W. Schneider1 · S. Kellermann1 · H. Nenning2 · D.R.Thal1 · R. Schober1
1 Abteilung für Neuropathologie, Institut für Pathologie, Universität Leipzig2 Institut für Pathologie, Universität Leipzig
ZytophotometrischeUntersuchungenan RezidivgliomenKorrelation der DNA-Parametermit dem WHO-Grad, dem Proliferationsindexund der Länge der rezidivfreien Intervalle
lassen sich beispielsweise kaum früh-zeitige Hinweise auf das Risiko einermalignen Progression von primär nied-rigmalignen Astrozytomen erhalten[36]. Zahlreiche Studien mit molekular-genetischer und anderer Methodik be-schäftigen sich daher mit dem Problem,neue Parameter zu ermitteln, die vali-dere Aussagen über die zu erwartendeTumorprogression und damit die Pro-gnose zulassen. Eine bereits etablierteMethode ist die Bestimmung der Zell-proliferation mittels des proliferations-assoziierten Proteins Ki-67. Im statisti-schen Mittel korreliert der Proliferati-onsindex (Ki-67/MIB1 LI) bei glialenebenso wie bei anderen Tumoren gutmit dem histopathologischen WHO-Grad [17, 24, 25].
Zunehmend als prognostisch rele-vant erkannt worden ist auch der zyto-metrisch bestimmbare DNA-Gehalt derTumorzellen [2]. Solche Untersuchun-gen können sowohl an frisch- als auchan paraffineingebettetem Material durch-geführt werden, wobei die Ergebnissevergleichbar sind [4, 11]. Während überUntersuchungen mittels DNA-Zyto-photometrie an Archivmaterial vonHirntumoren bereits mehrfach berich-
Das morphologische Grading ent-sprechend der WHO-Klassifikation [18]ist für die prognostische Bewertungglialer Tumoren als Standard anzuse-hen, jedoch kann die Grenzziehungzwischen niedrig- und hochmalignenLäsionen schwierig sein [8, 22, 33]. Da-bei spielt zum einen die Subjektivitätbei der Beurteilung von histologischenMerkmalen eine Rolle, zum anderen dieregionale Tumorheterogenität bzw. dasVorliegen unterschiedlich repräsentati-ver Proben. Die kontroverse Diskussionzu diesem Thema ist immer noch aktu-ell und hält bis in die Gegenwart an.Dies zeigt sich auch in jüngsten Arbei-ten zu diesem Thema [19]. Anhand derhistopathologischen Kriterien allein
Prof. Dr. R. SchoberAbteilung für Neuropathologie, Institut für
Pathologie, Universität Leipzig, Liebigstraße 26,
D-04103 Leipzig&/fn-block:&bdy:
Parameter liefert insbesondere bei gleich-
bleibendem WHO-Grad zusätzliche Informa-
tionen über die zunehmende genetische
Instabilität des Tumors, welche wie die
zunehmende Proliferationsaktivität für die
weitere Tumorprogression von Bedeutung
ist.
Schlüsselwörter
Rezidivgliome · WHO-Klassifikation ·
Statische DNA-Zytometrie ·
Proliferationsindex · Rezidivfreies Intervall
W. Schneider · S. Kellermann · H. Nenning
D.R.Thal · R. Schober
Cytophotometric investigations inrecurrent gliomas: correlation of DNA-parameters with WHO-grade, prolifera-tion index and recurrence-free interval
Summary
DNA-cytophotometry is one of the methods
that may contribute to a more precise
evaluation of the biological behaviour of
tumours in addition to the WHO-classifica-
tion. In this study 121 tumour specimens of
50 patients suffering from gliomas with one
or up to three recurrencies were investiga-
ted. In all cases the histological type and
WHO-grade and the Ki-67/MIB1 labeling
index were determined. DNA cytophoto-
metry was performed after single cell prepa-
ration on Feulgen-stained preparations, and
the following parameters were calculated:
stemline ploidy, 5c-exceeding rate, and
2c-deviation index.
