Tierärztliche Hochschule Hannover
Vergleichende Untersuchung zur klinischen Wirksamke it von
systemischen Behandlungen mit Oxytetrazyklin, versc hiedenen
Makrolid-Antibiotika, Lincomycin/Spectinomycin gege n Moderhinke
beim Schaf im Vergleich zu Zinksulfat-Klauenbädern
INAUGURAL-DISSERTATION
zur Erlangung des Grades einer Doktorin der Veterinärmedizin
- Doctor medicinae veterinariae -
(Dr. med. vet.)
vorgelegt von
Theres Friese
Leinefelde
Hannover 2013
Wissenschaftliche Betreuung: Prof. Dr. Martin Ganter (Klinik für kleine Klauentiere
und forensische Medizin und Ambulatorische Klinik)
1. Gutachter: Prof. Dr. Martin Ganter
2. Gutachter: Prof. Dr. Manfred Kietzmann
Tag der mündlichen Prüfung: 17.05.2013
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG.................................................................................................. 1
2 LITERATURÜBERSICHT ................................. ............................................. 3
2.1 Moderhinke ......................................... .......................................................... 3 2.1.1 Definition und weltweite wirtschaftliche Bedeutung ........................................ 3 2.1.2 Epidemiologie................................................................................................. 4 2.1.2.1 Dichelobacter nodosus................................................................................... 6 2.1.2.1.1 Morphologie ............................................................................................ 6 2.1.2.1.2 Virulenzfaktoren und Pathogenitätsmechanismen .................................. 6 2.1.3 Pathogenese und Klinik der Moderhinke ....................................................... 8 2.1.4 Nachweis der Pathogenität von Dichelobacter nodosus Stämmen ................ 9
2.2 Prophylaxe, Behandlung und Bekämpfung .............. ............................... 10 2.2.1 Resistenzzucht ............................................................................................. 10 2.2.2 Immuntherapie bzw.–prophylaxe.................................................................. 12 2.2.3 Topische Behandlungen............................................................................... 13
2.3 Parenterale Antibiose in der Moderhinketherapie.... ............................... 15 2.3.1 Parenterale Antibiose ................................................................................... 15 2.3.2 Voraussetzungen für ein Antibiotikum zur Bekämpfung der Moderhinke ..... 20 2.3.3 Rechtsgrundlage für den Einsatz von Antibiotika ......................................... 20 2.3.4 Pharmakologische Eigenschaften verwendeter Antibiotika .......................... 21 2.3.4.1 Makrolide im Vergleich................................................................................. 21 2.3.4.1.1 Pharmakodynamik ................................................................................ 22 2.3.4.1.2 Pharmakokinetik ................................................................................... 23 2.3.4.1.3 Nebenwirkungen ................................................................................... 24 2.3.4.2 Langzeitoxytetrazykline................................................................................ 24 2.3.4.2.1 Pharmakodynamik ................................................................................ 25 2.3.4.2.2 Pharmakokinetik ................................................................................... 25 2.3.4.2.3 Nebenwirkungen ................................................................................... 26 2.3.4.3 Lincomycin und Spectinomycin .................................................................... 26 2.3.4.3.1 Pharmakodynamik ................................................................................ 27 2.3.4.3.2 Pharmakokinetik ................................................................................... 27 2.3.4.3.3 Nebenwirkungen ................................................................................... 27
3 MATERIAL UND METHODEN.............................. ....................................... 29
3.1 Materialien........................................ ........................................................... 29 3.1.1 Versuchstiere ............................................................................................... 29 3.1.2 Wirkstoffe ..................................................................................................... 30 3.1.3 Geräte und Verbrauchsmaterialien............................................................... 31
3.2 Methoden ........................................... ......................................................... 34
3.2.1 Versuchsplan................................................................................................ 34 3.2.2 Klinische Untersuchung................................................................................ 36
3.2.3 Kultureller Nachweis von Dichelobacter nodosus......................................... 36 3.2.3.1 Probenentnahme.......................................................................................... 36 3.2.3.2 Kulturell-mikrobiologische Untersuchung ..................................................... 37 3.2.4 Molekularbiologischer Nachweis von Dichelobacter nodosus ...................... 37 3.2.4.1 Probennahme............................................................................................... 37 3.2.4.2 DNA Isolierung ............................................................................................. 38 3.2.4.3 Nested PCR ................................................................................................. 39 3.2.4.4 Agarose-Gelelektrophorese ......................................................................... 41 3.2.5 Genotypisierung der Versuchstiere .............................................................. 42 3.2.5.1 Probennahme und Aufarbeitung der Probe.................................................. 43 3.2.6 Klinische Beurteilung des Bewegungsapparates.......................................... 44 3.2.6.1 Klauenscoring .............................................................................................. 44 3.2.6.2 Locomotion Scoring ..................................................................................... 46 3.2.7 Einteilung der Behandlungsgruppen............................................................. 47 3.2.8 Behandlung .................................................................................................. 47 3.2.9 Beurteilung des Therapieverlaufs................................................................. 48 3.2.10 Statistische Auswertung ............................................................................... 49
4 ERGEBNISSE.............................................................................................. 53
4.1 Kultureller Nachweis von Dichelobacter nodosus .................................. 54
4.2 Nested PCR......................................... ........................................................ 55
4.3 DQA2-Genotypisierung............................... ............................................... 56
4.4 Klinischer Klauenscore vor Behandlungsbeginn....... ............................. 63
4.5 Therapieerfolge in Abhängigkeit vom Klauenscore.... ............................ 64
4.6 Therapieerfolge in Abhängigkeit vom Locomotion Scor e ...................... 74
5 DISKUSSION............................................................................................... 83
5.1 Eignung der verwendeten Versuchstiere und der Metho dik für die Fragestellung ...................................... ........................................................ 83
5.1.1 Versuchstiere und Haltungsbedingungen..................................................... 83 5.1.2 Labordiagnostische Nachweisverfahren....................................................... 85 5.1.3 Genotypisierung ........................................................................................... 86 5.1.4 Wirkstoffe ..................................................................................................... 87 5.1.5 Spezielle klinische Untersuchung................................................................. 88
5.2 Beurteilung der Ergebnisse......................... .............................................. 91 5.2.1 Vergleichbarkeit von kultureller Untersuchung und nested PCR.................. 91 5.2.2 Genotypisierung ........................................................................................... 94 5.2.3 Vergleich der Antibiotika untereinander und mit der topischen Therapie...... 96 5.2.3.1 Vergleich der Behandlungskosten verwendeter Antibiotika ....................... 101 5.2.3.2 Ursachen für „Therapieversager“ ............................................................... 103 5.2.3.3 Vor- und Nachteile der Antibiotika für die Moderhinketherapie .................. 103
5.3 Schlussfolgerungen................................. ................................................ 105
6 ZUSAMMENFASSUNG .................................... ......................................... 111
7 SUMMARY................................................................................................. 115
8 LITERATURVERZEICHNIS ............................... ........................................ 117
9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS .............................. ..................................... 141
10 TABELLENVERZEICHNIS ................................ ........................................ 145
11 DANKSAGUNG ......................................... ................................................ 149
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
Abb. Abbildung
AMG Arzneimittelgesetz
A. pyogenes Arcanobacterium pyogenes
Aqua bidest. Aqua bidestillata
BEA plus Blut-Eugon-Agar mit Lincomycinzusatz
bp Basenpaar
bspw. beispielsweise
bzw. beziehungsweise
C Celcius
Cmax maximale Plasmakonzentration
ca. circa
Ch.-B. Chargenbezeichnung
CODD Contagious Ovine Digital Dermatitis
C. perfringens Clostridium perfringens
d.h. das heißt
DNA deoxyribonucleic acid
D. nodosus Dichelobacter nodosus
d NTP Desoxyribonukleosidtriphosphat
EDTA Ethylendiamintetraacetat
et al. et alii
e.V. eingetragener Verein
evtl. eventuell
fg Femtogramm
fim A Fimbrien A
F. necrophorum Fusobacterium necrophorum
g Gramm
g Erdbeschleunigung (≈9,81 m/s²)
ggf. gegebenenfalls
ggr. geringgradig
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
h hora, Stunde
hgr. hochgradig
I.E. internationale Einheit
i.m. intramuskulär
inkl. inklusive
kg Kilogramm
KGW Körpergewicht
KS Klauenscore
l Liter
LE Low Electroendosmosis
LS Locomotion Score
max. maximal
MAX Maximum-Wert
Mb Megabasenpaare
MED Median
mg Milligramm
mgr. mittelgradig
MHC Major Histocompatibility Complex
MHK90 minimale Hemmstoffkonzentration von 90 % der
Isolate
Mill. Millionen
min Minute
MIN Minimum-Wert
mind. mindestens
ml Milliliter
MLS Gruppe Makrolid-Lincosamid-Streptogramin Gruppe
mm Millimeter
mM Millimol
n Anzahl
nm Nanometer
o.g. oben genannten
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
OM Ohrmarke
PBS phosphate buffered saline
PCR polymerase chain reaction
pH potencia hydrogenii
p-Wert Irrtumswahrscheinlichkeit
Q25 25 % Quartil
Q75 75 % Quartil
resp. respektive
s Sekunde
sv Svedberg Einheit
s.c. subkutan
s.o. siehe oben
s.u. siehe unten
SAS Statistical Analysis System
ssp. Subspezies
t1/2 Halbwertszeit
Tab. Tabelle
tRNA Transfer-Ribonukleinsäure
TWDS Total Weighted Digital Score
UV ultraviolett
V Volt
Vd Verteilungsvolumen
VO Verordnung
Vss Scheinbares Verteilungsvolumen im Steady-state
XL extra large
µg Mikrogramm
µl Mikroliter
µm Mikrometer
EINLEITUNG
1
1 EINLEITUNG
Moderhinke ist die weltweit bedeutendste Klauenerkrankung in der kommerziellen
Schafhaltung, verursacht durch eine Infektion der Klauen mit Dichelobacter nodosus
(D. nodosus). Nicht nur die hohe Kontagiosität, sondern auch die Übertragung des
Agens von anderen Tierarten, insbesondere Wildwiederkäuern und Rindern, auf das
Schaf erschweren die Bekämpfung. Infizierte Tiere entwickeln aufgrund der hoch-
gradigen Schmerzen durch die teils freiliegende Lederhaut innerhalb weniger Tage
Stützbeinlahmheiten, die folglich zu Leistungseinbrüchen führen.
Somit sind aus wirtschaftlichen und tierschützerischen Gesichtspunkten dringend
Empfehlungen für ein Therapie- bzw. Sanierungsprogramm auch in Deutschland
angezeigt. Entsprechende Modelle existieren in New South Wales (Australien), in der
Schweiz und werden aktuell in den skandinavischen Ländern entworfen. Während
diese Länder eine Sanierung der Betriebe anstreben, verfolgen die Kollegen in Groß-
britannien bis 2021 das Ziel einer Senkung der Moderhinke-Prävalenz aller positiven
Herden auf maximal 2 % (GREEN et al. 2011).
Die neuen Strategien stellen einen Paradigmenwechsel dar und widersprechen über
Generationen von Schäfern vermittelten Empfehlungen. Statt arbeitsaufwendiger
chirurgischer Klauenpflege und kaum mit dem Arzneimittelgesetz (AMG) zu
vereinbarenden Anwendungen von Klauenbädern stehen nun Einzeltier-
behandlungen auf Grundlage von systemischen Antibiotikagaben im Vordergrund.
Dabei haben nicht nur arbeitswirtschaftliche, sondern gerade auch tierschützerische
Gründe zu diesem Sinneswandel beigetragen, denn das bisher besonders in
deutschen Lehrbüchern empfohlene „radikale Entfernen unterminierten Klauenhorns“
führt zu untragbaren Schmerzen (GANTER et al. 2001).
Werden in der akuten Phase der Erkrankung die lahmen Tiere mit Antibiotika
behandelt, die im Entzündungsgebiet einen hohen Wirkstoffspiegel für mindestens
fünf Tage erzielen, so sinkt laut WASSINK et al. (2010) die Moderhinke-Prävalenz in
der Herde auf unter 2 %. Zahlreiche Antibiotika, z. B. Makrolide und Oxytetrazykline,
lieferten nach einmaliger Applikation überzeugende Ergebnisse.
Jedoch besitzt lediglich Tilmicosin eine Zulassung für die Moderhinketherapie mit der
Einschränkung, dass die alleinige Anwendung durch den Tierarzt erfolgen soll.
EINLEITUNG
2
Alternative Ansätze sind aus Sicht der Landwirte für die Durchführung eines betriebs-
wirtschaftlich vertretbaren Sanierungsprogramms dringend erforderlich.
So stellen beispielsweise die Untersuchungen von Inga Stamphøj mit Gamithromycin,
die Basis für das zukünftige dänische Sanierungsmodell dar (STAMPHØJ 2012).
Derzeitige Schwerpunkte in der Moderhinkeforschung zielen auf eine schnellere
Differenzierung zwischen benignen und virulenten Stämmen (KENNAN et al. 2010,
2011). Im Weiteren besteht ein großes Interesse an den immunologischen
Reaktionen, die im entzündeten Gewebe stattfinden (WANI u. SAMANTA 2005).
Daraus sich ergebende neue Erkenntnisse könnten die Effizienz und Verträglichkeit
von Vakzinen verbessern. Im parallelen Einsatz von Antibiotika und
bestandsspezifischen Impfstoffen sehen einige Wissenschaftler den Schlüssel zum
langfristigen Erfolg einer Sanierung (DUNCAN et al. 2012).
Primäres Ziel dieser Arbeit ist die Überprüfung der Hypothese von EGERTON et
al. (1968), dass eine einmalige antibiotische Behandlung ausreicht, um eine Herde
von virulenter Moderhinke zu sanieren. Hierfür wurden 123 mit Moderhinke infizierte
Schafe in der Klinik für kleine Klauentiere für einen Beobachtungszeitraum von
22 Tagen aufgestallt und mit sechs verschiedenen Antibiotika behandelt. Um den
Heilungserfolg vergleichend zu beurteilen, wurde in jedem der vier Versuchs-
durchgänge eine Gruppe, basierend auf dem Versuchsmodell von JALINEK et
al. (2001), durch ein Zinksulfat-Klauenbad mit Surfactantzusatz (Golden Hoof®,
Shepfair Products Ltd, Abergavenny, Großbritannien) geführt. Die in Neuseeland
erfolgte Genotypisierung der Tiere soll vergleichend die genetisch determinierte
Moderhinketoleranz von in Deutschland gezüchteten Schafrassen aufzeigen.
LITERATURÜBERSICHT
3
2 LITERATURÜBERSICHT
2.1 Moderhinke
2.1.1 Definition und weltweite wirtschaftliche Bede utung
Moderhinke ist eine hochkontagiöse, weltweit verbreitete Klauenerkrankung der
Wiederkäuer. Insbesondere tritt die Erkrankung bei Schafen und Ziegen auf, kann
aber auch bei Wildwiederkäuern, wie Hirschen und Mufflons, beobachtet werden
(SHENMAN 1962; SKERMAN et al. 1983). In der Literatur wird die
tierartübergreifende Übertragung des Erregers beschrieben (NATTERMANN et
al. 1993; BELLOY et al. 2007; ROGDO et al. 2012). Die Moderhinke ist beim Schaf
assoziiert mit dem Nachweis von D. nodosus und Fusobacterium necrophorum
(F. necrophorum) (BENNETT et al. 2009a). Jedoch ist bekannt, dass zahlreiche
prädisponierende Faktoren die Entstehung der Moderhinke zusätzlich beeinflussen
(siehe 2.1.2).
