDUKTION, ALKYLIERUNG UND ENZYMVERDAU
Glykosylierte und nicht-glykosylierte Peptidfragmente
FREISETZUNG DER MONOSACCHARIDE
saure Hydrolyse
GLYKOPROTEIN
GLYKOPROTEIN
GLYKOPROTEIN
Intact mAb Mass Check Standard
Intact mAb Mass Check Standard
3
5
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
DATENVERARBEITUNGUNIFI® und
MassLynx® SoftwareMasse
147700 148000 148300 148600 148900 149200
F0G/F0
G
F1G/F0
G
F2G/F0
G ,F1G/F1
G
F2G/F1
G
F2G/F2
G
Dekonvuliertes ESI-TOF MS-Spektrum
m/z2000 2500 3000 3500
+51
+48+54
ESI-TOF MS-Spektrum eines mAb
BESTÄTIGUNG DER MASSE MIT QTof MS
Xevo G2-XS QTof MS SYNAPT G2-Si HDMS
PEPTID-MAPPING-ANALYSE MIT QTof MS
Xevo G2-XS QTof SYNAPT G2-Si HDMS
LC-FLR-Analyse
Alliance HPLC oderACQUITY UPLC
DATENVERARBEITUNGMassLynx Software
DATENVERARBEITUNGMassLynx und UNIFI Software
DATENVERARBEITUNGEmpower® 3 Software
0,00
0,06
0,12
0,18
0,24
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 min
A21
4
Fc/2 +Glykane
LC Fd’
50
45
40
35
30
25
20
EU
15
10
5
0
10 15 20 25 30 min-5
1
2
3 4 5
6
1. N-Acetylglucosamin (GlcNAc)2. N-Acetylgalactosamin (GalNAc)3. Galactose (Gal)4. Mannose (Man)5. Glucose (Glc)6. Fucose (Fuc).
A
B
5 10 510 20 25 30 35 40 45 min
Glykopeptide
MS-BPI
6-fach vergrößert
4-fach vergrößert
UV 280 nm
Ergebnisse
Ergebnisse
Ergebnisse
Ergebnisse
RapiFluor-MS markierte N-Glykane,
gemessen auf einem ACQUITY UPLC
H-Class Bio-System mit FLR-Detektion
und dem ACQUITY QDa Detektor – für
die Bestätigung bekannter Strukturen
und massengenaue Daten für nicht
zugeordnete Peaks.
0
240
480
min10 15 20 25 30
Inte
nsitä
t
0
1,6x106
3,2x106
min10 15 20 25 30
EU
MS
FLR
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
ROUTINEMÄSSIGE ÜBERPRÜFUNG
Entdecken Sie Ihre Möglichkeiten
Aufgrund der hohen Ionisierungseffizienz und dank der höheren Protonenaffinität von RapiFluor-MS ist die
Massendetektion von Glykanen mit dem ACQUITY QDa Detektor möglich.
¡ Bisher unerreichte empfindliche FLR- und MS-Detektion.
¡ FLR-Peaks können jetzt massenspektrometrisch bestätigt werden.
¡ Reduziert die Chromatographie-Analysezeiten beim gezielten MS-Glykan-Profiling für eine schnelle
Prozessentwicklung.
¡ Ist dank Empower 3 Software leicht in bestehende GMP-konforme UPLC-Workflows integrierbar.
Glykan-Überprüfung mit ACQUITY UPLC H-Class Bio-System mit FLR- und ACQUITY QDa Detektion
13
6
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
Entdecken Sie den GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Kit
Waters als Innovationsführer für die Analytik von Biotherapeutika hat den Workflow für die Analyse abgespaltener
N-Glykane neu erfunden. Unser neues Reagenz, RapiFluor-MS™, ermöglicht erheblich empfindlichere MS-Messungen.
Deglykosylierung und Markierung laufen innerhalb von Minuten ab.