Statistical evaluation revealed a highly
significant correlation between recurrence-
free interval and WHO-grade only.The DNA
parameters, however, furnished additional
information about increasing genetic insta-
bility in the majority of the recurrencies in-
dependently of changes in the WHO-grade.
They thus seem to be useful as additional
parameters for the determination of glioma
progression.
Key words
Recurrent gliomas · WHO-classification ·
DNA-cytophotometry · Proliferation index ·
Recurrence-free interval
rer Studien zeigen, daß die Überlebens-zeit von Patienten mit Grad-III-Tumo-ren statistisch signifikant gegenüber Pa-tienten mit Grad-II-Tumoren verkürztist. Dahingegen zeigten sich nur geringsignifikante Unterschiede zwischen denÜberlebenszeiten von Patienten mitGrad-III- und Grad-IV-Tumoren. Derstatistische Vergleich der Überlebens-zeiten zwischen Patienten mit Grad-II-Tumoren und der zusammengefaßtenGruppe aus Grad-III- und Grad-IV-Tumoren war in diesen Studien hochsignifikant [22, 29]. Die Einteilung inHigh- und Low-grade-Gliome wurdeauch von anderen Autoren praktiziert[14, 31, 34]. Darüber hinaus hatte dieseVorgehensweise statistische Gründe,denn die Fallzahlen bei Grad-III- undGrad-IV-Gliomen waren vergleichswei-se niedrig.
DNA-Zytophotometrie
Für die Zytophotometrie wurden nachKriterien der Gewebeerhaltung geeig-nete Paraffinblöcke ausgewählt, an de-nen die Zellvereinzelung durchgeführtwerden sollte. Von diesen Blöcken wur-den jeweils 2 80 µm dicke Paraffin-schnitte angefertigt, die für die Einzel-zellseparierung mittels einer modifi-zierten Methode nach Heiden et al. [15]verwendet wurden. Die Gewebeschnittewurden zunächst in kleinen Nylongaze-säckchen (Maschenweite: 70 µm) wei-terverarbeitet: Nach Entparaffinierungdes Materials mittels Xylol und Rehy-drierung über eine absteigende Alko-holreihe erfolgte die enzymatische Ver-dauung in salzsaurem Pepsin (1 h bei 37° C).Von den durch das Maschenwerkder Nylongazesäckchen heraustreten-den Zellkernen wurden Zytozentrifuga-tionspräparate hergestellt. Diese wur-den getrocknet und unter Lichtaus-schluß bis zur Färbung aufbewahrt. Un-mittelbar vor der Färbung wurden diePräparate für 10 min in 4%igem neutra-len Formalin fixiert und anschließendeiner Feulgen-Reaktion (Modifikationnach Krug [21]) unterzogen: Nach saurerHydrolyse in 5N HCl für 30 min bei 25° Cund unmittelbar anschließender 60mi-nütiger Färbung in Schiffs-Reagenzwurden die Präparate dehydriert undmit Canada-Balsam eingedeckt.
Die DNA-Zytophotometrie erfolgteinnerhalb von 14 Tagen nach Herstel-lung der Präparate mit Hilfe des Bild-
tet wurde [30–32], liegen entsprechendeStudien an Rezidivgliomen bislangnicht vor. Für die Prognose der Patien-ten ist aber das Rezidivverhalten vonentscheidender Bedeutung, und dieLänge der rezidivfreien Intervalle stellteine gut erfaßbare Größe dar.
In der vorliegenden Arbeit wurdendaher Tumoren von mehrfach operier-ten Gliompatienten unter der Fragestel-lung untersucht, ob die DNA-zytome-trischen Daten und der Proliferations-index mit dem WHO-Grad und mit derLänge des rezidivfreien Intervalls kor-relieren und somit hinsichtlich der in-dividuellen Tumorprogression von Be-deutung sind.