Leiden Tiere unter Unwohlsein und Schmerzen verursacht durch Lahmheiten (LEY et
al. 1989; HARWOOD et al. 1997), ergeben sich Konsequenzen für Tier und Mensch.
Abgesehen von den Schmerzen und den Bewegungsstörungen sind verringerte
tägliche Gewichtszunahmen, reduzierte Fruchtbarkeit der Böcke und Konzeptions-
raten der Muttertiere sowie erhöhte Lämmerverluste in der Aufzuchtphase sichtbare
Auswirkungen der Erkrankung für den Schäfer (WINTER 2004a). In der Aufzucht führt
Moderhinke zu einem Auseinanderwachsen der Mastgruppen.
Primär ist der Schäfer aus wirtschaftlichen Gesichtspunkten daran interessiert,
möglichst frühzeitig das Schlachtendgewicht bei den Lämmern zu erreichen. Dieser
Zeitpunkt kann sich bei einem Moderhinkeausbruch im Bestand um bis zu drei
Wochen verzögern (ANONYM 2003).
Unter der Annahme, dass in einem Bestand die Lahmheitsprävalenz zwischen sechs
und acht Prozent beträgt, wird in Großbritannien als Resultat aus der reduzierten
Trächtigkeitsrate, Geburten- und Absetzrate der Lämmer mit einem wirtschaftlichen
Verlust von 6 £ (ca. 7 €) pro erkranktes Muttertier kalkuliert (WASSINK et al. 2010).
Die Bedeutung der Moderhinke in Australien wird daran erkennbar, dass sie 2011 auf
LITERATURÜBERSICHT
4
Platz 8 der wichtigsten Erkrankungen im Nutztierbereich gelistet wurde (SACKETT et
al. 2011) und jährlich zu einem Produktionsverlust von ca. 10 % des Bruttogewinns
führt (MARSHALL et al. 1991).
2.1.2 Epidemiologie
Moderhinke ist eine hochkontagiöse Infektionskrankheit mit dem Potenzial, innerhalb
weniger Tage auf die gesamte Herde überzugreifen.
Das natürliche Habitat der Tiere (GRAHAM u. EGERTON 1968), Management-
maßnahmen (WASSINK et al. 2003; KUHLEMANN 2011) und die Genetik der Tiere
(EMERY et al. 1984) beeinflussen den Verlauf der Erkrankung. Konstante Temper-
aturen > 10 °C und lang anhaltender Niederschlag vo n 50 mm pro Monat (GRAHAM
u. EGERTON 1968) über zwei bis drei Monate begünstigen einen Ausbruch in der
Herde. Dadurch werden die lokalen Abwehrmechanismen der Klaue gehemmt
(GRAHAM u. EGERTON 1968) und ubiquitär existierende Bakterien, die am
Ursachenkomplex beteiligt sind, in ihrer Vermehrung gefördert (siehe 2.1.3).
Auf vielfältige Weise ziehen sich die Tiere, bedingt durch die Mazeration der
Epidermis, Läsionen im interdigitalen Spalt oder am Klauenhorn zu (BEHRENS et
al. 2001), woraufhin Bakterien ins Gewebe penetrieren können (ROBERTS u.
EGERTON 1969).
D. nodosus erfüllt nur in Synergismus mit den ubiquitär vorhandenen Bakterien die
klassischen Henle-Koch’schen Postulate eines Erregers (ROBERTS u. EGERTON
1969). Trotzdem wird D. nodosus aus folgenden Punkten als Hauptagens für
Moderhinke angesehen:
EGERTON et al. (1969) wiesen histologisch und kulturell D. nodosus in typischen
Läsionen der Klaue nach und belegten zusätzlich in ihren Untersuchungen von 2002,
dass nach einer erfolgreichen Eliminierung virulenter Stämme keine Neuinfektionen
mehr auftreten. Für die ätiologische Bedeutung von D. nodosus spricht auch, dass
nach einer Vakzinierung mit Antigenen von D. nodosus Serovaren die
Moderhinke-Prävalenz in der Herde reduziert wird (EGERTON u. ROBERTS 1971).
D. nodosus kann zehn Tage (BEVERIDGE 1941; MYERS et al. 2007) bis zwei
Wochen (AMTSBERG u. VERSPOHL 2011) unter aeroben Bedingungen überleben
LITERATURÜBERSICHT
5
und in abgeschnittenem Horn seine Infektiosität für sechs Wochen bewahren
(WHITTINGTON u. NICHOLLS 1995). Auf subklinisch infizierten Tieren, die eine nicht
zu unterschätzende Gefahr als Infektionsquelle für klauengesunde Tiere darstellen,
persistiert der Erreger über Monate (STEWART 1989; DEPIAZZI et al. 1998).
Übertragungen von D. nodosus erfolgen entweder direkt über den Kontakt zwischen
den Tieren oder auf indirektem Weg, z. B. auf kontaminierten Weiden (LEWIS 1998;
ABBOTT u. LEWIS 2005; AMTSBERG u. VERSPOHL 2011). Je mehr Tiere auf
engstem Raum zusammenleben, desto größer ist die Wahrscheinlichkeit einer
Aufrechterhaltung der Infektionskette (STEWART 1989).
Aber auch wild lebende Wiederkäuer, Pferde und Rinder übertragen proteasebildende
Bakterien, die bei gemeinsamer Haltung Moderhinke bzw. Moderhinke-ähnliche
Läsionen bei Schafen hervorrufen (COOK u. CUTLER 1995; BELLOY et al. 2007;
AMTSBERG u. VERSPOHL 2011; SARGISON u. SCOTT 2011).
Prinzipiell kann sich jedes Schaf mit D. nodosus infizieren. Das Auftreten von klinisch-
en Symptomen bzw. deren Schweregrad variiert aber innerhalb der Herde und wird
unter anderem von der Pathogenität der D. nodosus Stämme sowie der Genetik der
Rasse und des Einzeltieres determiniert (SKERMAN et al. 1988)
Zu den prädisponierten Rassen zählt unter anderem das Merinoschaf (EMERY et
al. 1984).
Die These, dass Tiere aufgrund ihres Alters, Geschlechts und Körpergewichts oder
der fehlenden Klauenpigmentierung anfälliger für eine Infektion sind, wird in neueren
Untersuchungen zur Epidemiologie kontrovers diskutiert (SCHULER 1996; KALER et
al. 2010b). Jedoch weisen ältere Tiere vergleichsweise höhergradige Veränderungen
an den Klauen auf als Lämmer (PUGH u. BAIRD 2012).
Der Mensch hat in der Vergangenheit über die Zucht feinwolliger Rassen indirekt zur
Verschlechterung der Hornqualität und somit zur weltweiten Verbreitung der Moder-
hinke beigetragen (HERRMANN 1963).
Eine ausreichende Mineralstoffversorgung mit Selen, Kupfer und Zink (KAMPHUES et
al. 2004; HALL et al. 2011), die Einhaltung einer Quarantänezeit von Zukäufen
(WASSINK et al. 2003; KALER u. GREEN 2009), die Genotypisierung von
Zuchtböcken (LOTTNER 2006; BISHOP u. MORRIS 2007), eine Veränderung der
LITERATURÜBERSICHT
6
Haltungsform (SCHLOLAUT 1996; ERLEWEIN 2002) oder die Verringerung der
Besatzdichte im Stall (STEWART 1989; KUHLEMANN 2011) minimieren das Risiko
einer Infektion.
2.1.2.1 Dichelobacter nodosus
2.1.2.1.1 Morphologie
D. nodosus ist ein gram negatives, gerades bis leicht gebogenes, anaerobes
Stäbchenbakterium (1,0 - 1,7 µm × 3,0 - 6,0 µm) mit einer zentralen Einschnürung
und terminalen Auftreibungen beider Enden (AMTSBERG u. VERSPOHL 2011). Über
die gesamte Oberfläche der Zellwand sind Fimbrien angeordnet.
2.1.2.1.2 Virulenzfaktoren und Pathogenitätsmechani smen
Neben extrazellulären, keratinolytischen Proteasen (KORTT et al. 1993) zählen die
Typ IV Fimbrien (ELLEMAN 1988) zu den Virulenzfaktoren von D. nodosus.
Eine Klassifizierung bakterieller Fimbrien (Typ I-V) erfolgt hinsichtlich ihrer
Morphologie und haemagglutinierenden Eigenschaften. D. nodosus besitzt Typ IV
Fimbrien mit folgenden Charakteristika (STROM u. LORY 1993; MYERS et al. 2007):
Sie
� sind Adhäsine, Mannose resistent und haemagglutinierend
� verleihen eine Polarität
� dienen der Fortbewegung
� haben als N-terminale Aminosäure N-Methylphenylalanin
� sind Bestandteile eines Sekretionssystems, das den Transport extrazellulärer
Proteasen aus dem Zytoplasma ermöglicht und die Endozytose extrazellulärer
DNA reguliert
Das K-Antigen, welches auf den Fimbrien lokalisiert ist, dient im Agglutinationstest zur
Bestimmung der Serogruppe (EGERTON 1973). Momentan sind zehn Serogruppen
von D. nodosus bekannt (A-I, M) (CHETWIN et al. 1991). Anhand einer
Sequenzierung der fim A-Untereinheit besteht die Möglichkeit einer Determinierung
der Serogruppen in die aktuell bekannten Serotypen (BHAT et al. 2012). ZHOU und
LITERATURÜBERSICHT
7
HICKFORD (2000a) gelang auf einer mit D. nodosus infizierten Klaue der Nachweis
von sieben verschiedenen Serotypen, die fünf bekannten Serogruppen zugeordnet
werden konnten. Das gleichzeitige Vorhandensein von mehreren Stämmen pro
Infektionsherd bestätigten auch andere Wissenschaftler (ZHOU et al. 2009; HILL et
al. 2010; BULLER et al. 2010). Sie sehen hierin unter anderem die Ursache für den
Misserfolg einer Sanierung auf Basis von Vakzinen begründet.
Die K-Agglutinationsepitope der zehn Serogruppen zeichnet eine hohe Spezifität aus,
die die Ausbildung einer Kreuzimmunität zwischen den Serogruppen verhindert
(CLAXTON et al. 1983).
Eine aus epidemiologischer Sicht essenzielle Beurteilung der Pathogenität der Isolate
ist mittels Serotypisierung nicht möglich. Die Bestimmung der Serogruppen, z. B. per
Objektträgeragglutination oder Polymerasekettenreaktion (PCR), ist letztendlich nur
aus epidemiologischen Gründen sowie für die Herstellung eines bestandsspezifischen
Impfstoffes und die anschließende Beurteilung der Ausbildung einer protektiven
Immunantwort nach Vakzinierung von Interesse (DHUNGYEL et al. 2002).
Unter den Anaerobiern besitzt D. nodosus das kleinste Genom mit einer Größe von
1.4 Mb (MYERS et al. 2007). MYERS et al. (2007) entdeckten, dass D. nodosus
selbst keine Aminosäuren synthetisieren kann, sondern extrazelluläre Proteine aus
der Umwelt aufnimmt. Gene, die für Proteasen kodieren, stammen vermutlich von
extrachromosomalen Quellen. Lediglich 3 % des Genoms dienen der Stoffwechsel-
regulation, während bis zu 20 % dem horizontalen Gentransfer zugesprochen werden
(MYERS et al. 2007).
Auf Letzterem beruht auch die Entstehung der vielen Serotypen. Im Weiteren verfügt
D. nodosus über die Fähigkeit der Serogruppenkonversion durch Transformation oder
homologe Rekombination (KENNAN et al. 2003). Beispielsweise führt ein Plasmid,
das das Gen für die Fimbrien-Untereinheit fim A von der Serogruppe G enthält, beim
Einbau in einen Serogruppen I Strang zur Konversion in Serogruppe G (ELLEMAN
1988). Dieses als „antigenic diversity“ bezeichnete Phänomen, mit dem es dem
Bakterium gelingt eine protektive Immunantwort des Tieres erfolgreich abzuwenden,
bestätigt die ambivalenten Resultate in Sanierungsprogrammen mit Vakzinen (WANI
u. SAMANTA 2006).
LITERATURÜBERSICHT
8
Weitere Formen des Gentransfers, die D. nodosus, wie auch anderen Bakterien
zugesprochen werden, sind der Antigenshift sowie die Transduktion entweder über
den Einbau von Bakteriophagen bzw. Phagen ähnlicher Strukturen in die DNA
(GRADIN et al. 1991) oder mittels bis dato für D. nodosus unbekannten
DNA-Transposons bzw. RNA-Rekombinationen (ZHOU u. HICKFORD 2000b).
2.1.3 Pathogenese und Klinik der Moderhinke
Einige Faktoren müssen erfüllt sein, bevor D. nodosus ins Stratum corneum der
Epidermis des Zwischenklauenspalts penetrieren kann. Hierzu zählt die Hemmung der
natürlichen Hautbarriere, die sich zum einen aus dem Vorhandensein einer
apathogenen bakteriellen Flora und zum anderen aus den oberflächlichen Schichten
der Epidermis zusammensetzt (AMTSBERG u. VERSPOHL 2011).
Mazerationen der Epidermis durch lang anhaltende Nässe oder Läsionen nach
Traumata begünstigen zunächst, die Entwicklung einer ovinen interdigitalen Dermatitis
(PARSONSON et al.1967).
F. necrophorum, ein anaerobes Bakterium fördert die anschließende Penetration von
D. nodosus in die tiefen Schichten der Epidermis.
Die synergistische Wirkung beider Erreger kommt in den Entdeckungen von
ROBERTS und EGERTON (1969) zum Ausdruck. Sie zeigten, dass das typische
klinische Bild der Moderhinke ausschließlich bei Anwesenheit beider Erreger auftritt.
Aktuellere Untersuchungen von BENNETT et al. (2009a) mit Vakzinen untermauern
diese These. Die für den progressiven Verlauf der Erkrankung verantwortliche
inflammatorische Reaktion beruht auf der Bildung von Leukotoxinen durch
F. necrophorum (NARAYANAN et al. 2003), die von D. nodosus gesteigert wird.
Aber auch andere ubiquitäre Keime, wie Arcanobacterium pyogenes (A. pyogenes),
fördern zum einen durch ihren Stoffwechsel und zum anderen durch die Freisetzung
von Enzymen und Toxinen den Aufbau eines für D. nododus optimalen anaeroben
Milieus (EGERTON et al. 1969).
