Date post: | 16-Aug-2019 |
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Versuchsübersicht
Mikrobiologische Wasseruntersuchungen
Tag Versuch 13
Bestimmung
der Kolonie-
zahl
Versuch 14
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Flüssigkeitsan-
reicherung
Versuch 15
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Membran-
filtrations-
verfahren
Versuch 16
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Colilert-
Verfahren
Versuch 17
Nachweis
E. coli:
Mikrotiter-
platten-
verfahren
Versuch 18
Identifizierung
mit API 20 E-
System
Montag Anlegen von
Gussplatten
Ansatz von
Flüssigkulturen
Membran-
filtration
Animpfen von
Quanti-Trays
Animpfen
von Mikro-
titerplatten
-
Dienstag - Subkulturen
Endo-Agar
Subkulturen
CASO-Agar
Auswertung - -
Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine
Bunte Reihe
Oxidase-Test,
Auswertung
- Auswertung -
Donners-
tag
Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Ansetzen von
Teststreifen
Freitag Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Auswertung
Versuchsübersicht
Mikrobiologische Wasseruntersuchungen
Tag Versuch 13
Bestimmung
der Kolonie-
zahl
Versuch 14
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Flüssigkeitsan-
reicherung
Versuch 15
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Membran-
filtrations-
verfahren
Versuch 16
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Colilert-
Verfahren
Versuch 17
Nachweis
E. coli:
Mikrotiter-
platten-
verfahren
Versuch 18
Identifizierung
mit API 20 E-
System
Montag Anlegen von
Gussplatten
Ansatz von
Flüssigkulturen
Membran-
filtration
Animpfen von
Quanti-Trays
Animpfen
von Mikro-
titerplatten
-
Dienstag - Subkulturen
Endo-Agar
Subkulturen
CASO-Agar
Auswertung - -
Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine
Bunte Reihe
Oxidase-Test,
Auswertung
- Auswertung -
Donners-
tag
Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Ansetzen von
Teststreifen
Freitag Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Auswertung
1. Tag (Montag)
Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser.
Ansatz: je 100 mL Trinkwasser und
Ruhrwasser.
Anlegen von Primärkulturen in
Lactose-Pepton-Bouillon (Flüssig-
keitsanreicherung).
Bebrütung: 36 °C, 24 h.
Quelle: Süßmuth et al., 1999
Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen
Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung
2. Tag (Dienstag)
Ablesen der Primärkulturen in
Lactose-Pepton-Bouillon auf
Trübung, Farbumschlag und
Gasbildung.
Bei negativer Reaktion, weitere
Bebrütung bei 36 °C für 24 h.
Anlegen von 2 Subkulturen auf
Endo-Agar (nur aus Ruhrwasser-
ansatz).
Bebrütung: 36 °C, 24 h.
Quelle: Süßmuth et al., 1999
Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen
Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung
Beim Umgang mit Endo-Agar unbedingt
Schutzhandschuhe tragen!
Prinzip des Nachweises von E. coli und coliformen
Bakterien in Lactose-Pepton-Bouillon
E. coli und coliforme Bakterien verwerten Lactose.
Abbau von Lactose erfolgt durch
1. enzymatische Spaltung von Lactose
2. Vergärung von Glucose zu organischen Säuren, Alkoholen
und Gas (Säurebildung: Farbumschlag von rot nach gelb;
Gasbildung: Gasblasen im Gärröhrchen)
H
H
-D-Galactosidase
D-Galactose
D-Glucose
Vergärung von Glucose durch E. coli und coliforme
Bakterien
Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2009
Formiat
Versuchsübersicht
Mikrobiologische Wasseruntersuchungen
Tag Versuch 13
Bestimmung
der Kolonie-
zahl
Versuch 14
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Flüssigkeitsan-
reicherung
Versuch 15
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Membran-
filtrations-
verfahren
Versuch 16
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Colilert-
Verfahren
Versuch 17
Nachweis
E. coli:
Mikrotiter-
platten-
verfahren
Versuch 18
Identifizierung
mit API 20 E-
System
Montag Anlegen von
Gussplatten
Ansatz von
Flüssigkulturen
Membran-
filtration
Animpfen von
Quanti-Trays
Animpfen
von Mikro-
titerplatten
-
Dienstag - Subkulturen
Endo-Agar
Subkulturen
CASO-Agar
Auswertung - -
Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine
Bunte Reihe
Oxidase-Test,
Auswertung
- Auswertung -
Donners-
tag
Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Ansetzen von
Teststreifen
Freitag Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Auswertung
Versuch Nr. 15: Nachweis von E. coli und coliformen
Bakterien mittels Membranfiltration (ISO 9308-1)
1. Tag (Montag)
Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser.
Ansätze:
- Trinkwasser 100 mL
- Ruhrwasser 10 mL und 1 mL.
Membranfiltration (0,45 µm Filter)
Anlegen von Primärkulturen:
Transfer der Filter auf Chromogenen Coliformen-Agar (CCA)
und Bebrütung (36 °C, 24 h).
Versuch Nr. 15: Nachweis von E. coli und
coliformen Bakterien mittels Membranfiltration
2. Tag (Dienstag)
Auswertung der Primärkulturen auf CCA:
- Auszählung aller dunkelblauen bis violetten Kolonien (E. coli),
Berechnung der Konzentration von E. coli (KBE/100 mL)
- Auszählung aller rosa bis roten Kolonien (verdächtige coliforme
Bakterien, die nicht E. coli
sind).