Material und Methoden
Zur Untersuchung kam formalinfixier-tes (4%ige wäßrige Formaldehydlö-sung) und paraffineingebettetes Operati-onsmaterial von insgesamt 50 Gliompa-tienten (18 Frauen, 32 Männer), von de-nen alle 50 mindestens 2mal, 18 3malund 3 4mal im Zeitraum von 1981–1997in der Klinik für Neurochirurgie derUniversität Leipzig operiert worden wa-ren. Somit betrug die Gesamtzahl derProben 121 (Tabelle 1). Zum Zeitpunktder 1. Operation ergab sich eine Alters-verteilung von 18–67 (Mittelwert±Stan-dardabweichung: 40±12) Jahren; 38 Pati-enten wurden nach der Erstoperationbestrahlt, 7 Patienten mit WHO-Grad II-Gliomen blieben unbestrahlt, von 5 Pati-enten waren keine klinischen Daten ver-fügbar. Das rezidivfreie Intervall (RFI),welches die Zeitspanne zwischen 2 Ope-rationen umfaßt, wurde in Monaten be-stimmt (Tabelle 1). Die morphologischeKlassifikation und die Gradierung derTumoren erfolgte anhand von HE-,Masson-, Tibor-Pap- und Kresylviolett-gefärbten 6 µm dicken Paraffinschnit-ten nach dem von der WHO vorgeschla-genen Schema [18]. Da es sich um be-reits klassifiziertes Archivmaterial han-delt, wurde in vorliegender Studie dieWHO-Klassifikation in ihrer 2. Fassung[18] angewendet.
Für die quantitativen Analysenwurden alle Grad-II-Tumoren als nied-riggradige Gliome (LGG=low gradegliomas) und alle Grad-III- und Grad-IV-Tumoren als höhergradige Gliome(HGG=high grade gliomas) zusammen-gefaßt. Dieses Vorgehen erscheint be-rechtigt, da die Ergebnisse vergleichba-
analysesystems Cue2 (Fa. Olympus,Japan). Für die Messung wurde dasSystem mit einem Mikroskop BH-2 (Fa. Olympus, Japan), ausgestattet miteinem Objektiv 40×, einem 560 nmInterferenzfilter und einer Schwarz/weiß-Videokamera (XC-57CE, Fa. Sony,Japan) mit einer Bildauflösung von512×512 Pixel verbunden. Mindestens250 zufällig ausgewählte Tumorzellker-ne und 25 Granulozytenkerne als interneReferenz wurden interaktiv gemessen.Eine Glare-Korrektur war für das be-nutzte System nicht verfügbar. Deswe-gen wurde der Variationskoeffizient(CV) kleiner als 7% akzeptiert, obwohlder CV der Referenzzellpopulation 5%nicht überschreiten sollte [3].
Folgende bei Böcking et al. [2] er-wähnte DNA-Parameter wurden mitHilfe der Ploidie-Software (Version 6.2,Fa. Olympus, Japan) errechnet:
● Stammlinienploidie (Verhältnis desDNA-Gehaltes von Zellen der Tumor-stammlinie zu den diploiden Zellender Referenzzellpopulation; DNA-In-dex, DI),
● 5c-exceeding-rate (Der Prozentsatzder Zellen mit einem DNA-Gehaltvon mehr als 5c, 5cER),
Mikrowelle) inkubiert. Eine positiveReaktion mit dem Primärantikörperwurde mit einem biotinylierten Sekun-därantikörper-ABC-Komplex und mitDiaminobenzidintetrahydrochlorid alsChromogen visualisiert. Nach der im-munhistochemischen Behandlung wur-den die Schnitte mit Hämalaun gegen-gefärbt. In allen Fällen war für diequantitative Auswertung eine klare Ab-grenzung der Immunreaktion möglich(Abb. 2). Der Proliferationsindex wurdeautomatisiert mit dem Bildanalysesy-stem KS-300 (Fa. Kontron) dadurch be-stimmt, daß 10 zufällig ausgewählte Ge-sichtsfelder bei 40facher Vergrößerungausgewertet wurden. Areale mit Nekro-sen und Gefäßproliferaten wurden ausder Vermessung ausgeschlossen. Dieautomatisierte Messung erfolgte ambinarisierten Bild nach Schwellenwert-einstellung durch Bestimmung derMIB1-positiven Kernflächen und derGesamtkernflächen, die sowohl aus denmit MIB1 angefärbten als auch aus dennur mit Hämalaun dargestellten Kern-flächen bestanden. Der Proliferations-index errechnete sich wie folgt: Flächeder immunhistochemisch positiv mar-kierten Kerne (MIB1) mal 100 geteiltdurch die Gesamtkernfläche.