Klinisch ist das Anfangsstadium der Moderhinke gekennzeichnet durch einen
ausschließlich auf die Haut des interdigitalen Spalts begrenzten Entzündungsprozess
(HURTADO et al. 1998), der bei einer Infektion mit Stämmen geringerer Pathogenität
LITERATURÜBERSICHT
9
nicht auf das Klauenhorn übergeht. Innerhalb von zwei bis drei Tagen entwickeln
infizierte Tiere eine Stützbeinlahmheit, die bei schwerwiegenden Fällen an allen vier
Gliedmaßen auftritt.
Der Verlust von Haaren, die Rötung der Epidermis und die beginnende Bildung bzw.
Ansammlung eines weißen, schmierigen Sekretes sind typische Zeichen einer akuten
Moderhinke.
Keratolytisch wirkende Proteasen, freigesetzt von D. nodosus, führen zur Auflösung
des Stratum spinosum und des Stratum granulosum und folglich zur Separation der
Lederhaut von der Epidermis (EGERTON et al. 1969; ROBERTS u. EGERTON 1969;
AMTSBERG u. VERSPOHL 2011). Die Unterminierungen des Klauenhorns können
am Übergang von der Epidermis des Zwischenklauenspalts zum axialen Wandhorn,
über das Ballen- und Sohlenhorn, bis hin zum abaxialen Wandhorn beobachtet
werden. Letzteres geht entweder mit einer chronischen Deformation der Klaue oder
dem vollständigen Verlust des Klauenschuhs einher (EGERTON et al. 1969; WINTER
2004a). Weiterhin kann nach vorsichtiger Freilegung der entstandenen Zwischen-
räume, z. B. mit einem Klauenmesser, die Ansammlung des zuvor beschriebenen
modrig riechenden Sekrets festgestellt werden.
Neben der Entwicklung von Brustbeinfisteln bei an Moderhinke erkrankten Schafen,
verursacht durch schmerzbedingt vermehrtes Liegen, sind die in Kapitel 2.1.1 bereits
erwähnten Folgen von Relevanz.
2.1.4 Nachweis der Pathogenität von Dichelobacter nodosus Stämmen
Eine Vielzahl an labordiagnostischen Methoden (WANI u. SAMANTA 2006), die
aktuell zur Detektion und Sequenzierung von D. nododus Stämmen zur Verfügung
stehen, bleiben Forschungsprojekten vorbehalten und finden in der Praxis keine
Anwendung.
Im Folgenden werden nur jene zwei Verfahren dargestellt, die eine Differenzierung der
Isolate hinsichtlich ihrer Pathogenität ermöglichen und als „Goldstandards“ in aus-
tralischen Eradikationsprogrammen vorgeschrieben sind (DHUNGYEL et al. 2012).
Hierbei handelt es sich einerseits um den von PALMER (1993) entwickelten
Gelatine-Gel-Test, der unter Berücksichtigung der Zeit und der Thermostabilität der
LITERATURÜBERSICHT
10
Proteasen eine Klassifizierung in virulente (stable, S) und benigne (unstable, U)
Stämme zulässt, und zum anderen um das Zymogramm, mit dem eine spezifischere
Differenzierung innerhalb der S- und U-Gruppen durch Auftrennung der Proteasen in
der Polyacrylamid-Gelelektrophorese erzielt wird (GORDON et al. 1985).
In Australien ist der Tierhalter ausschließlich bei Nachweis virulenter
D. nodosus-Isolate zur Sanierung der Herde unter Erfüllung der nationalen Vorgaben
verpflichtet. Die Kontrolle und die Behandlung der intermediären sowie benignen
Moderhinke sind mit hohen finanziellen Kosten verbunden, die in keinem Verhältnis
zum Erfolg der Sanierung stehen (DHUNGYEL et al. 2008).
Einige Wissenschaftler erheben Zweifel an der Sensibilität der Virulenztests und
empfehlen weiterhin die klinische Beurteilung aller Klauen (EGERTON u.
RAADSMA 1993; DHUNGYEL et al. 2012). Laut HOSIE (2004) müssen diesbezüglich
mindestens 30 Tiere untersucht werden, um differenzialdiagnostisch ähnliche
Klauenerkrankungen sicher auszuschließen. Andere Wissenschaftler (EGERTON u.
PARSONSON 1969; MARSHALL et al. 1991) messen der kontinuierlich
durchgeführten Beurteilung der Klauen im Abstand von 14 Tagen eine große
epidemiologische Bedeutung zu. In diesem Zeitraum können, je nach Vermögen des
Isolats zur Proteasebildung, Ablösungen am Klauenhorn entstehen.
Die Erhebung von Klauenscores ist momentan in vielen Ländern das einzige Hilfs-
mittel zur Einschätzung der Pathogenität der Dichelobacter-Isolate unter Feldbe-
dingungen.
Zeigen lediglich <1 % der Schafe Separationen am Klauenhorn, ist nach STEWART
(1989) die Herde mit einem benignen Serotyp infiziert, während Unterminierungen bei
über 10 % der Schafe auf das Vorhandensein eines bösartigen (virulenten) Stamms
hinweisen. Die intermediäre Verlaufsform liegt vor, wenn bei 1 % bis 10 % der Schafe
einer Herde Unterminierungen am Klauenhorn festgestellt werden können.
2.2 Prophylaxe, Behandlung und Bekämpfung
2.2.1 Resistenzzucht
Zahlreiche Studien (EMERY et al. 1984; BULGIN et al. 1988) belegen, dass ein
Zusammenhang zwischen der Schafrasse und dem Schweregrad der klinischen
LITERATURÜBERSICHT
11
Symptome besteht. Grundsätzlich ist eine Übertragung von D. nodosus auf jedes
Schaf möglich. Jedoch variiert, unabhängig von der Virulenz des Erregers, das
klinische Bild zwischen den Tieren einer Herde, da in jedem Körper unterschiedliche
immunologische Reaktionen nach einer D. nodosus Infektion stattfinden.
In der Literatur wird bei Moderhinke sowohl der Begriff der Toleranz als auch der
Resistenz angeführt. Die Toleranz ist die Eigenschaft eines Tieres trotz Infektion,
bspw. mit D. nodosus, keine klinischen Symptome zu entwickeln. Im Gegensatz
hierzu werden resistente Tiere in Folge ihrer genetisch determinierten Nichtempfäng-
lichkeit gegenüber dem Erreger mit geringerer Wahrscheinlichkeit infiziert (BISSET u.
MORRIS 1996).
Die Zucht von Moderhinke toleranten Tieren kann der Tierbesitzer auf drei
verschiedenen Wegen verfolgen: einerseits unter der Berücksichtigung der Horn-
qualität im Exterieur, des Weiteren über die Genotypisierung von Neuzukäufen oder
durch die Merzung von therapieresistenten Tieren (STROBEL 2009).
Die Hornqualität wird neben externen Faktoren von der Pigmentierung der Klaue und
der Zahl der Hornröhrchen beeinflusst. Beides ist genetisch determiniert und wurde in
der Vergangenheit im Exterieur nicht berücksichtigt. Untersuchungen von
ERLEWEIN (2002) und THOMS (2006) an Merinoland- und Rhönschafen bestätigen
einen weiteren genetischen Zusammenhang zwischen den Parametern Klauenhärte,
Diagonalenlänge sowie Dorsalwandlänge der Klauen und der Prädisposition zu
Klauenerkrankungen. Diese Parameter könnten ihrer Ansicht nach auch vom Tier-
besitzer beurteilt werden.
Die Genotypisierung stellt eine Selektionsmethode dar, mit der eine Aussage
bezüglich der Toleranz der Nachkommenschaft eines Tieres gegenüber einer
Infektion mit D. nodosus, auf Basis der Bestimmung des DQA2 Gens auf dem ovinen
MHC2 (Major Histocompatibility Complex), getroffen wird. Die Toleranz leitet sich von
der genetisch determinierten und auf die Nachkommen des Tieres weiter vererbten
immunologischen Reaktion auf eine Infektion ab. Innerhalb des DQA2 Gens und der
DQA2 like Genorte besteht ein hoher Polymorphismus mit bereits über 20 detektierten
Allelkombinationen (HICKFORD et al. 2006). Die Arbeitsgruppe von
HICKFORD (2001) entwickelte den „Footrot Gene Marker Test“ (FGMT) auf
LITERATURÜBERSICHT
12
Grundlage der in Neuseeland gezüchteten Schafrassen. Pro Tier werden die beiden
Allele auf dem diploiden Chromosomensatz ermittelt und den Scores von 1 bis 5
zugeordnet, aus denen sich die Empfänglichkeit der Schafe ableiten lässt, d.h., der
Deszendent eines Tieres mit der Zahlenkombination 5,5 besitzt laut Aussage von
HICKFORD et al. (2006) eine 10-mal höhere Wahrscheinlichkeit an Moderhinke zu
erkranken als ein Tier mit den Werten 1,1. Da die Genotypisierung die
Wahrscheinlichkeit der Nachkommen zur Ausbildung von klinischen Symptomen
aufzeigt, wird über die züchterische Selektion der Aufbau einer Moderhinketoleranz
innerhalb der Herde und langfristig eine Senkung der Prävalenz erzielt.
Schlussendlich kann der Landwirt mit der Behandlung infizierter Tiere indirekt ins
Zuchtprogramm eingreifen. Demnach sollten jene Schafe, die nach einer Therapie
keine Verbesserung im klinischen Bild aufweisen oder trotz Impfung an Moderhinke
erkranken vom Rest der Herde getrennt und von der Zucht ausgeschlossen werden.
Tiere, die sofort Symptome zeigen bzw. mit Rezidiven auffallen, halten den Infektions-
druck in der Herde aufrecht und müssen ebenfalls den Betrieb verlassen
(STOBEL 2009).
2.2.2 Immuntherapie bzw.–prophylaxe
Mit der Vakzination wird das Ziel der Ausbildung einer protektiven Immunantwort
gegen D. nodosus verfolgt. Der multivalente Impfstoff Footvax® (MSD Animal Health,
Intervet Deutschland GmbH, Unterschleißheim) steht sowohl für die Therapie als auch
Prävention zur Verfügung. Footvax® deckt 9 der 10 Serogruppen (A-I) ab und bietet
nach erfolgreicher Grundimmunisierung einen protektiven Immunschutz für max. 12
Wochen (LAMBELL 1986; HUNT et al. 1994; RAADSMA et al. 1994).
Die Wirksamkeit einer Immuntherapie überzeugte aufgrund der ambivalenten
Ergebnisse in Feldversuchen weder die Tierbesitzer noch die Forscher (GLENN et al.
1985; LAMBELL 1986; LIARDET et al. 1986), was darauf zurückzuführen ist, dass
keine ausreichend hohen Antikörperspiegel gegen alle Serogruppenantigene
gleichzeitig ausgebildet werden (SCHWARTZKOFF 1993; HUNT et al. 1994;
RAADSMA et al. 1994). Der Nachweis der Antigenkonkurrenz zwischen den
Serogruppen trug zur Entwicklung bestandsspezifischer Vakzinen bei. Dass eine
LITERATURÜBERSICHT
13
Herdensanierung mittels der Anwendung von bivalenten Impfstoffen möglich ist,
zeigten die Studienergebnisse von DHUNGYEL et al. (2008) und EGERTON et
al. (2002).
Weitere unerwünschte Effekte, die in Zusammenhang mit der Anwendung von
Impfstoffen beobachtet werden, stellen lokale Impfstoffreaktionen an der Injektions-
stelle dar. Footvax® enthält als Adjuvans ein Mineralöl, das die Ausbildung einer
nachhaltigen humoralen Immunantwort stimuliert, aber auch zu Umfangsver-
mehrungen, Abszessen und Fisteln an der Injektionsstelle führen kann (MULVANEY
et al. 1984; LAMBELL 1986; JANETT 1993; ABOTT u. LEWIS 2005). Beispielsweise
wurde in den Felduntersuchungen von LOTTNER (2006) zur Bekämpfung der
Moderhinke mittels Vakzinen die Wirksamkeit eines bestandsspezifischen Impfstoffs
mit Footvax® verglichen und festgestellt, dass 4 Wochen nach bestimmungsgemäßen
Gebrauch von Footvax® 44,24 % der Schafe lokale Impfstoffreaktionen zeigten. Im
Gegensatz dazu führte die stallspezifische Vakzine, die mit Aluminiumhydroxid ein
vergleichsweise mildes Adjuvans enthielt, zu einer um 30 % niedrigeren Inzidenzrate
an palpatorischen Injektionsreaktionen. Dabei wurde drei Monate nach der Grund-
immunisierung zwischen den beiden Impfstoffen kein signifikanter Unterschied im
Hinblick auf die Moderhinke-Prävalenz ermittelt.
2.2.3 Topische Behandlungen
Hierzu zählt die Entfernung sämtlichen unterminierten Klauenhorns mit evtl. an-
schließendem Aufsprühen einer antibiotikahaltigen Lösung oder das Treiben der Tiere
durch ein Klauenbad. Beides wird gewöhnlich in Form einer Herdenbehandlung und
oft in Kombination durchgeführt. Viele aktuelle Studien widerlegen die lang geglaubte
Hypothese, dass eine großzügige Entfernung unterminierten Klauenhorns den
Heilungsverlauf beschleunigt (WASSINK et al. 2003; GREEN et al. 2007; KALER u.
GREEN 2008b). Vielmehr erhöht das Ausschneiden das Risiko von Rezidiven und
Neuinfektionen (HOSIE 2004) und trägt zur Entwicklung von Granulomen bei
(WINTER 2004b). Ein zur Absicherung der Diagnose angewandter Klauenpflege-
schnitt ist somit dem blutigen Ausschneiden vorzuziehen. Als Folgebehandlung zur
Antibiotikagabe empfiehlt WINTER (2004b), frühestens fünf Tage nach
LITERATURÜBERSICHT
14
Therapiebeginn das abgelöste Klauenhorn vorsichtig freizulegen. Gezielt am Einzeltier
eingesetzte Klauenpflege dient aber weiterhin der Vorbeugung von Klauenerkrank-
ungen (WINTER 2004b).
Aktuell ist in Deutschland ein oxytetrazyklinhaltiges Klauenspray zur Therapie von
Klauenerkrankungen zugelassen.
„Bewährte“ Klauenbadlösungen enthalten Zinksulfat mit einem Tensidzusatz,
Formalin, Kupfersulfat oder wasserlösliche Antibiotika, wie z. B. Tetrazykline. In
Deutschland ist kein Tierarzneimittel (s.o.) für die Anwendung als Klauenbad
zugelassen. Der Erwerb eines in Europa zugelassenen Wirkstoffs, wie z. B. Zinksulfat
(Golden Hoof plus®, Shepfair Products Ltd, Abergavenny, Großbritannien), darf nach
dem aktuellen Arzneimittelgesetz (§ 56a) nur bei Vorliegen eines Therapienotstands
und ausschließlich durch den Tierarzt erfolgen (EMMERICH et al. 2013).