Sie müssen sich nun nicht mehr zwischen schneller Markierung und MS-Empfindlichkeit entscheiden. Keine
arbeitsintensiven, fehleranfälligen Verfahren mehr,
keine Kompromisse zwischen Schnelligkeit und Empfindlichkeit, sondern höhere Verlässlichkeit der gewonnenen Daten.
FLR-QUANTIFIZIERUNGMS-LEISTUNGSCHNELLIGKEIT/DURCHSATZ
Gehen Sie mit Waters neue Wege bei der N-Glykan-Analytik.
7
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
DATENVERARBEITUNG
UNIFI, MassLynx und Empower Software
GLYKOPROTEIN
ABGESPALTENE N-GLYKANE
ANALYSE PER LCMIT FLR-DETEKTOR
Alliance HPLC oderACQUITY UPLC
CHARAKTERISIERUNG ODER MASSENBESTÄTIGUNG
ACQUITY® QDa® Detektor Xevo G2-XS QTof MSSYNAPT G2-Si HDMS
0,0E+0
1,2E+6
10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min
0,0E+0
1,2E+6
10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min
MS
FLR
Ergebnisse
ABGESPALTENE N-GLYKANE NACH
DEGLYKOSYLIERUNG
GlycoWorks™ Rapid PNGase F plus Puffer und
Tensid RapiGest™ SF
MARKIERTE GLYKANE
Markierung mit GlycoWorks
RapiFluor-MS
AUFGEREINIGTE GLYKANE
GlycoWorks HILIC µElutionsplatte oder
-kartuschen
INJEKTION FÜR DIE LC-ANALYSE
Glycan BEH Amide Säule, Glykan Performance Standard und
Dextran-Kalibrationsleiter
GLYKOPROTEIN
Intact mAb Mass Check Standard
Was steckt dahinter?
Der hohe Informationsgehalt einer N-Glykan-Analytik erschloss
sich bisher nur über aufwändige Methoden der Probenvorbereitung.
Nachdem die N-Glykane mithilfe von PNGase F abgespalten sind,
werden diese markiert, im Trennung und Detektion zu ermöglichen.
Mit dem neuen Protokoll von Waters verfügen Sie nun über einen
vielseitigen Workflow für die:
¡ Glykan-Identifizierung ¡ Glykan-Strukturanalyse
¡ Glykan-Monitoring
Den wissenschaftlichen Hintergrund des NEUEN GlycoWorks RapiFluor-MS Reagenz erläutert ein Video unter waters.com/SeeTheScience.
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
ABGESPALTENE N-GLYKANE
GlycoWorks Rapid PNGase F plus Puffer und Tensid
RapiGest SF
MARKIERTE GLYKANE
Markierung mit GlycoWorks RapiFluor-MS
GLYKOPROTEIN
Intact mAb Mass Check Standard
AUFGEREINIGTE GLYKANE
GlycoWorks HILIC µElutionsplatte oder
-kartuschen
Wäre Ihnen mit einer schnellen und einfachen Probenvorbereitung für N-Glykane geholfen?
¡ N-Glykan-Proben schnell und einfach aufgearbeitet
¡ Minimierung von Fehleranfälligkeit und Probenverlust
¡ Einfache Handhabung und einfacher Methodentransfer von Labor zu Labor
3 SCHRITTE, 30 MINUTEN
< 15 Minuten
10 Minuten
5 Minuten
SCHRITT 1 SCHRITT 2 SCHRITT 3
Sehen Sie sich ein 2-minütiges Demo-Video zum RapiFluor-MS N-Glykan-Kit an.
www.waters.com/RapiFluorMS
8
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
Wäre Ihnen mit einer bisher unerreichten FLR- und MS-Empfindlichkeit geholfen?
¡ Vergleichbar empfindliche FLD- und MS-Signale ermöglichen zuverlässigere Zuordnung und Identifizierung bisher nicht erkannter Peaks
¡ Entscheidungen können schneller gefällt werden
¡ Leichtere Identifizierung niedrig konzentrierter N-Glykane
BISHER UNERREICHTE EMPFINDLICHKEIT
14-fach erhöhtes Fluoreszenz- und 160-fach erhöhtes MS-Signal im Vergleich zu herkömmlichen Markern (2-AB und Procainamid). 2-fach erhöhtes Fluoreszenz- und 1.000-fach erhöhtes MS-Signal im Vergleich zum Instant Labeling.