● 2c-deviation-index [Die Varianz derDNA-Werte um den normalen 2c-Wert (2c=diploider DNA-Gehalt);entspricht der Variabilität der Chro-mosomenanomalien in der Zytoge-netik, Parameter mit hoher progno-stischer Validität, 2cDI].
Ein Tumor wurde als aneuploid angese-hen, wenn die Stammlinienploidie klei-ner als 0,88 oder größer als 1,12 war. EinBeispiel für die Meßwerterfassung ist inAbb. 1 exemplarisch dargestellt. Die Re-sultate der DNA-Zytophotometrie wur-den mit dem WHO-Grad verglichen(χ2-Test und Mann-Whitney-U-Test)unter Verwendung der Statistiksoft-ware SPSS für Windows, Version 6.0.Ein Unterschied wurde als signifikantangesehen, wenn der p-Wert kleiner als0.05 war.
Für die immunhistochemische Bestim-mung des Proliferationsindexes wur-den 6 µm dicke Schnitte mit dem mo-noklonalen gegen das Ki-67-Protein ge-richteten Antikörper MIB 1 (Biomeda,1:50, 24 h bei 4° C, Vorbehandlung mit
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Tabelle 1
Rezidivverhalten der untersuchten Tumoren
1. Rezidiv 2. Rezidiv 3. Rezidiv
Entität des Primärtumors WHO- Anzahl RFI zur WHO- Anzahl RFI zur WHO- Anzahl RFI zur(WHO-Grad), Zahl der Fälle Grad 1. Operation Grad 2.Operation Grad 3.Operation
Astrozytome (II), 17 II 2 20III 8 41 III 2 9 III 1 7
IV 2 6IV 7 28 IV 2 7 IV 1 7
Anaplastische Astrozytome (III), 8 III 1 5IV 7 26 IV 2 6 IV 1 6
Astrozytome (IV) bzw. IV 10 9 IV 2 5Glioblastome (IV), 10
Oligoastrozytome (II), 5 II 1 37 III 1 14III 4 57 III 1 15
IV 1 3
Anaplastische Oligoastrozytom (III), 1 III 1 19
Oligodendrogliome (II), 9 II 5 33 II 1 21III 2 34
III 3 36 III 1 12IV 1 72 IV 1 6
Statistik
Kontinuierliche und ordinale Datenwurden mit dem nicht parametrischenTest verglichen, kategorische Daten mitdem χ2-Test (Pearson). Die Überle-benszeitdaten (=Länge der RFI) wur-den nach Kaplan-Meier-Schätzer be-stimmt und mit dem Log-Rank-Testverglichen.Auf eine multivariate Analy-se (Cox-Regressionstest) wurde ver-zichtet, da keiner der untersuchten Pa-rameter univariat einen signifikantenZusammenhang mit dem rezidivfreienIntervall zeigte.
Ergebnisse
31 Primärtumoren gehörten demWHO-Grad II an (17 Astrozytome, 9Oligodendrogliome und 5 Oligo-astrozytome), 9 dem WHO-Grad III (8anaplastische Astrozytome und 1 ana-plastisches Oligoastrozytom) und 10dem WHO-Grad IV (Glioblastome)(Tabelle 1). Die Tumoren konnten unter
36% der Primärtumoren, 52% der1. Rezidive, 78% der 2. Rezidive undeins von 3 der 3. Rezidive waren, bezo-gen auf ihre Stammlinienploidie, aneu-ploid; 22 der 32 diploiden Primärtumo-ren hatten diploide Rezidive (=69%);16 der 18 aneuploiden Primärtumorenhatten aneuploide Rezidive (89%) (Ta-belle 2, 3).