Formaldehyd, Kupfer- und Zinksulfat sind apothekenpflichtige Stoffe. Die Herstellung
eines Klauenbades auf tierärztliche Verschreibung in der öffentlichen Apotheke für die
Behandlung der Moderhinke, welches einen der aufgeführten Wirkstoffe enthält, ist
nur bei Therapienotstand rechtmäßig. Im Vergleich hierzu können zinksulfat- oder
kupfersulfathaltige Klauenbäder im Therapienotstand für die Prophylaxe der
Moderhinke beim Schaf, z. B. zur Härtung des Klauenhorns oder Desinfektion, durch
den Tierarzt verschrieben und in der Apotheke hergestellt werden, da die Wirkstoffe in
diesem Fall nicht dem § 44 Absatz 1 bzw. 2 Nummer 5 des AMG unterliegen
(KLEIMINGER 2012).
Abzugrenzen von den Tierarzneimitteln sind nach der Biozid-Richtlinie 98/8/EG bzw. -
Verordnung (EG) 528/2012 registrierte Substanzen, wie Formalin oder DragonhydeTM
(T-HEXX Animal Health, Branchburg, New Jersey, USA), die Bakterien abtöten, aber
nicht zur Behandlung der Moderhinke eingesetzt werden dürfen.
Neben den arzneimittelrechtlichen Einschränkungen spielt die Entsorgung der
verwendeten Lösungen aus Sicht des Naturschutzes eine limitierende Rolle.
JELINEK und DEPIAZZI (2003) mussten ihre zwei Jahre zuvor aufgestellte These
zum Sanierungserfolg mit Zinksulfatklauenbädern rückwirkend einschränken.
Demnach sind Klauenbäder lediglich zur Behandlung von interdigitalen Läsionen und
LITERATURÜBERSICHT
15
als vorbeugende Managementmaßnahme empfehlenswert, weil kein ausreichender
Wirkstoffspiegel in den tiefen Schichten des Klauenhorns erreicht wird.
Klauenbäder führen nur zu befriedigenden Ergebnissen, wenn der Landwirt über
optimale Umsetzungsmöglichkeiten vor Ort verfügt. Dazu zählen laut LOTTNER und
GANTER (2004) ausreichend Personal, ein Klauenbad mit Treibegang, das Ansetzen
der Lösung in der geforderten Konzentration, ein an das Klauenbad anschließendes
zehn Minuten langes Aufstallen der Tiere auf befestigtem Boden und der Austrieb auf
zuvor mindestens zwei Wochen nicht beweidetes Grünland.
2.3 Parenterale Antibiose in der Moderhinketherapie
2.3.1 Parenterale Antibiose
Bereits 1966 zeigten EGERTON und PARSONSON den Erfolg einer Antibiotika-
therapie nach einmaliger Anwendung eines Streptomycin/Penicillin Präparats.
Zwischenzeitlich wurde dieser Ansatz, insbesondere durch die Entwicklung von
Impfstoffen und die im Verhältnis zu den Antibiotika preiswerteren topischen
Behandlungsverfahren, nicht weiter verfolgt. In den letzten Jahren fand ein erneuter
Wandel in der Moderhinkebehandlung zugunsten der Antibiotikatherapie statt, der vor
allem auf die Studienergebnisse der Arbeitsgruppe um GREEN (2007, 2011)
zurückzuführen ist. Penicillin in Kombination mit Sulfonamid waren die ersten
Antibiotika, welche mit Erfolg bei der Moderhinke des Schafes angewandt wurden
(COPPINI 1951, ŠTERK 1956).
EGERTON und PARSONSON (1966) führten vor Beginn ihrer klinischen Unter-
suchungen zunächst Resistenztests durch, um die Wirksamkeit der Antibiotika zu
ermitteln. Demnach sind Konzentrationen von 0,3 bis 1 U/ml Penicillin bzw. 10 µg/ml
Streptomycin im Serum erforderlich, um eine ausreichend bakterizide Wirkung zu
erzielen. Zusätzlich stellten sie fest, dass innerhalb von vier bis sechs Stunden nach
Applikation des Medikamentes im Entzündungsgebiet die gleichen Wirkstoffkonzen-
trationen wie im Serum vorliegen. Auf Grundlage dieser Erkenntnisse konnten acht
von zehn mit D. nodosus infizierte Schafe nach einmaliger Gabe von Penicillin
(70000 I.E.) und Streptomycin (70 mg/kg KGW) erfolgreich therapiert werden. Höhere
Konzentrationen der Antibiotika bzw. deren mehrmalige Anwendung am Tier
LITERATURÜBERSICHT
16
verbesserten den Behandlungserfolg nicht. Zwischen dem 5. bis 21. Tag nach der
Applikation ist laut EGERTON und PARSONSON (1966) adspektorisch an der Klaue
erkennbar, ob mit einer vollständigen Genesung des Tieres zu rechnen ist. Zur
Untermauerung ihrer Ergebnisse wandten sie die Antibiotika zusätzlich unter
Feldbedingungen an. In Kombination mit einem Formalinbad heilten bei 96,2 % der
Tiere die Läsionen an den Klauen ab, während bei jedem zweiten Tier in der
unbehandelten Gruppe nach zwei Monaten weiterhin Lahmheiten zu beobachten
waren. In Zusammenarbeit mit PARSONSON und GRAHAM stellte EGERTON (1968)
die Hypothese auf, dass mittels einer einmaligen antibiotischen Behandlung unter den
nachstehend genannten Voraussetzungen die Moderhinke-Prävalenz einer Herde
signifikant reduziert wird. Dazu zählt die Anwendung eines Antibiotikums, welches
neben einer bakteriziden Wirkung die Fähigkeit besitzt, für mindestens 18 Stunden im
Entzündungsgebiet eine therapeutisch wirksame Konzentration zu erreichen.
Erythromycin und Streptomycin in Kombination mit Penicillin erfüllten laut EGERTON
et al. (1968) diese Kriterien. Dass nicht nur die Wahl des Antibiotikums, sondern auch
die Umweltbedingungen den Therapieerfolg beeinflussen, wird in den Empfehlungen
von EGERTON et al. (1968) konkretisiert. Ihrer Ansicht nach sollten die Schafe
24 Stunden vor der Antibiotikabehandlung auf einen trockenen Untergrund aufgestallt
bzw. der Behandlungsbeginn in einen Zeitraum mit geringer Niederschlags-
wahrscheinlichkeit gelegt werden. Aus ihren Feldversuchen ziehen die Forscher das
Resümee, dass die Pathogenität des D. nodosus Stamms über die Art der
Behandlung entscheidet; d.h. begrenzen sich die klinischen Symptome auf den
interdigitalen Spalt, befürworten sie eine topische Behandlung in Form eines
vorsichtigen Klauenschnitts mit anschließendem Klauenbad, während bei
Unterminierungen eine parenterale Antibiotikatherapie erforderlich ist.
WEBB WARE et al. (1994) bestätigten unter Feldbedingungen die klinischen
Untersuchungen von EGERTON et al. (1968) und stellten zusätzlich fest, dass
Erythromycin ab einer Dosierung von 7 mg/kg KGW im Vergleich zu
Penicillin/Streptomycin höhere Heilungsraten erzielt.
Eine Kombination aus Lincomycin/Spectinomycin im Verhältnis 1:3 hat sich ebenfalls
als wirkungsvoll erwiesen. Dabei war kein signifikanter Unterschied im Vergleich zum
LITERATURÜBERSICHT
17
Penicillin feststellbar (VENNING et al. 1990). VENNING et al. (1990) schlussfolgerten
aus den Studienergebnissen, dass weder die mehrfache Injektion des Antibiotikums
noch zusätzliches Klauenbaden im Vergleich zur einmaligen Antibiotikabehandlung
das klinische Bild signifikant verbessern.
Weitere Untersuchungen von ŠTERK (1960) mit einem Langzeittetrazyklinpräparat,
welches 3-mal im Abstand von 48 Stunden in einer Dosierung von 150 mg/Tier
intramuskulär injiziert wurde, führten zu einer Genesung aller acht Probanden. Auch
GROGONO-THOMAS et al. (1994) ermittelten in ihrer Studie nach einmaliger
parenteraler Applikation eines Langzeitoxytetrazyklins hohe Heilungsraten von 89 bis
100 %. Im anschließenden Feldversuch bestätigten sich ihre klinischen Ergebnisse,
indem 94 % der Probanden nach einmaliger Oxytetrazyklinbehandlung in Verbindung
mit einem Klauenbad geheilt wurden, während das ausschließliche Baden der Klauen
in Zinksulfat zu signifikant schlechteren Klauenbefunden führte.
Dass die Anzahl an infizierten Klauen und der Schweregrad der Erkrankung Einfluss
auf die Effektivität des Antibiotikums haben, stellten JORDAN et al. (1996) fest. Hierfür
wurden die Heilungsraten nach Applikation von drei verschiedenen Antibiotika - einer
Kombination aus Penicillin (250 mg/ml) und Streptomycin (250 mg/ml), einem
Langzeitoxytetrazyklinpräparat in der Konzentration von 200 mg/ml und einer
Mischung aus Lincomycin (50 mg/ml) und Spectinomycin (100 mg/ml) - miteinander
verglichen. Nachhaltige Effekte bei interdigitalen Läsionen wurden besonders durch
Lincomycin in Verbindung mit Spectinomycin (87,5 %) erzielt, während Unter-
minierungen am Klauenhorn am besten (69,7 %) unter einer Oxytetrazyklinbe-
handlung ausheilten. Des Weiteren sollten nach Ansicht der Autoren ab drei infizierten
Gliedmaßen pro Tier Tetrazykline angewandt werden.
Im Feldversuch von ABBOTT und EGERTON (2003) konnte das Ziel einer
Moderhinkesanierung mittels Antibiotikatherapie nicht umgesetzt werden. Dies
begründeten die Wissenschaftler zum einen mit dem Vorhandensein von
intermediären D. nodosus Stämmen in der Herde und zum anderen mit der
Unterlassung einer Klauenbeurteilung vor Therapiebeginn. Regelmäßig durchgeführte
Inspektionen der Klauen sind ihrer Ansicht nach von essenzieller Bedeutung um die
Anzahl rezidivierender und subklinisch erkrankter Tiere in der Herde zu verringern.
LITERATURÜBERSICHT
18
Antibiotika wurden vornehmlich bei der bösartigen Form der Moderhinke eingesetzt.
Aus den Studienergebnissen der Arbeitsgruppen von MOORE et al. (2005), GREEN
et al. (2007), WASSINK et al. (2010) und KALER et al. (2010b) zogen die Wissen-
schaftler das Fazit; Antibiotika sofort nach Erkennung einer Lahmheit, unabhängig
vom Schweregrad der Erkrankung zu applizieren.
Schäfer, die innerhalb von drei Tagen alle lahmen Tiere mit Antibiotika systemisch
versorgen, können mittels dieses Behandlungsverfahrens eine Senkung sowohl der
Lahmheitsinzidenz als auch -prävalenz auf durchschnittlich 2 % erzielen (WASSINK et
al. 2003; KALER und GREEN 2008b).
Eine Verbesserung des klinischen Bildes ist bei 90 % jener Tiere, die ausschließlich
mit Antibiotika behandelt wurden, innerhalb von zehn Tagen erkennbar (KALER et
al. 2010a). Im Vergleich hierzu führten Klauenschnitte in den Untersuchungen von
KALER et al. (2010a) lediglich zu einer Heilungsrate von < 30 %. Die schlechten
Erfolgsquoten nach dem Ausschneiden konnten rückwirkend durch eine parenterale
antibiotische Behandlung nicht mehr beeinflusst werden. Jedoch führte die
anschließende Klauenpflege zu einem Absinken des Anteils der Tiere mit chronischen
Klauendeformationen und die Moderhinke-Inzidenz in der Herde nahm kontinuierlich
ab. Laut KALER et al. (2010a) sollte die Klauenpflege frühestens am fünften Tag nach
der letzten Antibiotikagabe erfolgen. Während in dieser Studie parallel zu den
Antibiotika verabreichte nichtsteroidale Antiphlogistika (NSAID) die Heilungsrate nicht
signifikant beeinflussten, wurde nachgewiesen, dass ausschließlich Antibiotika mit
einem Wirkungsspiegel im Serum von mindestens 72 h einen nachhaltigen Effekt
hervorrufen. In diesem Zusammenhang wurden von vielen Praktikern weitere
Wirkstoffgruppen in der Moderhinketherapie eingesetzt, insbesondere die häufig bei
der Digitalen Dermatitis des Rindes verwendeten neueren Vertreter der Makrolide.
Klinische Studien mit Draxxin® (Tulathromycin, Pfizer, Karlsruhe) bei der Digitalen
Dermatitis des Rindes zeigten Heilungsraten von 60 bis 83,3 % (U.S. Food and Drug
Administration 2008). In England werden Tulathromycin und Gamithromycin aufgrund
ihrer langen Halbwertszeiten bevorzugt von den Schäfern bei Klauenerkrankungen
eingesetzt (GREEN et al. 2011). Die bis dato einzigen Untersuchungsergebnisse mit
Gamithromycin präsentierte Inga Stamphøj auf dem DVG-Kongress für kleine
LITERATURÜBERSICHT
19
Wiederkäuer 2012 auf Rügen (STAMPHØJ 2012). Mit der Dosierung, die für das Rind
zugelassen ist (6 mg/kg KGW), konnte in 23 von 29 Beständen eine Sanierung der
akuten Moderhinke erfolgreich umgesetzt werden.
Einen weiteren Beweis für die Effektivität von Gamithromycin bei Klauenerkrankungen
stellen die Studien von SARGISON (2011) dar. In seinem Fallbericht wird die
erfolgreiche Behandlung der atypischen Moderhinke, verursacht durch Bacteroides
melaninogenicus (B. melaninogenicus) beschrieben. B. melaninogenicus zählt zu-
sammen mit Treponema spp., F. necrophorum, Porphyromonas levii (P. levii) und
Campylobacter spp. zum Ursachenkomplex der Digitalen Dermatitis des Rindes
(BERG u. LOAN 1975; COOK 1995; GOMEZ et al. 2012; DÖPFER et al. 2012).
Das einzige derzeit für die Moderhinketherapie in Deutschland zugelassene Makrolid
ist Tilmicosin. Abgeleitet aus den eigenen Feldversuchen mit Tilmicosin bei der
Kontagiösen Ovinen Digitalen Dermatitis (Contagious Ovine Digital Dermatitis CODD),
vermutete WATSON (1999), dass eine Behandlung mit dem Antibiotikum auch bei der
Moderhinke zur Verbesserung des klinischen Bildes führt. Studien, die den Erfolg
einer Moderhinketherapie mit verschiedenen Makroliden vergleichend darstellen,
liegen nicht vor.
Auch Cephalosporine und Fluorchinolone gewinnen bei der interdigitalen Dermatitis
des Rindes immer mehr an Bedeutung (RUTTER et al. 2001; KAUSCHE u. ROBB
2003). So zeigten in einer kanadischen Studie mit Ceftiofur als kristallin freie Säure
99,5 % der zuvor erkrankten Rinder 14 Tage später keine klinisch sichtbaren Läsionen
mehr (VAN DONKERSGOED et al. 2008).