*Basierend auf veröffentlichten theoretischen Werten.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rel
ativ
e Si
gnal
stär
ke (%
)
52,5
7,00,1 0,6
30,0*
7,0*
Fluoreszenz MS (Basispeakintensität, BPI)
2X
1000X
3X
160X14X
mit Instant AB markiert
mit RapiFluor-MS markiert
mit 2-AB markiert
mit Procainamid markiert
NH
O
NH
NNH
O
N
Glykan
NH
O
NHGlycan
O
NH2
NHGlycan
NH2O
NHGlycan
O
NHN
Proc
aina
mid*
RapiFluor
-MS
2-AB
Instan
t AB
RapiFluor
-MS
2-AB
Instan
t AB
Proc
aina
mid*
Sehen Sie, welche Möglichkeiten sich für Ihre täglichen Analysen bieten.
www.waters.com/XevoG2XS
9
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
0,0E+0
1,2E+6
10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min
0,0E+0
1,2E+6
10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min
MS
FLR
Die erhöhte Ionisierungseffizienz von RapiFluor-MS ermöglicht die Fluoreszenzquantifizierung in Kombination mit Massendetektion mittels ACQUITY QDa Detektor.
Wäre Ihnen mit massenspektrometrischer Bestätigung Ihrer N-Glykan-Analytik geholfen?
¡ Zuverlässigere Ergebnisse mit routinemäßiger Massendetektion
¡ Rasch verfügbare Informationen zu prozessbedingten Veränderungen
¡ Schnelle Klärung von Problemen bei Methodenentwicklung und -transfer
VERTRAUEN
N-Glykan-Profiling eines monoklonalen Antikörpers
Sehen Sie in einem 1-minütigen Video, wie einfach Massendetektion sein kann
www.waters.com/QDa
10
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
Komplettkits für die Probenvorbereitung
Beschreibung Teilenr.
GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Starterkit
Inhalt des Kits: GlycoWorks Deglykosylierungsmodul, GlycoWorks Markiermodul, GlycoWorks Aufarbeitungsmodul, GlycoWorks Probenahmemodul, ACQUITY UPLC Glycan BEH Amide, 1,7-μm, 2,1 x 150 Säule, Mobile Phase-Konzentrat: Ammoniumformiat
176003635
GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Kit
Inhalt des Kits: GlycoWorks Deglykosylierungsmodul, GlycoWorks Markiermodul, GlycoWorks Aufarbeitungsmodul, GlycoWorks Probenahmemodul
176003606
Bestellinformationen
Standards und Zubehör
Beschreibung Menge Teilenr.
RapiFluor-MS Dextran Kalibrierleiter 50 μg/Vial 186007982
RapiFluor-MS Glykan-Leistungsteststandard 400 pmol gesamt/Vial 186007983
Ammoniumformiatlösung zur Glykan-Analyse — 186007081
Einlegeböden für die Vakuumstation — 186007986
Einlegeböden für Überdruckstation für den Einsatz mit GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Kit
— 186007987
176003635 176003606
Die neue Methodik über Mittag schnell erklärt
Möchten Sie sehen, wie der RapiFluor-MS N-Glykan-Kit und der ACQUITY QDa Massendetektor Ihre Glykan-Analyse verbessern können? Wir zeigen Ihnen gern, wie es geht: in einem „Lunchtime“-Seminar bei Ihnen. Wenn Sie mehr über das „Lunch- & Label“-Seminar erfahren oder sich dazu anmelden möchten, besuchen Sie uns unter waters.com/GlycansForLunch.