Bei den ersten Rezidiven war in 30Fällen ein Anstieg des WHO-Grades, in43 Fällen eine Zunahme des 2c DI, in 41Fällen eine Zunahme der 5c ER und in28 Fällen ein Anstieg des Ki-67/MIB 1 LIzu beobachten. Diese Veränderungenwaren statistisch signifikant (Wilco-xon-Paar-Test für abhängige Stichpro-ben). Die Veränderungen der DNA-Pa-rameter und der Proliferationsaktivitätwaren statistisch unabhängig vomWHO-Grad.
Die DNA-Parameter und die Proli-ferationsaktivität zeigten bei der 1.Opera-tion keine statistisch signifikante Korre-lation zum WHO-Grad. Bei der 2. Opera-tion ließ sich eine statistisch signifikanteKorrelation zwischen dem WHO-Gradund dem 2c DI,der 5c ER sowie dem Plo-idiestatus nachweisen (Tabelle 2).
Die gemessenen DNA-Parameterwaren ebenso wie der Proliferationsin-dex nicht signifikant mit der Länge desRFI korreliert. Eine hochsignifikante
Berücksichtigung des WHO-Gradesvon Primärtumor und Rezidiven in 2Gruppen eingeteilt werden. Bei 17 Pati-enten hatten alle Rezidive (insgesamt20 Rezidive) den gleichen WHO-Gradwie der Primärtumor.
Die 33 weiteren Patienten hatteninsgesamt 51 Rezidive. Dabei zeigte sichzumindest in einem der Rezidivtumo-ren ein Anstieg des WHO-Grades. In 36Fällen dieser 51 Rezidive fand sich einAnstieg des WHO-Grades, in 15 Fällenwich der WHO-Grad nicht von dem ab,der bei der jeweils vorangehenden Ope-ration ermittelt worden war (Tabelle 1).
Die 4. Operation (3. Rezidiv) konn-te für die Zeitanalysen nicht in Betrachtgezogen werden, da die Zahl der Patien-ten mit einer vierten Operation für sta-tistische Berechnungen zu gering (n=3)war. Ebenso war die Zahl der Fälle mitniedriggradigen Gliomen (LGG) in derGruppe der 3. Operationen (n=1) zu ge-ring für die statistische Analyse der Ab-hängigkeit der untersuchten Parametervom WHO-Grad.
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Originalien
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Abb. 1a–d m Exemplarische Meßwerterfassung bei einem Fall mit gleichbleibendem histologischenWHO-Grad bei Anstieg der DNA-Parameter; Patient mit 2 Rezidiven eines Oligodendroglioms.a 1. Operation, Oligodendrogliom, WHO-Grad II. DNA-Ploidie: diploid. b 2. Operation, Oligodendro-gliom, WHO-Grad II. DNA Ploidie: diploid. c 3. Operation Oligodendrogliom, WHO-Grad II. DNA-Ploidie:aneuploid. d Kein Anstieg von Ki-67/MIB1 LI, 2c DI und 5c ER beim 1. Rezidiv, deutlicher Anstieg beim2. Rezidiv
Korrelation fand sich lediglich zwi-schen den WHO-Graden und der Längeder RFI. Bemerkenswert war, daß Glio-me mit aneuploidem DNA-Gehalt einlängeres 1. rezidivfreies Intervall hattenals die mit diploidem DNA-Gehalt (21vs. 16 Monate, Kaplan-Meier-Schätzer,Log-Rank-Test; Tabelle 3).