Eine aktuelle Studie mit Fluorchinolonen belegt deren Wirksamkeit gegenüber
Moderhinke. KALER et al. (2012) wandten ein Enrofloxacin- und Langzeitoxytetra-
zyklinpräparat vergleichend bei der akuten sowie chronischen Form der Moderhinke
an. Signifikante Unterschiede zwischen den beiden Antibiotika im Hinblick auf eine
klinische Verbesserung konnten nicht ermittelt werden. Jeweils nach durchschnittlich
sieben Tagen bei der akuten bzw. 14 bis 21 Tagen bei der chronischen Form der
Moderhinke bestand kein Hinweis mehr auf einen lokalen Entzündungsprozess.
LITERATURÜBERSICHT
20
2.3.2 Voraussetzungen für ein Antibiotikum zur Bekä mpfung der Moderhinke
Abgeleitet aus den Ergebnissen der in Kapitel 2.3.1 beschriebenen Studien und den
betriebswirtschaftlichen Möglichkeiten für den Schäfer sollte ein Antibiotikum bei der
Moderhinketherapie über folgende Eigenschaften verfügen:
� schnelle Anflutung im entzündeten Gewebe, Cmax innerhalb von 5 bis 6 h nach
Applikation, gute Gewebegängigkeit, hohes Verteilungsvolumen (Vd > 0,25 l/kg)
� lange Halbwertszeit und lang anhaltender postantibiotischer Effekt
� bakterizider Wirkungsmechanismus und breites Wirkungsspektrum
� nachgewiesene Wirksamkeit gegenüber D. nodosus und F. necrophorum im
Resistenztest oder aus Studien unter Feldbedingungen
� geringe Resistenzentwicklung
� ungefährliche Anwendung für Mensch und Tier in überschaubarer Dosierung
� hohe therapeutische Breite
� preisgünstig bei geringer Wartezeit für essbare Gewebe und Milch
Entscheidend für den Therapieerfolg ist laut KALER et al. (2010a, 2012) die Aufrecht-
erhaltung eines therapeutischen Wirkstoffspiegels über einen Zeitraum von
mindestens 72 h bei der akuten und von 12 Tagen bei der chronischen Form der
Moderhinke. Dieses Ziel kann der Schäfer entweder mittels der Verwendung eines
Langzeitpräparates oder durch mehrmalige Injektionen erzielen.
2.3.3 Rechtsgrundlage für den Einsatz von Antibioti ka
Die Rechtsgrundlage für die Anwendung von Arzneimitteln bei lebensmittelliefernden
Tieren stellen insbesondere das Arzneimittelgesetz (§ 56a), die EU-Verordnungen
(VO) 470/2009 und VO 37/2010 sowie die VO über die tierärztliche Hausapotheke
(TÄHAV) und die Tierhalter Arzneimittel Nachweisverordnung dar. Das einzig
zugelassene Injektionspräparat zur Behandlung der Moderhinke ist Tilmodil®
(Injektionslösung für Schafe und Rinder, WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher
Tierärzte eG, Garbsen). Folglich besteht in Deutschland im Hinblick auf die
Moderhinke des Schafes kein Therapienotstand und die Umwidmung anderer
LITERATURÜBERSICHT
21
Antibiotika ist laut § 56a des AMG ausschließlich nach dem Nachweis einer
unzureichenden Wirksamkeit von Tilmicosin zulässig. Oxytetrazyklin ist lediglich in
Sprays zur lokalen Anwendung der Moderhinke und zur Wundpflege zugelassen.
2.3.4 Pharmakologische Eigenschaften verwendeter An tibiotika
2.3.4.1 Makrolide im Vergleich
Makrolide besitzen einen charakteristischen zentralen 14 bis 16 gliedrigen Lactonring.
Über glykosidische Bindungen ist dieser Lactonring entweder mit mindestens zwei
Neutral- oder Aminozuckern verknüpft (PRESCOTT et al. 2000a; KROKER et
al. 2007). Abgeleitet nach BRYSKIER et al. (1993) können die in der vorliegenden
Studie angewandten Makrolide; Tulathromycin, Gamithromycin, Tilmicosin und
Tildipirosin, entsprechend der Anzahl von Kohlenstoffatomen im Lactonring, in
verschiedene Untergruppen klassifiziert werden (siehe Abb. 1).
Makrolid Antibiotika
14-gliedriger Lactonring 15-gliedriger Lactonring 16-gliedriger Lactonring16-gliedriger Lactonring15-gliedriger Lactonring14-gliedriger Lactonring
Tilmicosin
natürlich vorkommend
halbsynthetisch natürlich vorkommend
halbsynthetisch
Tildipirosin
halbsynthetisch
Gamithromycin
Tulathromycin(zu 90%)
Abb. 1: Makrolide, die in der vorliegenden Studie angewandt wurden (Einteilung
modifiziert nach BRYSKIER et al. 1993)
LITERATURÜBERSICHT
22
Tulathromycin liegt in wässrigen Lösungen zu 90 % als 15-gliedriges Ringazalid und
zu 10 % in 13-gliedriger Ringform vor (BENCHAOUI et al. 2004).
Eine weitere Zuordnung ist bspw. anhand der Anzahl an Aminogruppen durchführbar.
Demnach zählt Tulathromycin als erster Vertreter zu den Triameliden, was mit einer
erhöhten Wirksamkeit gegenüber gram-negativen Bakterien einhergeht (LETAVIC et
al. 2002).
2.3.4.1.1 Pharmakodynamik
Makrolide sind vorwiegend bakteriostatische Antibiotika mit einem breiten
Wirkungsspektrum gegen gram-positive und einige gram-negative Bakterien
(BURROWS 1980). In hohen Wirkstoffkonzentrationen verabreicht, tritt eine irre-
versible Schädigung des Agens ein, die auch gegen Anaerobier, Mykoplasmen und
intrazelluläre Erreger gerichtet ist (PRESCOTT et al. 2000a). In der Veterinärmedizin
werden sie insbesondere zur Therapie und Metaphylaxe von respiratorischen
Erkrankungen in Schweine- und Rinderbeständen eingesetzt (TRAEDER u.
GROTHUES 2004; BENCHAOUI et al. 2004).
Die bakteriostatische Wirkung beruht auf einer reversiblen Hemmung der
Proteinsynthese durch kovalente Bindung an Proteine des Peptidyltrans-
ferase-Zentrums. Somit zählen die Makrolide, neben den Lincosamiden und
Streptograminen, zu der MLS Gruppe (Makrolid-Lincosamid-Streptogramin Gruppe),
die als gemeinsamen Angriffspunkt die 50 s Untereinheit der Ribosomen nutzen
(KROKER et al. 2007). Ausgelöst durch eine Störung in der Elongationsphase wird die
Translokation der Peptidyl-t-RNA von der Akzeptor- zur Donatorstelle verhindert,
welches zur dauerhaften Bindung der Peptidyl-t-RNA an die Akzeptorstelle führt.
Wichtig in diesem Zusammenhang ist die Aufrechterhaltung einer ausreichend hohen
Wirkstoffkonzentration über einen festgelegten Zeitraum (NIGHTINGALE 1997), damit
das Medikament in jedem Zyklusabschnitt der Proteinsynthese an die Ribosomen
binden kann.
Ein für Makrolide nachgewiesener postantibiotischer Effekt gegen bestimmte
Bakterienarten, z. B. Streptokokken, begünstigt trotz fallenden Konzentrations-
spiegels unter den MHK-Wert zusätzlich die Hemmung des Bakteriumwachstums
LITERATURÜBERSICHT
23
(CARBON 1998). Aufgrund des linearen Zusammenhangs zwischen der verabreichten
Konzentration einzelner Makrolide und dem postantibiotischen Effekt schlussfolgerten
McDONALD et al. (1977), dass bei hochdosierter Anwendung die antimikrobielle
Wirkung über einen längeren Zeitraum anhält. Untersuchungen, die einen
postantibiotischen Effekt der Makrolide gegenüber D. nodosus oder Bacteroides sp.
beschreiben, liegen derzeit nicht vor.
2.3.4.1.2 Pharmakokinetik
Die Pharmakokinetik stellt die wichtigsten Prozesse dar, denen ein Wirkstoff im
Organismus nach Applikation unterliegt (FREY 2007). Hierzu zählen die Freisetzung
aus der Darreichungsform (Liberation), die Resorption (Absorption), die Verteilung im
Körper (Distribution), die Metabolisierung (Metabolism) und die Exkretion (Excretion).
Die in Form von Estern oder Salzen zur Verbesserung der Bioverfügbarkeit und
Wasserlöslichkeit parenteral verabreichten lipophilen Makrolide werden am
Applikationsort schnell resorbiert und zum größten Teil hydrolytisch oder enzymatisch
in die aktive Form umgewandelt. Durch die glykosidisch gebundenen Zuckerreste er-
halten sie basische Eigenschaften, die in zahlreichen Geweben, wie Lunge, Leber und
Euter, mit einer Akkumulation der aktiven Metaboliten einhergehen (KROKER et al.
2007). Hohe Konzentrationsspiegel im Entzündungsgebiet werden durch die Frei-
setzung des Wirkstoffs aus umliegenden Gewebezellen und in Folge einer
Anreicherung der aktiven Metaboliten in Leukozyten und Makrophagen erzielt. Die
geringe Affinität der neueren Makrolide zu Effluxpumpen an der Zellmembran trägt im
Weiteren zur Aufrechterhaltung der hohen Konzentrationsspiegel bei (TRAEDER u.
GROTHUES 2004). Der Serumkonzentrationswert eines Makrolids gibt somit keinen
Aufschluss über die Effektivität des Wirkstoffs. Die Art der Metabolisierung unterliegt
zwischen den Makroliden individuellen Unterschieden. Die Ausscheidung erfolgt ent-
weder über die Galle oder zum geringen Anteil auch über den Urin.
Speziell für die Moderhinketherapie relevante typische Eigenschaften der neueren
Makrolidvertreter sind die gute Resorptionsrate, die hohe Bioverfügbarkeit, das hohe
Verteilungsvolumen, die nachgewiesene gute Penetration in die Zellschichten der
LITERATURÜBERSICHT
24
Haut und die lange Halbwertszeit im Vergleich zu bspw. Erythromycin (CARBON
1998; NOLI u. BOOTHE 1999; BENCHAOUI et al. 2004).
Tab. 1: Vergleichende Darstellung der Pharmakokinetik von Tulathromycin,
Gamithromycin, Tilmicosin, Tildipirosin und Erythromycin; Referenzwerte für Rind und
Kalb bzw. Schaf (Tilmicosin) nach parenteraler Applikation
Wirkstoff Tulathromycin
(1) Gamithromycin
(2) Tilmicosin
(3) Tildipirosin
(4) Erythromycin
(5) tmax (min) 30 30-60 ca. 240 23 ca. 340 Bioverfügbarkeit (%) 90 >98 78,9 32-34 Plasmaproteinbindung (%) 40 74 20-25 30 70-80 t1/2 (h) 90 >48 34,6±8,1 ca. 216 1-3 Vss (l/kg) 11 25 25 ca. 50 1-2 1=NOWAKOWSKI et al. (2004); EVANS (2005), 2=HUANG et al. (2010), 3=MODRIC et al. (1998), 4=MENGE et al. (2012), 5=KROKER (2010), tmax=Zeitpunkt an dem die maximale Plasmakonzentration erreicht wird, t1/2=Halbwertszeit, Vss=scheinbares Verteilungsvolumen im Steady-state
2.3.4.1.3 Nebenwirkungen
Makrolide zeichnen sich durch eine sehr gute systemische Verträglichkeit aus
(PRESCOTT et al. 2000a; KROKER et al. 2007). Jedoch können an der Injektions-
stelle max. zwei bis drei Wochen lang lokale Entzündungsreaktionen auftreten. Für
Tildipirosin und Tilmicosin bestehen aufgrund ihrer kardiovaskulären Toxizität bei
Mensch und Tier besondere Sicherheitsmaßnahmen (BÄUMER 2012). Die geringe
therapeutische Breite und die Toxizität für Ziegen (CHRISTODOULOPOULOS et
al. 2002) schränken, neben dem Abgabeverbot an den Landwirt, die Anwendung von
Tilmicosin bei der Moderhinketherapie ein.
2.3.4.2 Langzeitoxytetrazykline
Die Strukturformel der Tetrazykline wird aus vier linearen Sechserringen, dem
Tetracen, gebildet (KROKER et al. 2007). Eine Differenzierung zwischen den
Derivaten ist anhand der substituierten Reste an den Ringpositionen durchführbar
(RIVIERE u. PAPICH 2009a).
LITERATURÜBERSICHT
25
Oxytetrazyklin: R1=H, R2=H,
R3=CH3-OH, R4=OH
Chlortetrazyklin: R1=Cl, R2=H,
R3=CH3-OH, R4=H
Abb. 2: Strukturformel der Tetrazykline
2.3.4.2.1 Pharmakodynamik
Oxytetrazykline zählen zu den Breitspektrumantibiotika mit pharmakologischen
Eigenschaften, die aus Sicht einer erfolgreichen Moderhinkebehandlung von Interesse
sind (siehe Kapitel 2.3.2). Neben der bakteriostatischen Wirkung gegen
F. necrophorum konnte in Resistenztests ein hemmender Effekt auf das Wachstum
von D. nodosus nachgewiesen werden (GRADIN u. SCHMITZ 1983). Tetrazykline
binden an die 30 s Untereinheit der Ribosomen, wodurch eine Störung der
Proteinsynthese nach Interaktion mit der Aminoacyl-tRNA an dem
Messenger-RNA-Ribosomen Komplex ausgelöst wird (PRESCOTT 2000b; KROKER
et al. 2007).
2.3.4.2.2 Pharmakokinetik
Aus mehreren Studien gehen die pharmakokinetischen Eigenschaften nach par-
enteraler Applikation eines Langzeitoxytetrazyklins bei Schaf und Ziege hervor
(ESCUDERO et al. 1994, 1996; CRAIGMILL et al. 2000). Neben einer guten
Resorption an der Injektionsstelle (Schaf: tmax = 1,79 ± 0,61 h, Ziege:
tmax = 3,20 ± 0,45 h) wiesen ESCUDERO et al. (1996) 72 Stunden nach der Anwend-
ung für beide Tierarten Plasmakonzentrationen über dem festgelegten minimalen
effektiven Grenzwert von 0,5 µg/ml nach. Dieser Long-Acting-Effect ist
formulierungsbedingt. Des Weiteren zeichnet sie eine hohe Bioverfügbarkeit von
mindestens 65,5 % (ESCODERO et al. 1994), ein geringes Proteinbindungsvermögen
(20 %), eine lange Eliminationshalbwertszeit von ca. 28 Stunden (ESCUDERO et al.
1996) und ein hohes Verteilungsvolumen (Vss 3,08 L/kg, CRAIGMILL et al. 2000) aus.