„Lunch- & Label“-Seminar
11
12
5,5 10,0 15,0 20,0 25,0 min
Glykane aus 10 µg ProteinHerkömmlicher Marker 2-AB
1,5 Tage für die Probenvorbereitung
RapiFluor-MSGlykane aus 0,1 μg Protein < 1 Stunde für die Probenvorbereitung
1: TOF MS ES+BPI
6.93e6
1: TOF MS ES+BPI
6.93e6
z/m 0061008
FA2G2Ga11130,9423, 2+
Fucose
GlcNAc
Mannose
Galactose
O NH
ON
O
NHN
N
O
O
RapidFluoreszenz
MS
NHS-Carbamat-Rapid-Tagging-Gruppe Chinolinyl-Fluorophor
Markiert mit tertiärem Amin
Die nächste Generation der Glykan-Markierung
Basierend auf dem Expertenwissen von Waters in der
schnellen Fluoreszenz-Markierung von Aminosäuren wurde
RapiFluor-MS für die N-Glykan-Analytik entwickelt. In 5 Minuten
markiert RapiFluor-MS enzymatisch abgespaltene
Glykosytamine.
¡ Schnelle Markierung
¡ Effiziente Fluoreszenz
¡ Bisher unerreicht hohes MS-Signal
[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]
Identifizieren Sie niedrig konzentrierte N-Glykane zuverlässiger
RapiFluor-MS in Kombination mit den erstklassigen Massenspektrometern Xevo G2-XS
QTof oder SYNAPT G2-Si HDMS ermöglicht bisher unerreicht hohe MS- und MS/
MS-Empfindlichkeiten.
Glykan-Charakterisierung mittels UPLC® FLR-Detektion im Xevo G2-XS QTof Massenspektrometer
Vergleich von LC-MS-Chromatogrammen von mit 2AB und mit RapiFluor-MS markierten N-Glykanen des gleichen monoklonalen Antikörpers. Bei der mit RapiFluor-MS markierten Probe ist ein 100-fach erhöhtes ESI+ MS-Signal zu beobachten. Ein MS-Spektrum (siehe Abbildung) zeigt das addierte Spektrum für ein gering konzentriertes Glykan in der Probe.
CHARAKTERISIERUNG
RapiFluor-MS Reagenz
GlycoWorks RapiFluor-MS
Waters, T he Science of What’s Possible, ACQUITY UPLC, UPLC, Alliance, ACQUITY, QDa, UNIFI, SYNAPT, Empower, Xevo, MassPREP und MassLynx sind eingetragene Marken der Waters Corporation. RapiFluor-MS, GlycoWorks und RapiGest sind eingetragene Marken der Waters Corporation.
©2015 Waters Corporation. Gedruckt in den USA.Februar 2015 720005271DE KP-SIG
www.waters.com/Glykane
VERTRIEBSNIEDERLASSUNGEN:
Österreich +43 1 877 18 07
Australien +61 2 9933 1777
Belgien und Luxemburg +32 2 726 1000
Brasilien +55 11 4134 3788
Kanada +1 800 252 4752
China +86 21 6156 2666
Tschechische Republik +420 2 617 11384
Dänemark +45 46 59 8080
Finnland +358 9 5659 6288
Frankreich +33 1 30 48 72 00
Deutschland +49 6196 400 600
Hongkong +852 2964 1800
Ungarn +36 1 350 5086
Indien +91 080 49292200 03
Irland +353 1 448 1500
Israel +9723 3731391
Italien +39 02 265 0983
Japan +81 3 3471 7191
Republik Korea +82 2 6300 9200
Mexiko +52 55 52 00 1860
Niederlande +31 76 508 7200
Norwegen +47 6 384 6050
Polen +48 22 101 5900
Portugal +351 21 893 61 77
Puerto Rico +1 787 747 8445
Russland/GUS +7 495 727 4490 / 336 7000
Singapur +65 6593 7100
Spanien +34 93 600 9300
Schweden +46 8 555 115 00
Schweiz +41 56 676 7000
Taiwan +886 2 2508 5500
UAE 971 4 214 62 38
Großbritannien +44 208 238 6100
USA +1 800 252 4752
Waters Corporation 34 Maple Street Milford, MA 01757, USA. Tel.: +1 508 478 2000 Fax: +1 508 872 1990 www.waters.com