Fälle) war dies für den 2c DI in 25 Fällen(72%), für die 5c ER in 24 Fällen (69%)und für den Ki-67/MIB1 LI in 22 Fällen(63%) der Fall, bei den Fällen mit an-steigendem WHO-Grad (36 Fälle) fürden 2c DI in 33 Fällen (92%), für die 5cER in 33 Fällen (92%) und für den Ki-67/MIB1 LI in 19 Fällen (53%). Die Ver-änderungen der ermittelten Parameterbei Rezidivfällen mit entweder gestie-genem oder konstantem WHO-Gradsind in Abb. 3 dargestellt. Dabei betru-gen die Unterschiede der Konversion
Sowohl bei den Rezidiven, die miteinem Anstieg des WHO-Grades einher-gingen, als auch bei denen mit gleich-bleibendem WHO-Grad fand sich einstatistisch signifikanter Anstieg von 2cDI, 5c ER und Ki-67/MIB1 LI gegenüberdem Primärtumor. Bei den Rezidivenmit gleichbleibendem WHO-Grad (35
Der Pathologe 6·99 | 325
Abb. 2 m Vergleich von histologischem Bild und Immunreaktion bei verschiedenen Tumortypen.Oben Protoplasmatisches Astrozytom, WHO-Grad II. Mitte Anaplastisches Astrozytom, WHO-Grad III.Unten Gliomblastoma multiforme, WHO-Grad IV. Links HE. Rechts ImmunhistochemischeKi-67-Reaktion mit dem monoklonalen Antikörper MIB1
der Ploidie (Übergang diploider Tu-moren in aneuploide) bei Gliomrezi-diven mit gestiegenem WHO-Gradp=0,0023 und bei solchen mit konstan-tem WHO-Grad p=0,2568.
Eine statistisch signifikante Korre-lation zwischen dem Ki-67/MIB1 LI undden DNA-Parametern ließ sich wederfür die 1. noch für die 2. Operation nach-weisen (exakte zweizeitige Überschrei-tungswahrscheinlichkeit p>0,1117).
Diskussion
Die WHO-Klassifikation der Hirntu-moren gibt mit ihrer Gradierung diebiologische Wertigkeit an, und hierbeiwerden auch andere als rein histopa-thologische Kriterien mit einbezogen.Insofern stellt sie ein Gradierungssche-ma dar, das ganz unterschiedliche Enti-täten teilweise unabhängig von histolo-gischen Zeichen der Differenzierungoder der Anaplasie einbezieht [18]. Ob-wohl in zahlreichen Studien eine signifi-kante Korrelation zwischen dem histo-pathologischen Grad und der Überle-benszeit festgestellt wurde [27, 29, 33],
Korrelation mit dem WHO-Grad stim-men vom Trend her damit gut überein.In der vorliegenden Studie konnte einestatistisch signifikante Korrelation zwi-schen dem Ki-67/MIB1 LI und demWHO-Grad nicht nachgewiesen werden.Die fehlende Signifikanz bei der Korre-lation von Ki-67/MIB1 LI und rezidiv-freiem Intervall wirft hingegen die Frageauf, inwieseit das Ausmaß der Verände-rung dieser Parameter ein Indikator fürdie Länge des rezidivfreien Intervallsoder die Überlebenszeit ist [1, 12, 26].