LITERATURÜBERSICHT
26
2.3.4.2.3 Nebenwirkungen
Tetrazykline können zu lokalen und systemischen unerwünschten Wirkungen bei
Schafen und Ziegen führen. Schmerzhafte Umfangsvermehrungen sowie Nekrosen
können nach intramuskulärer Applikation an den Injektionsstellen entstehen, die auf
die absorptionsfördernden Substanzen in der Injektionslösung zurückzuführen sind
(KROKER et al. 2007). Bei eingeschränkter Funktion der Eliminationsorgane Niere
und Leber sollte auf eine Initialtherapie mit Tetrazyklinen verzichtet werden. Dies
schließt auch die Behandlung im Wachstum befindlicher Tiere mit ein. Weitere
unerwünschte Wirkungen sind die Ablagerungen von Tetrazyklin-Calcium-Chelaten im
Zahnschmelz, das Auftreten von Photodermatitiden und die Teratogenität dieser
Wirkstoffgruppe (PRESCOTT 2000b; RIVIERE u. PAPICH 2009a).
2.3.4.3 Lincomycin und Spectinomycin
In der Veterinärmedizin sind Kombinationspräparate, die Lincomycin und Spectino-
mycin enthalten, verfügbar. Lincomycin als Vertreter der Lincosamide (Pyrrolidine)
besteht aus dem schwefelhaltigen Aminozucker Oktose, der über eine Amidbindung
mit einem Derivat der Aminosäure Prolin (Propylprolin) verknüpft ist (PRESCOTT
2000a; KROKER et al. 2007). Spectinomycin wird oftmals den Aminoglykosid
Antibiotika zugeordnet, besitzt aber keinen Aminozucker in der chemischen Struktur
und zählt folglich zu den Aminocyclitolen (PRESCOTT 2000c; KROKER 2010).
Abb. 3: Strukturformel Spectinomycin Abb. 4: Strukturformel Lincomycin
LITERATURÜBERSICHT
27
2.3.4.3.1 Pharmakodynamik
Mit der Kombination beider Antibiotika wird das Ziel einer synergistischen
Wirkungssteigerung verfolgt (BURROWS 1980). Bezüglich des Wirkungsmechanis-
mus der Lincosamide sei auf die Makrolide verwiesen (Kapitel 2.3.4.1.1).
Spectinomycin wiederum greift durch die Bindung an die ribosomale 30 s Untereinheit
in die Proteinsynthese der Bakterien ein und verursacht einen vorwiegend bakterio-
statischen Effekt. Der Erfolg dieser Wirkstoffkombination bei der Moderhinketherapie
spiegelt sich in den Untersuchungen von VENNING et al. (1990) wider (siehe
Kapitel 2.3.1).
2.3.4.3.2 Pharmakokinetik
Durch das geringe Verteilungsvolumen von Spectinomycin (Vd < 0,25) ist eine
alleinige Therapie mit diesem Antibiotikum aus pharmakokinetischen Gesichtspunkten
bei der Behandlung von Moderhinke abzulehnen (BÄUMER 2012). Nur in Verbindung
mit Lincomycin, das sich durch eine gute Gewebegängigkeit auszeichnet, können
ausreichend hohe Wirkstoffkonzentrationen in Knochen- und Hautzellen erzielt
werden (KROKER 2010). Das hohe Verteilungsvolumen (> 1 l/kg) von Lincomycin
nach parenteraler Applikation beruht auf dem lipophilen Charakter und der Fähigkeit
die Zellmembran zu penetrieren (PRESCOTT 2000a; KROKER et al. 2007). Diese
Wirkstoffkombination stellt aufgrund der geringen Halbwertszeit (t1/2 3–5 h) und der
Resistenzlage nicht das Mittel der Wahl bei der Therapie von Moderhinke dar (PÍRIZ
DURÁN et al. 1991).
2.3.4.3.3 Nebenwirkungen
Intramuskulär verabreichtes Lincomycin ist für Schafe, bis auf die lokalen
schmerzhaften Irritationen an der Injektionsstelle mit evtl. einhergehender
neuromuskulärer Blockade oder anaphylaktischem Schock, weitgehend ungefährlich
(BURROWS 1980; PRESCOTT 2000a; RIVIERE u. PAPICH 2009b; KROKER 2010).
Spectinomycin führt zu ähnlichen lokalen Reaktionen. Die nephro- und ototoxische
Wirkung nach parenteraler Aminogyklosid-Applikation wird bei Spectinomycin selten
beobachtet (PRESCOTT 2000c; KROKER 2010).
MATERIAL UND METHODEN
29
3 MATERIAL UND METHODEN
3.1 Materialien
3.1.1 Versuchstiere
Die unterschiedlichen Wirkstoffe wurden an insgesamt 123 Schafen in vier Versuchs-
durchgängen getestet. Alle Tiere waren spontan an Moderhinke erkrankt.
Im ersten Durchgang handelte es sich um 22 Graue Gehörnte Heidschnucken, davon
19 Mutterschafe und drei Bocklämmer, die aus einem Moderhinke positiven Betrieb
stammten. Zusätzlich wurden zwei reinrassige Merinoschafe aus einem Vorversuch
mit in die Versuchsgruppe integriert. Der Landwirt versicherte beim Auftreten von hgr.
Lahmheiten nach Anweisung des Tierarztes die entsprechenden Tiere üblicherweise
mit einem Langzeitoxytetrazyklinpräparat zu behandeln. Im Jahr 2010 wurden
einzelne Tiere mit Footvax® (MSD Animal Health, Intervet Deutschland GmbH,
Unterschleißheim) geimpft. Zu ihnen zählten auch sieben Probanden aus dem
Tierversuch. Die Tiere zeigten das klinische Bild einer subakuten Form der Moder-
hinke. Die gemeinsame Haltung mit chronisch an Mauke erkrankten Pferden und der
nicht auszuschließende Wildwechsel insbesondere durch einen Mufflon-Bock in der
Weideperiode sind aus epidemiologischer Sicht von Interesse. Am Ende des
Versuchs nach Ablauf der Wartezeit wurden die Tiere dem Besitzer ausgehändigt.
Die Schafe des zweiten und dritten Versuchsdurchgangs wurden aus einem
gemeinsamen Herkunftsbetrieb in die Klinik verbracht. Es handelte sich um
Kreuzungstiere unterschiedlichen Alters und Geschlechts mit chronisch deformierten
Klauen. Eine Vorbehandlung fand im Betrieb nicht statt. Die Anzahl der Schafe im
zweiten und dritten Durchgang betrug 24 respektive 40 Tiere.
Die letzten 35 Tiere aus dem vierten Versuchsdurchgang stammten aus einer
Wanderschäferei. Der Schäfer lässt die Tiere auf einen Truppenübungsplatz südlich
der Lüneburger Heide grasen. Die Behandlung bzw. Prophylaxe mit Footvax® (MSD
Animal Health, Intervet Deutschland GmbH, Unterschleißheim) hatte er bezüglich
einer nicht ausreichenden Senkung der Moderhinke-Prävalenz im Jahr zuvor einge-
stellt. Es waren reinrassige schwarzköpfige Fleischschaflämmer unterschiedlichen
Geschlechts mit überwiegend unterminiertem Klauenhorn.
MATERIAL UND METHODEN
30
Die Tiere der letzten drei Durchgänge wurden nach Ablauf der Wartezeit an einen
Viehhändler verkauft, der sie nach einer anschließenden kurzen Mastphase
schlachten ließ. Eine langfristige Kontrolle des Behandlungserfolges konnte somit nur
für die Heidschnucken aus dem ersten Durchgang erfolgen.
3.1.2 Wirkstoffe
Der Behandlungserfolg von sechs verschiedenen Chemotherapeutika wurde im
Vergleich zu einer standardisierten Klauenbadlösung geprüft.
Zu den Antibiotika zählten unter anderem die in Kapitel 2.3.4.1 beschriebenen
neueren Vertreter der Makrolide, nämlich Tilmicosin (Tilmodil®, 300 mg/ml,
Injektionslösung für Schafe und Rinder, WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher
Tierärzte eG, Garbsen), Tulathromycin (Draxxin®, 100 mg/ml, Injektionslösung für
Rinder und Schweine, Pfizer, Karlsruhe), Gamithromycin (Zactran®, 150 mg/ml,
Injektionslösung für Rinder, Merial, Toulouse, Frankreich) und Tildipirosin (Zuprevo®,
180 mg/ml Injektionslösung für Rinder, MSD Animal Health, Intervet Deutschland
GmbH, Unterschleißheim). Mit Ausnahme von Tilmicosin ist keiner dieser Wirkstoffe
für die Anwendung beim Schaf bzw. die Indikation Moderhinkebehandlung
zugelassen. Die übrigen drei Makrolide wurden vom Rind auf das Schaf umgewidmet.
Demgegenüber standen zwei häufig in der Praxis angewendete Wirkstoffe; zum einen
ein Oxytetrazyklin in Langzeitformulierung (Baxyl®, 200 mg/ml, Injektionslösung für
Rinder, Schweine und Schafe, WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte
eG, Garbsen) und zum anderen ein Kombinationspräparat bestehend aus 50 mg/ml
Lincomycin und 100 mg/ml Spectinomycin (Lincospectin®, Pfizer, Karlsruhe). Baxyl®
hat zwar eine Zulassung für Schafe, jedoch nicht mit der Indikation
Moderhinkebehandlung, während Lincospectin® nicht für Schafe zugelassen ist.
Für die behandelte Kontrollgruppe wurde eine 10 %ige Zinksulfat Klauenbadlösung
(Golden Hoof plus®, Shepfair Products Ltd, Abergavenny, Großbritannien) angesetzt.
Hierfür wurde gemäß Herstellerangaben 1 kg des Inhalts in 10 l Wasser aufgelöst.
Um die Penetration des Zinksulfats in das Klauenhorn zu erhöhen, ist ein Tensid in
Golden Hoof plus® enthalten. Der Rest des trockenen Granulats setzt sich aus
Zinksulfat und 6 Teilen Wasser (ZnSO4·6H2O) zusammen.
MATERIAL UND METHODEN
31
3.1.3 Geräte und Verbrauchsmaterialien
Klauenpflege
- Klauenmesser (Kerbl, Buchbach)
- Klauenschere (Kerbl, Buchbach)
- Hufmesser VC 300 V (Aesculap, Tuttlingen)
- Schleifmaschine Seriennummer: 1348.7 (Bosch, Gerlingen)
- Stechschutzhandschuhe Protec® (Stahlnetz, Bezug über Idealo Internet GmbH,
Berlin)
- Einmalhandschuhe Nobaglove® Latex 240 mm (NOBA Verbandsmittel, Danz GmbH
& Co. KG, Wetter)
- Schutzbrille B–D 18 Pulsafe® (Bezug über Conrad, Hirschau)
- Lotagen®-Konzentrat 360 mg/g Policresulen, Konzentrat für Rinder, Schweine,
Schafe und Hunde, Ch.-B. THBA 0332, MSD Animal Health, Intervet Deutschland,
Unterschleißheim)
- Klauenpflegestand für Schafe Typ XL (Patura, Miltenberg)
Probennahme
- Einmalösen 10 µl Plastic classic Microloops® (Medical Wire & Equipment, Corsham-
Wiltshire, Großbritannien)
- Zahnstocher (PAP STAR GmbH, Kall)
- Einmalhandschuhe Nobaglove® Latex 240 mm (NOBA Verbandsmittel Danz GmbH
& Co. KG, Wetter)
- Probenröhrchen (Dunn Labortechnik GmbH, Asbach)
- Permanent Marker 400 zum Beschriften (Edding International GmbH, Ahrensburg)
- Blut Eugon Agar mit Lincomycin (Herstellung im Institut für Mikrobiologie,
Tierärztliche Hochschule, Hannover)
- Dry Anaerobic Indicator Strips™ (Dickinson and Company, Sparks, Nevada, USA)
- Anaerobiertöpfe 2,5 l AnaeroGen™ (Oxoid, Hampshire, Großbritannien)
- 9 ml EDTA Monovetten® (Sarstedt, Nümbrecht)
MATERIAL UND METHODEN
32
PCR
- Desinfektionstücher Desco Wipes® (Dr. Schumacher GmbH, Melsungen)
- Schnelldesinfektionsmittel Meliseptol® (Braun, Melsungen)
- Papierhandtücher (Bezug über Rossmann, Burgwedel)
- Handschuhe rotiprotect Latex® puderfrei (Roth, Karlsruhe)
- Reaktionsgefäße Safe Seal® 2 ml (Sarstedt, Nümbrecht)
- Reaktionsgefäße Multiply Biosphere® 0,2 ml (Sarstedt, Nümbrecht)
- Pipettierhilfen Eppendorf Research Plus® 0,1 - 2,5 µl, 0,5 – 10 µl, 10 – 100 µl, 20 –
200 µl, 100 – 1000 µl (Eppendorf, Hamburg)
- Pipettierhilfen Pre Cision® 0,5 – 10 µl, 2 – 20 µl, 20 – 200 µl (Biozym Scientific
GmbH, Hessisch Oldendorf)
- Pipettenspitzen Safe Seal-Tips® professional 10 µl, 100 µl, 300 µl, 1000 µl
(Biozym Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf)
- Vortexer: MS 2 Minishaker (IKA-Werke GmbH & Co. KG, Staufen)
- Vortexer: MIXOMAT, Vortex Genie 2® (Scientific Industries GmbH, New York, USA)
- Zentrifuge Biofuge pico (Heraeus, Hanau) und Centrifuge 5417R (Eppendorf,
Hamburg)
- Wasserschüttelbad 1083 (GFL, Burgwedel)
- Alkohol 96 % (Roth, Karlsruhe)
- DNeasy® Blood &Tissue Kit bestehend aus: DNeasy Mini Spin Columns in 2 ml
Collection Tubes, 2 ml Collection Tubes, Buffer AL, Buffer AW1, Buffer AW2,
Buffer AE, Proteinase K, Handbuch (QIAGEN, Hilden)
- Sterilbank Hera Safe (Heraeus, Hanau)
- Polymerase Phire Hot Start II, DNA-Polymerase (Finnzymes, Vantaa, Finnland)
- Primer (Herstellung Biozym Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf)
- 5 x Puffer (Finnzymes, Vantaa, Finnland)
- dNTP (Finnzymes, Vantaa, Finnland)
- Wasser für die Molekularbiologie (Roth, Karlsruhe)
- Cycler: Mastercycler® 96 (Eppendorf, Hamburg)
- Laborwaage HF-2000G (ADE, Hamburg)
- LE Agarose (Biozym, Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf)
MATERIAL UND METHODEN
33
- Gel Star® Nukleinsäurefarbstoff (Biozym Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf)
- DNA Leiter (100 bp) (Roth, Karlsruhe)
- glycerinhaltiger Farbmarker (eigene Herstellung, siehe 3.2.4.3)
- TBE Puffer (eigene Herstellung, siehe 3.2.4.3)
- Aqua bidest. (eigene Herstellung)
- Elektrophoresekammer Com Phor Midi (Bioplastics, Landgraaf, Niederlande)
- Spannung (Biometra® Standard Power Pack, biomedizinische Analytic GmbH,
Göttingen)
- Ultraviolettstrahlung (UV) Tisch Flu o Blu (Biozym Scientific GmbH, Hessisch
Oldendorf
- Kamera Color Vision Model: XC-003P (Sony, Tokio, Japan)
- Mikrowellenherd (SHARP, 800 Watt, Osaka, Japan)
Genotypisierung
- FTA® Cards (Whatman™, Kent, Großbritannien)
- Pipettierhilfe Eppendorf Research Plus® 20 – 200 µl (Eppendorf, Hamburg)
- Pipettierspitzen Safe Seal-Tips® professional 100 µl (Biozym Scientific GmbH,
Hessisch Oldendorf)
- Handschuhe rotiprotect Latex® puderfrei (Roth, Karlsruhe)
Behandlung
- Golden Hoof plus® (Bezug über Shepfair Products Ltd, Abergavenny,
Großbritannien)
- Tilmodil® 300 mg/ml, Injektionslösung für Schafe und Rinder (WDT-Wirtschaftsge-
nossenschaft Deutscher Tierärzte eG, Garbsen)
- Zactran® 150 mg/ml, Injektionslösung für Rinder (Merial GmbH, Toulouse,
Frankreich, Bezug über WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte eG,
Garbsen)
- Baxyl® LA 200 mg/ml, Injektionslösung für Rinder, Schweine und Schafe (WDT-
Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte eG, Garbsen
MATERIAL UND METHODEN
34
- Zuprevo® 180 mg/ml, Injektionslösung für Rinder (MSD Animal Health, Intervet
Deutschland GmbH, Unterschleißheim, Bezug über WDT-Wirtschaftsgenossenschaft
Deutscher Tierärzte eG, Garbsen)
- Draxxin® 100 mg/ml, Injektionslösung für Rinder und Schweine (Pfizer, Karlsruhe,
Bezug über WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte eG, Garbsen
- Lincospectin® Lösung, 50 mg + 100 mg/ml, Injektionslösung für Schweine, Kälber,
Hunde und Katzen (Pfizer, Karlsruhe, Bezug über WDT-Wirtschaftsgenossenschaft
Deutscher Tierärzte eG, Garbsen
- Einmalspritzen 1 ml, 2 ml, 5 ml (Henry Schein Vet GmbH, Hamburg)
- Einmalkanülen 1,2 x 40 mm lange Spitze (Henry Schein Vet GmbH, Hamburg)
3.2 Methoden
3.2.1 Versuchsplan
Die vier Versuchsdurchgänge fanden im Zeitraum vom 27.7.2011 - 19.12.2011 in der
Klinik für kleine Klauentiere und forensische Medizin und Ambulatorische Klinik der
Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover statt. Eine erste Selektion der Tiere durch
Inspektion der Klauen wurde im Betrieb vorgenommen, um abzusichern, dass die
Schafe tatsächlich klinisch an Moderhinke erkrankt waren. Anschließend wurden die
Schafe in die Klinik transportiert und für einen Beobachtungszeitraum von 22 Tagen
auf Stroh aufgestallt. Der Ausschluss von weiteren Erkrankungen erfolgte über eine
klinische Allgemeinuntersuchung. Im Anschluss wurden die Tiere zusätzlich zur
Ohrmarke mit einem nummerierten Halsband gekennzeichnet, was eine eindeutige
Zuordnung der erhobenen Daten zu dem jeweiligen Tier ermöglichte.