Anlegen von Subkulturen von
4 verdächtigen rosa bis roten
Kolonien aus der Ruhrwasser-
probe auf Trypton-Soja-Agar
(CASO-Agar) und Bebrütung
der Subkulturen (36 °C, 24 h)
Oxidase-Test.
Testprinzip
Nachweis von coliformen Bakterien: 6-Chlor-3-indoxyl--D-galactopyranosid (Salmon-Gal; chromogenes Substrat) -D-Galactosidase 6-Chlor-3-indoxyl + -D-Galactose (rosa bis rote Färbung der Kolonien) Nachweis von E. coli: 5-Brom-4-chlor-3-indoxyl-β-D-glucuronsäure Cyclohexylammoniumsalz-Monohydrat
(X-Gluc; chromogenes Substrat) -D-Glucuronidase
5-Brom-4-chlor-3-indoxyl + -D-Glucuronat
5-Brom-4-chlor-3-indoxyl wird von O2 der
Luft zum tiefblauen Farbstoff 5,5'-Dibrom-
4,4'-dichlor-indigo oxidiert (dunkelblaue bis
violette Färbung der Kolonien)
Salmon-Gal
X-Gluc
Versuchsübersicht
Mikrobiologische Wasseruntersuchungen
Tag Versuch 13
Bestimmung
der Kolonie-
zahl
Versuch 14
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Flüssigkeitsan-
reicherung
Versuch 15
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Membran-
filtrations-
verfahren
Versuch 16
Nachweis
E. coli und
Coliforme:
Colilert-
Verfahren
Versuch 17
Nachweis
E. coli:
Mikrotiter-
platten-
verfahren
Versuch 18
Identifizierung
mit API 20 E-
System
Montag Anlegen von
Gussplatten
Ansatz von
Flüssigkulturen
Membran-
filtration
Animpfen von
Quanti-Trays
Animpfen
von Mikro-
titerplatten
-
Dienstag - Subkulturen
Endo-Agar
Subkulturen
CASO-Agar
Auswertung - -
Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine
Bunte Reihe
Oxidase-Test,
Auswertung
- Auswertung -
Donners-
tag
Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Ansetzen von
Teststreifen
Freitag Auszählung Auswertung
Bunte Reihe
- - - Auswertung
1. Tag (Montag)
Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser.
Ansätze: 100 mL Trinkwasser und
100 mL Ruhrwasser.
Zugabe des Colilert-18-Reagenzes.
Den gesamten Ansatz in Quanti-Tray füllen.
Quanti-Tray versiegeln.
Bebrütung: 36 °C, 18 h - 22 h.
1
2
3
Versuch Nr. 16: Nachweis von E. coli und coliformen
Bakterien mit dem Colilert-18/Quanti-Tray-System
Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien
mit dem Colilert-System: Auswertung
2. Tag (Dienstag)
Auszählung aller gelben großen und kleinen
Vertiefungen (coliforme Bakterien).
Auszählung aller gelben + fluoreszierenden
großen und kleinen Vertiefungen unter einer
UV-Handlampe bei 366 nm (Escherichia coli).
Ablesung der wahrscheinlichsten Zahl aus der
MPN-Tabelle für coliforme Bakterien und E. coli;
Ergebnisangabe: MPN/100 mL.
MPN: Most Probable Number
(„wahrscheinlichste Keimzahl“)
Ergebnisse in Tabelle (Aushang) eintragen.
Anmerkung:
Keine Vertiefung positiv: < 1 MPN/100 mL
Alle Vertiefungen positiv: > 2419,2 MPN/100 mL
Große Vertiefungen
Kleine
Vertiefungen
Versuch Nr. 16: Nachweis von E. coli und coliformen
Bakterien mit dem Colilert-System
Nachweis von coliformen Bakterien: o-Nitrophenyl--D-galactopyranosid (ONPG; chromogenes Substrat) -D-Galactosidase o-Nitrophenol + -D-Galactose (Gelbfärbung) Nachweis von E. coli: 4-Methylumbelliferyl--D-glucuronid (MUG; fluorogenes Substrat) -D-Glucuronidase
4-Methylumbelliferon + -D-Glucuronat (hellblaue Fluoreszenz)
MUG
ONPG
MPN-Verfahren in einem Schritt
Konventionelles MPN-Verfahren:
Verschiedene Verdünnungsröhrchen
in Mehrfachansätzen notwendig.
MPN-Verfahren (Colilert-System):
ein Ansatz ausreichend.
Versuch Nr. 16: Nachweis von E. coli und coliformen
Bakterien mit dem Colilert-System
Gleichzeitiger Nachweis von Coliformen und E. coli in einem
Schritt.
Verwendung von Indikator-Nährstoffen (ONPG, MUG), die
von den Zielorganismen durch spezifische Enzyme hydroly-
siert und metabolisiert werden.
Ergebnisse in 18 Stunden; keine Bestätigungstests notwendig.
Geringer Arbeits- und Zeitaufwand.
In Deutschland: Colilert-18/Quanti-Tray als alternatives
Nachweisverfahren zum Referenzverfahren (Membranfiltration,
DIN EN ISO 9308-1) nach Trinkwasserverordnung vom
Umweltbundesamt zugelassen.
Das Verfahren ist genormt: DIN EN ISO 9308-2 (Juni 2014).