Die Interpretation von DNA-Zyto-photometriebefunden ist schwierigund wird widersprüchlich diskutiert.Schon hinsichtlich des Ploidiestatus istdie Literatur kontrovers insofern, als ei-ne signifikante Korrelation mit derÜberlebenszeit der Gliompatiententeilweise beschrieben [5, 9], teilweiseabgelehnt wird [6, 7, 20]. Geht man da-von aus, daß ein längeres rezidivfreiesIntervall mit einer längeren Überle-benszeit korreliert [12, 37], so bestätigenunsere Ploidiedaten die zunächst über-raschende Mitteilung einer längerenÜberlebenszeit von Patienten mit an-euploiden anaplastischen Astrozyto-men gegenüber solchen mit diploidemPloidiestatus [31]. Während Danova etal. [9] und Mathew et al. [22] eine signi-fikante Korrelation zwischen dem Plo-idiestatus und dem histopathologi-schen Grading feststellten, fanden an-dere Autoren [20, 30, 32] hier keine sta-tistische Signifikanz. Vavruch et al.fanden bei einer flow-zytophotometri-schen Untersuchung an 22 Rezidivglio-men eine signifikante Korrelation zwi-schen WHO-Grad und Ploidiestatus beider 1. Operation und keine Korrelationbei der 2. Operation [35]. Dagegenkonnten wir in den Resektaten der1. Operation keine signifikante Korrela-tion (p=0,3659) und in denen der 2. Ope-ration eine sehr signifikante Korrelati-on (p=0,0014) zwischen dem WHO-Grad und dem Ploidiestatus der Tumo-ren nachweisen. Eine Erklärung dieserinversen Befunde ist sehr schwierig.Nach unseren Daten ist eine schwache,tendenzielle Korrelation des 2c DI undder 5c ER mit dem WHO-Grad in der1. Operation vorhanden, wohingegendiese Parameter eine hochsignifikanteKorrelation zu den WHO-Graden der2. Operation aufweisen.
Die Abwesenheit eines signifikan-ten Zusammenhangs zwischen den er-
ist die Entwicklung weitergehenderproliferationskinetischer, molekularge-netischer oder zytophotometrischerKriterien für zahlreiche Fragestellun-gen eine Notwendigkeit [36].
Der signifikante Anstieg der unter-suchten Parameter, insbesondere des 2cDI und der 5c ER bei Tumorrezidivenmit und ohne Erhöhung des WHO-Gra-des belegt die diagnostische Relevanzder Zytophotometrie als Zusatzmetho-de bei der Gliomdiagnostik. Ein Ver-gleich unserer Ergebnisse mit den imSchrifttum vorliegenden ist jedochschwierig, weil sich letztere überwie-gend auf die Durchflußzytophotome-trie beziehen. Problematisch für dieVergleichbarkeit zytometrischer Studi-en ist auch die unzureichende Standar-disierung, auf die z.B. von Böcking et al.hingewiesen wurde [3].
Der Ki-67/MIB1 LI zeigt auch nachneueren umfangreichen Studien eineKorrelation sowohl mit dem WHO-Gradals auch mit der Überlebenszeit [13, 16, 17,25, 28], und dies gilt für Grad II-Astrozy-tome und für Oligodendrogliome [10,23]. Unsere Ergebnisse bezüglich der
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Originalien
326
Tabelle 2
Ki-67/MIB1 LI und DNA-Parameter in bezug zum WHO-Grad bei der 1. und der 2.Operation. Tendenzielle positive Korrelation (p<0,1) von Ki-67/MIB1 LI und 5c ERmit dem WHO-Grad bei den Primärtumoren. Hochsignifikante Korrelation des 2cDI und der 5c ER mit dem WHO-Grad bei der 2. Operation (p<0,001), Keinestatistisch signifikante Korrelation zwischen Ploidie und WHO-Grad bei der1. Operation und sehr signifikante Korrelation (p<0.01) bei der 2. Operation)
(LGG niedriggradige Gliome, HGG hochgradige Gliome)a Mittelwert±Standardabweichung (bei der Ploidie: Anzahl und Prozentsatz)b Mann-Whitney-U-Test für unabhängige Stichproben (bei der Ploidie: χ2-Test, Pearson)
mittelten Parametern und der Längedes RFI bedeutet, daß sie keine selb-ständige statistisch gesicherte progno-stische Bedeutung haben können. Diespaßt zusammen mit der Abwesenheitder signifikanten Korrelation zwischendiesen Parametern und dem bekann-termaßen prognostisch bedeutsamenhistologischen WHO-Grad, insbeson-dere beim Primärtumor. Daraus ergibtsich, daß sich aus der Bestimmung derDNA-Parameter keine relevanten Aus-sagen über das zu erwartende Rezidiv-verhalten und damit auch über die Län-ge des RFI eines einzelnen glialen Tu-mors ableiten lassen.
gen nicht vor. Allerdings ist eine Ab-schätzung des Anteils, den die Bestrah-lung auf die Zunahme der genetischenInstabilität der Tumoren hat, im vorlie-genden Kollektiv schwierig, da alle Pati-enten, bei denen als Primärtumor oderals Rezidiv ein Grad-III- oder Grad-IV-Tumor vorlag, bestrahlt wurden.