Mittels eines diagnostischen Klauenpflegeschnitts konnten den Läsionen an den
Klauen nach einem Bewertungssystem von EGERTON und ROBERTS (1971)
Schweregrade zugeordnet werden. Hierfür wurde nur unterminiertes, aber bereits
abgelöstes Klauenhorn mit einer Klauenschere entfernt bzw. die Lederhaut unter dem
verhärteten Sohlenhorn mit einer Schleifmaschine freigelegt. Letzteres war nur im
zweiten Versuchsdurchgang aufgrund der hochgradig deformierten Klauen notwendig.
Die Einteilung der Behandlungsgruppen erfolgte nach Berechnung des arithmetischen
Mittelwerts der Klauenscores. In jeder Gruppe befanden sich jeweils Tiere, bei denen
MATERIAL UND METHODEN
35
die Erkrankung auf den interdigitalen Spalt begrenzt war, und zum anderen
Probanden mit zusätzlich unterminiertem Klauenhorn.
Für die Beurteilung der Bewegung wurden die Tiere aus den Boxen in die Stallgasse
geführt und nach dem Locomotion Scoring System von KALER et al. (2009) bewertet.
Der Nachweis von D. nodosus zur Bestätigung der klinischen Diagnose Moderhinke
erfolgte zum einen über eine kulturell-mikrobiologische Untersuchung und zum
anderen über eine nested Polymerase Kettenreaktion (nested PCR). Hierfür wurden
Proben entnommen und im Anschluss untersucht (s.u.).
Um einen evtl. bestehenden Zusammenhang zwischen der genetisch determinierten
Immunantwort („Footrot Gene Marker Test“) und dem Schweregrad der Erkrankung
nachweisen zu können, wurden Blutproben aus der Vena jugularis (V. jugularis)
entnommen und zur Genotypisierung an die Lincoln University in Christchurch,
Neuseeland gesandt.
Im Anschluss an die Untersuchungen fanden die Behandlungen statt. In Tabelle 2
sind die vier Versuchsdurchgänge mit Anzahl der Tiere pro Behandlungsgruppe
dargestellt.
Tab. 2: Anzahl der Tiere pro Versuchsdurchgang und Behandlungsgruppe
Durch- gang
ZnSO4 Klauen-
bad
Oxytetra- zyklin
Tilmicosin
Gamithro- mycin
Tulathro- mycin
Tildipirosin
Linco-/ Spectino-
mycin
Anzahl der
Tiere 1 8 8 7 23 2 8 8 8 24 3 8 8 8 8 8 40 4 7 7 7 7 7 35
Gesamt 31 24 30 15 7 7 8 122
Nach der Behandlung wurde in regelmäßigen Abständen der Klauen- und der
Locomotion Score erhoben (siehe Kapitel 3.2.9). Tiere, die nach der
Beobachtungsphase im klinischen Bild noch Anzeichen für eine Erkrankung
aufwiesen, wurden durch das Zinksulfat Klauenbad geführt und anschließend dem
bisherigen respektive neuen Eigentümer übergeben.
MATERIAL UND METHODEN
36
Zum Vergleich der Effektivität der Behandlungen wurden die Klauenscores einer in
Vorversuchen in der Klinik unter ähnlichen Bedingungen aufgestallten, unbehandelten
Kontrollgruppe in die statistische Auswertung mit einbezogen.
3.2.2 Klinische Untersuchung
Eine klinische Allgemeinuntersuchung war Voraussetzung zum Ausschluss weiterer
Erkrankungen, die eine zusätzliche antibiotische Behandlung erfordert hätten. Ziel der
Untersuchung war die Erhebung eines Habitus, unter Ausnahme der Moderhinke, von
klinisch allgemeingesunden Tieren. Hierfür wurde besonderes Augenmerk auf den
Herz-Kreislauf-Apparat, Atmungsapparat und die Lymphknoten gerichtet. Eine
spezielle Untersuchung des Bewegungsapparates konnte erst nach dem
Klauenpflegeschnitt erfolgen. Schafe, die Lahmheiten aufgrund anderer Erkrank-
ungen des Bewegungsapparates zeigten, wurden bereits im Betrieb ausselektiert. Die
Körpertemperatur der Tiere wurde täglich gemessen. Bei nachgewiesenem Befall mit
Endoparasiten und/oder Ektoparasiten wurden die Schafe entsprechend behandelt.
3.2.3 Kultureller Nachweis von Dichelobacter nodosus
3.2.3.1 Probenentnahme
Der kulturelle Nachweis von D. nodosus erfolgte im Institut für Mikrobiologie der
Tierärztlichen Hochschule Hannover.
Für die Probenentnahme wurden die Tiere umgesetzt und das unterminierte axiale
Wandhorn mit einem Klauenmesser angehoben. Mit Hilfe einer Einmalöse
(Microloops®, Medical Wire & Equipment, Corsham Wiltshire, Großbritannien) wurde
das Probenmaterial auf einen Blut Eugon Agar mit Lincomycin Zusatz (BEA plus)
überführt. Bei ausschließlich interdigitalen Läsionen und bei abgetrockneten
unterminierten Entzündungsprozessen des Klauenhorns wurde die Probe direkt aus
dem interdigitalen Spalt entnommen. Nach einem fraktionierten Ausstrich des
Probenmaterials auf dem Nährboden wurden die Agarplatten unter anaeroben
Bedingungen in das Institut für Mikrobiologie transportiert. Hierfür standen 2,5 l
Anaerobiertöpfe (AnaeroGen®, Oxoid, Hampshire, Großbritannien) zur Verfügung. In
MATERIAL UND METHODEN
37
den Töpfen befand sich neben den Agarplatten ein Indikator Teststreifen (Dry
Anaerobic Indicator Strips™, Dickinson and Company, Sparks, Nevada, USA) zur
Bestätigung eines anaeroben Milieus.
3.2.3.2 Kulturell-mikrobiologische Untersuchung
Für die Herstellung des Blut Eugon Agar mit Lincomycin Zusatz (BEA plus) wurde 2 g
Yeast Extrakt (Becton Dickensen, Franklin Lakes, New Jersey, USA) in 1000 ml
destilliertem Wasser gelöst und auf einen pH Wert von 8,0 eingestellt. Im Anschluss
wurden 45,4 g Eugon Agar (Becton Dickensen, Franklin Lakes, New Jersey USA) und
7 g Bacto Agar (Difco, Lawrence, Kansas, USA) der Lösung zugefügt und bei 121 °C
für 15 min autoklaviert. Vor dem Ausgießen in die Agarplatten (Duroplan®, Roth,
Karlsruhe) wurde die Lösung auf 50 bis 55 °C abgekü hlt und mit 0,001 g/l Lincomycin
sowie 100 ml Pferdeblut (WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte eG,
Garbsen) versetzt.
Nach der Probennahme wurden die beimpften Nährböden für mindestens eine Woche
bei 37 °C inkubiert und von Einzelkolonien eine Gra m-Färbung zum Nachweis von
gram-negativen Bakterien angefertigt. Verdächtige Kolonien wurden im Anschluss auf
zwei verschiedenen Nährböden für 5 bis 10 Tage subkultiviert. Mittels des Columbia
Agars erfolgte der Ausschluss von aeroben Bakterien und über die erneute Anzucht
auf dem BEA plus Agar wurde Material zur molekulargenetischen Detektion von
D. nodosus gewonnen. Der endgültige Erregernachweis erfolgte mittels der PCR nach
LA FONTAINE et al. (1993).
3.2.4 Molekularbiologischer Nachweis von Dichelobacter nodosus
3.2.4.1 Probennahme
Der molekularbiologische Nachweis von D. nodosus erfolgte durch eine nested PCR,
entwickelt 2007 von BELLOY und Mitarbeitern. Die Probennahme wurde am
umgesetzten Tier durchgeführt. Jedes Tier wurde an einer Gliedmaße beprobt. Mittels
eines Zahnstochers (PAP STAR GmbH, Kall) konnte das Probenmaterial unter dem
axialen Wandhorn freigelegt und in ein Probenröhrchen (Dunn Labortechnik GmbH,
MATERIAL UND METHODEN
38
Asbach) überführt werden. Zeigten die Tiere keine Unterminierungen des
Klauenhorns, wurde eine Probe aus dem interdigitalen Spalt entnommen. Die mit der
Tierkennzeichnung versehenden Probenröhrchen wurden bis zur Untersuchung bei
7 °C aufbewahrt.
3.2.4.2 DNA Isolierung
Für den Nachweis von D. nodosus musste zunächst die DNA aus den Proben, unter
Verwendung des DNeasy® Blood & Tissue Kit (QIAGEN, Hilden), extrahiert werden.
Im ersten Schritt wurden in jedes Probenröhrchen 500 µl phosphatgepufferte Salz-
lösung (PBS, Herstellung: Labor Klinik für kleine Klauentiere und forensische Medizin
und Ambulatorische Klinik) pipettiert und im Vortexer (Genie 2®, Scientific Industries
GmbH, New York, USA) 30 s gemischt. 200 µl der Lösung wurde zusammen mit je
20 µl Proteinase K (QIAGEN, Hilden) in ein Eppendorf-Reaktionsgefäß (QIAGEN,
Hilden) überführt. Weitere 200 µl des Buffer AL (QIAGEN, Hilden) wurden der Lösung
beigefügt und im Anschluss auf dem Vortexer gemischt. In einem Wasserbad-
schwenker (GFL®, Burgwedel) inkubierten die Proben für 10 min bei 56 °C. Danach
wurden je 200 µl Ethanol (96 %ig, Roth, Karlsruhe) der Lösung zugegeben und im
Vortexer zu einer Suspension gemischt. Der Inhalt des Eppendorf-Reaktionsrefäßes
wurde mit einer Pipettierhilfe (Eppendorf, Hamburg) in 2 ml Tubes (QIAGEN, Hilden)
überführt, die eine mobile DNeasy Mini Säule enthielten. Die Säulen wurden bei
6.000 g 60 s zentrifugiert, in neue Tubes gesteckt und der Überstand verworfen.
Danach wurden jeweils 500 µl Buffer AW1 (QIAGEN, Hilden) auf die Säulen gegeben
und bei 6.000 g 60 s zentrifugiert. Die Säulen wurden in neue Tubes überführt, auf die
500 µl einer Waschlösung (Buffer AW2, QIAGEN, Hilden) gegeben wurde und 3 min
bei 20.000 g zentrifugiert. Abschließend wurden die Säulen in neue 2 ml
Eppendorf-Reaktionsgefäße überführt, jeweils 200 µl Buffer AE (QIAGEN, Hilden)
hinzugefügt und 60 s bei 6.000 g zentrifugiert.
Die beschrifteten Proben wurden bei -18 °C bis zur weiteren Untersuchung
aufbewahrt.
MATERIAL UND METHODEN
39
3.2.4.3 Nested PCR
Die nested PCR wurde an den zuvor unter Raumtemperatur aufgetauten Proben
durchgeführt. Die Anfertigung des Mastermix erfolgte unter einer Sterilbank (Hera
Safe, Heraeus, Hanau). Die aufgetauten Reagenzien wurden mittels eines Vortexer
(MS2 Minishaker, IKA, Staufen) gemischt und im folgenden Verhältnis für den ersten
Mastermix angesetzt:
5 x Buffer (7,5 mM MgCl2, Finnzymes, Vantaa, Finnland) 5,0 µl
dNTP Mix (10 mM, Finnzymes, Vantaa, Finnland) 0,5 µl
DN Primer (5’ AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3’,)
(Biozym Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf) 0,5 µl
DN Primer (5’ AGA GTT TGA TAC TGG CTC AG-3’)
(Biozym Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf 0,5 µl
DNA Polymerase (Phire Hot Start II, Finnzymes, Vantaa, Finnland) 0,125 µl
Wasser für die Molekularbiologie (ad 22 µl, Roth, Karlsruhe) 15,375 µl
Gesamtvolumen 22 µl
Zusätzlich zu den Probenansätzen wurden vier bis fünf Ansätze für eine Positiv- und
Negativkontrolle sowie für zwei Wasserkontrollproben vorbereitet. Die einzelnen
Volumina für den Mastermix wurden in ein 2 ml Tube (Sarstedt, Nümbrecht) pipettiert.