Bei den Rezidiven, welche eine Zu-nahme des WHO-Grades zeigten, eben-so wie auch bei Rezidiven mit konstantbleibendem WHO-Grad war der An-stieg aller untersuchten Parameter sta-tistisch signifikant. Das weist daraufhin, daß in Gliomrezidiven in der Regeleine Tumorprogression mit steigenderProliferationsaktivität und, statistischunabhängig davon, eine Zunahme dergenetischen Instabilität stattfindet,auch in Fällen ohne Änderung desWHO-Grades. Die DNA-Zytophotome-trie mit Bestimmung des 2c DI und der
Während die Veränderung des Ki-67/MIB1 LI die zunehmende Wachs-tumsgeschwindigkeit bei der Tumor-progression dokumentiert, liefert dieVeränderung der DNA-Parameter In-formationen über die konvertierendegenetische Instabilität und Anaplasie.Hierbei sind nicht nur genuine, sondernauch sekundäre Veränderungen etwa imGefolge der Bestrahlung zu berücksichti-gen. Daß die Bestrahlung einen Einflußauf die DNA-Verteilungsmuster von Ge-weben und Tumoren hat, ist bekannt.Systematische Untersuchungen überden Einfluß der Bestrahlung auf dieDNA-Expression bei Hirntumoren lie-
Der Pathologe 6·99 | 327
Abb. 3a, b m Veränderungen der ermittelten Parameter in sukzessiven Rezidiven mit konstantemWHO-Grad (a 35 Fälle) und mit steigendem WHO-Grad (b 36 Fälle). Boxplot mit Median, Interquartil-Abstand und Minimum bzw. Maximum (°=Ausreißer, *=Extremwerte, p=zweiseitige Über-schreitungswahrscheinlichkeit bei Wilcoxon-Paar-Test für abhängige Stichproben)
5c ER kann damit einen wichtigen Bei-trag zur Erfassung der Tumorprogres-sion leisten.
Fazit für die Praxis
Für die prognostische Beurteilung vonGliomen ist die Bestimmung des WHO-Grades neuropathologischer Standard.Allerdings weisen Gliomrezidive auch beigleichbleibendem WHO-Grad eine Zunah-me der genetischen Instabilität auf. DieseMalignisierung kommt in einem Anstiegder DNA-Parameter und des Proliferations-indexes zum Ausdruck.Wenngleich sichereprognostische Aussagen über das zuerwartende Rezidivverhalten eines einzel-nen Tumors daraus nicht gewonnen wer-den können, liefert die Erfassung dieserParameter wertvolle zusätzliche Informa-tionen über die Tumorprogression.
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Die Arbeit wurde im Rahmen des Graduier-tenkollegs „Intercell“ der Universität Leip-zig erstellt. Wir danken Frau G. Kretschmer,Frau M. Dießel und Herrn cand. med.St. Fischer für ihre technische Unterstüt-zung.
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| Der Pathologe 6·99
Originalien
328
Tabelle 3
Prognostische Bedeutung von WHO-Grad, Ki-67/MIB1 LI and DNA-Parametern bezüglich der Länge des RFI bis zur 2. Operation. DieKorrelation zwischen RFI und WHO-Grad zeigte erwartungsgemäßhochsignifikante Unterschiede (p<0,00001). Ki-67/MIB1 LI and DNA-Parameter zeigen keine statistisch signifikante Korrelation mit derLänge des RFI. Bemerkenswert ist das bei Gliomen mit aneuploidemDNA-Gehalt längere erste RFI (21 vs. 16 Monate)
a 1. Operationb 2. Operationc RFI (Median and Range in Monaten)
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