Für jede Probe wurde ein 0,2 ml Tube (Sarstedt, Nümbrecht) bereitgestellt, in welches
22 µl Mastermix pipettiert wurde. Anschließend wurden in die beiden Tubes der
Wasserkontrollen 3 µl des entsprechenden Reagenz pipettiert. Die anderen
Kontrollproben wurden erst in einem späteren Pipettiervorgang beschickt und
beinhalteten zunächst nur den Mastermix. Die Minitubes wurden verschlossen,
beschriftet und für die weitere Untersuchung von der Sterilbank in einen gesonderten
Raum (Cyclerraum) transportiert. Es wurden in jedes gekennzeichnete Tube 3 µl der
zugehörigen DNA pipettiert. Die Positiv- und Negativkontrollproben wurden ebenfalls
mit 3 µl des entsprechenden Reagenz beschickt. Die PCR erfolgte mittels eines
Thermocyclers (Mastercycler 96, Eppendorf, Hamburg) gemäß folgendem Programm:
MATERIAL UND METHODEN
40
1. 98 °C 30 s (Denaturierung)
2. 35 Zyklen:
94 °C 5 s (Denaturierung)
56° C 5 s (Hybridisierung)
72 °C 30 s (Extension)
3. 72° C 60 s (Extension)
4. 6° C hold
Das Produkt zählte nach dem ersten PCR-Zyklus 1400 bp. Die abgekühlten Proben
wurden nach Beendigung des Programms aus dem Thermocycler entnommen und bei
7 °C vorübergehend aufbewahrt.
Währenddessen wurden die Reagenzien für den zweiten Mastermix unter der
Sterilbank im folgenden Verhältnis angesetzt:
5 x Buffer (7,5 mM MgCl2, Finnzymes, Vantaa, Finnland) 5,0 µl
dNTP Mix (10 mM, Finnzymes, Vantaa, Finnland) 0,5 µl
DN Primer (5’ CGG GGT TAT GTA GCT TGC 3’)
(Biozym Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf) 0,5 µl
DN Primer (5’ TCG GTA CCG AGT ATT TCT ACC CAA-CA CCT 3’)
(Biozym Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf 0,5 µl
DNA Polymerase (Phire Hot Start II, Finnzymes, Vantaa, Finnland) 0,125 µl
Wasser für die Molekularbiologie (ad 24 µl, Roth, Karlsruhe) 17,375 µl
Gesamtvolumen 24 µl
Die Volumina der Reagenzien multipliziert mit der Probenanzahl aus dem ersten
Zyklus ergab das Gesamtvolumen des Mastermix, das auf sterile 0,2 ml Tubes
entsprechend der Anzahl an Proben zuzüglich der zwei Wasser-, der Positiv- sowie
der Negativkontrollproben verteilt wurde. Mit Ausnahme der zweiten
Wasserkontrollprobe wurden alle Tubes verschlossen und beschriftet, bevor sie von
der Sterilbank in den Cyclerraum transportiert wurden. In jedes Probentube wurde 1 µl
des entsprechenden PCR Produktes aus dem ersten Zyklus bzw. in das Tube der
zweiten Wasserkontrollprobe 1 µl Wasser für die Molekularbiologie pipettiert und
MATERIAL UND METHODEN
41
danach in den Thermocycler überführt. Der zweite Durchgang im Thermocycler lief
gemäß folgendem Programm:
1. 98 °C 30 s (Denaturierung)
2. 35 Zyklen
94° C 5 s (Denaturierung)
61 °C 5 s (Hybridisierung)
72° C 30 s (Extension)
3. 72 °C 60 s (Extension)
4. 6° C hold
Das endgültige PCR Produkt enthielt 781 bp.
3.2.4.4 Agarose-Gelelektrophorese
Bei der Gelelektrophorese fand eine Auftrennung der DNA Moleküle aus der PCR
nach ihrer Ladung und Länge statt.
Zunächst erfolgte die Herstellung eines 1 %igen Agarose Gels. Hierfür wurden 1,6 g
Agarose (Biozym, Scientific GmbH, Hessisch Oldendorf) abgewogen und in einem
Erlenmeyerkolben in 160 ml 1 x TBE-Puffer gelöst. Der TBE-Puffer war zuvor aus
108 g TRIS Pufferan®, 55 g Borsäure, 9,3 g EDTA Dinatriumsalz Dihydrat (alle Roth,
Karlsruhe) sowie Aqua bidest. (eigene Herstellung) ad 1000 g hergestellt und steril
filtriert (Steritop™, 0,22 µm, Millipore Corporation Bedford, Massachusetts, USA)
worden. Das Gemisch wurde mehrfach in einem Mikrowellenherd (SHARP, 800 Watt,
Osaka, Japan) erhitzt. Die kochende Lösung wurde unter Schwenken des
Erlenmeyerkolbens unter fließendem, kaltem Wasser auf 60 °C abgekühlt.
Abschließend wurde der Lösung 16 µl Gelstar® (Biozym Scientific GmbH, Hessisch
Oldendorf) hinzugefügt. Die Lösung wurde unter Vermeidung der Entstehung von
Blasen in die vorbereitete Elektrophoresekammer (Com Phor Midi, Bioplastics,
Landgraaf, Niederlande) gegossen, wo sie langsam polymerisierte. Mit Eintritt in die
feste Phase konnten die Kämme entfernt und das Gel vollständig mit 1 x TBE-Puffer
(s.o.) beschichtet werden.
MATERIAL UND METHODEN
42
Anschließend wurden den PCR-Produkten 2 µl eines glycerinhaltigen Farbmarkers
(eigene Herstellung; für 6 ml Farbmarker: 3 ml 0,1 %ige Bromphenolblau-Stamm-
lösung, 2 ml Glycerin und 1 ml TE-Puffer) hinzugefügt. Jeweils 20 µl des
Proben-Farbmarker-Gemisches wurden in die Geltaschen pipettiert. Zusätzlich wurde
eine im Verhältnis 1 zu 3 mit TBE-Puffer (s.o.) verdünnte 100 bp DNA Leiter (Roth,
Karlsruhe) als Marker (Längenstandard) aufgetragen. Für 60 min wurde eine
Spannung von 100 Volt (V) angelegt (Biometra® Standard Power Pack,
biomedizinische Analytik GmbH, Göttingen), die eine Wanderung der negativ
geladenen DNA Moleküle in Richtung Anode bewirkte. Unter ultraviolettem Licht
(254 nm) konnten die fluoreszierenden DNA Banden dargestellt werden.
Photographien des Gels wurden mittels Photosystem E.A.S.Y. RH-3 und des
Programms Gel Pro Analyzer® (Media Cybernetics, Bethesda, Maryland, USA)
angefertigt und abgespeichert.
3.2.5 Genotypisierung der Versuchstiere
Der in Neuseeland durchgeführte Footrot Gen Marker Test (FGMT) liefert eine
Maßzahl für die Wahrscheinlichkeit, dass die Nachkommen der getesteten Probanden
nach einer D. nodosus Infektion klinische Symptome ausbilden. Die beiden vererbten
Allele für die Toleranz gegenüber einer Moderhinkeinfektion können nach HICKFORD
(o. Jg.) entsprechend der Kombinationsmöglichkeiten gemäß Tabelle 3 interpretiert
werden.
MATERIAL UND METHODEN
43
Tab. 3: Beurteilung der Vererbungseigenschaften der Moderhinke auf die
Nachkommen nach HICKFORD (o. Jg.)1
Bewertung der Allelkom-bination der Böcke
Wahrscheinlichkeit der Nachkommen nach Infektion mit D. nodosus klinische Symptome auszubilden (%)
1/2 7 - 19 1/3 10 - 14 1/4 5 - 27 2/3 10 - 26 2/4 17 - 38 3/4 10 - 38 4/5 22 - 83
3.2.5.1 Probennahme und Aufarbeitung der Probe
Die Analyse des DQA2 Genorts wurde in Neuseeland an der Lincoln University
basierend auf dem Untersuchungs- und Beurteilungsverfahren nach HICKFORD et
al. (2004) durchgeführt. Im Vorfeld wurde von jedem Tier eine Blutprobe in 9 ml EDTA
Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht) aus der V. jugularis gewonnen. Die beschrifteten
Röhrchen wurden gleichmäßig geschwenkt, resuspendiert und ca. 100 µl des Inhaltes
auf eine FTA Karte (FTA Cards Whatman, Kent, Großbritannien) pipettiert, sodass ein
im Durchmesser ca. 1,2 - 2 cm hellroter Kreis auf der Karte entstand. Die Pipetten-
spitze durfte bei diesem Vorgang die Karte nicht berühren. Für jede Blutprobe stand
ein vorgegebenes kreisrundes Probenfeld zur Verfügung, das zuvor mit der
zugehörigen Tiernummer gekennzeichnet wurde. Eine auf den FTA Karten befindliche
Lösung bewirkte eine Lysis der Zellmembran und Denaturierung der Proteine. Die
Karten wurden bei Raumtemperatur aufbewahrt, bis ein deutlicher Farbumschlag von
hellrot in dunkelrot eintrat. Auf diesem Weg war eine anschließende PCR-Untersuch-
ung in Neuseeland durchführbar.
1 Tabelle nach LOTTNER (2006), Dissertation Hannover, S. 54
MATERIAL UND METHODEN
44
3.2.6 Klinische Beurteilung des Bewegungsapparates
Das klassische Klauenscoring nach EGERTON und ROBERTS (1971) und das
Locomotion Scoring System nach KALER et al. (2009) wurden zur klinischen
Beurteilung des Bewegungsapparates herangezogen.
3.2.6.1 Klauenscoring
Der Total Foot Score (TFS) nach EGERTON und ROBERTS (1971) wurde von
WHITTINGTON und NICHOLLS (1995) als Total Weighted Digital Score (TWDS)
abgewandelt. Die Aussagekraft des Gesamtwertes konnte erhöht werden, indem alle
acht Klauen eines Tieres und der Schweregrad der Läsionen gewichtet wurden.
Die Ermittlung des TWDS erfolgte zunächst unter der Erhebung der Einzelscores
nach EGERTON und ROBERTS (1971). Dies wurde am umgesetzten Schaf oder
unter Verwendung eines Klauenpflegestands (Klauenpflegestand für Schafe Typ XL,
Patura, Miltenberg) durchgeführt. Um die Klauenveränderungen eindeutig dem
Schweregrad zuordnen zu können, wurde zuvor ein diagnostischer Klauenschnitt
durchgeführt, indem zusammenhangloses und verlängertes Klauenhorn entweder mit
einer Klauenschere (Kerbl, Buchbach), einem Klauenmesser (Kerbl, Buchbach) oder
einer Schleifmaschine (Seriennummer: 1348.7 Bosch, Gerlingen) entfernt wurde. Im
Folgenden sind die Scores nach EGERTON und ROBERTS (1971) anhand von
Bildern, die während des Versuchs angefertigt wurden, dargestellt.
MATERIAL UND METHODEN
45
Die einzelnen Scores pro Gliedmaße wurden für den interdigitalen Spalt, die mediale
sowie laterale Klaue erhoben und in einem Befundbogen notiert. Für den TWDS
wurden die Scores der Unterminierungen von Sohlen-, Ballen- und Wandhorn, im
Abb. 8: Score 4:
Zusätzliche Unterminierung des
abaxialen Wandhorns
Abb. 5: Score 1:
Geringgradige Entzündung der
Haut des interdigitalen Spalts
Abb. 6: Score 2:
Mittelgradige bis hochgradige Ent-
zündung der Haut des interdigi-
talen Spalts, zunehmende Sekret-
bildung im interdigitalen Spalt,
Wahrnehmung eines modrig-
fauligen Geruchs
Abb. 7: Score 3:
Auftreten von interdigitalen Läsi-
onen und Unterminierungen des
Ballen- und Sohlenhorns
MATERIAL UND METHODEN
46
Vergleich zum TFS, quadriert. Es fand eine Gewichtung zwischen unterminiertem
Klauenhorn und interdigital begrenzten Läsionen statt. Abbildung 9 veranschaulicht
den Unterschied beider Gesamtscores.
Abb. 9: Darstellung des TWDS und TFS am Beispiel: Für dieses Tier wäre ein TFS
von 4 zu erheben - vergleichend hat der TWDS einen Gesamtwert von 18 (= 4² + 2)
Der TFS von EGERTON und ROBERTS (1971) berücksichtigt nur die schwer-
wiegendste Veränderung einer Gliedmaße. Für alle vier Gliedmaßen kann maximal
ein Gesamtscore von 16 ermittelt werden, während der TWDS, Werte zwischen 0 bis
136 einnehmen kann. Aus dem Beispiel (s.o.) ist für den Betrachter am Gesamtwert
des TFS nicht erkennbar, ob die virulente Form der Moderhinke vorliegt bzw. wie viele
Gliedmaßen infiziert sind. Es könnte ohne graphische Darstellung auch der Verdacht
einer interdigitalen Dermatitis mit Score 1 Werten bei allen vier Gliedmaßen bestehen.
Im Gegensatz dazu liegt ab einem TWDS von 9 die virulente Form der Moderhinke
vor.
3.2.6.2 Locomotion Scoring
Das Locomotion Scoring erfolgte für jede Behandlungsgruppe separat und wurde bei
guten Lichtverhältnissen auf betoniertem, planen Boden durchgeführt. Die
Beobachtungszeit betrug pro Gruppe mindestens 20 Minuten.
Beachtung fand in der Bewertung nicht nur die Bewegung jedes Tieres, sondern auch
dessen Haltung, welches in 7 Scores (Score 0 - 6) eingestuft wurde. Die folgende
Tabelle wurde für jedes Schaf zu den sechs Beurteilungszeitpunkten ausgefüllt.
vorne links vorne rechts
hinten links hinten rechts
MATERIAL UND METHODEN
47
Tab. 4: Locomotion Scoring nach KALER et al. (2009)
Zusätzliche Aufnahmen in Form von Videosequenzen wurden zur Veranschaulichung
des Therapieerfolgs angefertigt.
3.2.7 Einteilung der Behandlungsgruppen
Die Einteilung der Versuchstiere in die Behandlungsgruppen erfolgte im Anschluss an
das abgeschlossene Klauenscoring. Jeweils acht bzw. für den vierten Durchgang
sieben Tiere wurden neu zusammengestellt, sodass die TWDS im arithmetischen
Mittel für jede Gruppe annähernd gleiche Werte ergaben. Eine Gruppe bestand immer
sowohl aus Schafen, die Unterminierungen aufwiesen als auch aus Tieren, bei denen
die Läsionen auf den interdigitalen Spalt begrenzt waren.
3.2.8 Behandlung
Sechs verschiedene Antibiotika wurden vergleichend zu einem Zinksulfat-Klauenbad
getestet.
Die Antibiotika wurden subkutan (s. c.) an der seitlichen Brustwand kaudal des
Schulterblattes appliziert. Nach Ermittlung des Körpergewichts auf einer Tierwaage
wurden den Tieren jeweils entsprechende Volumina der Präparate injiziert.
Gamithromycin (Zactran®, Merial GmbH, Toulouse, Frankreich) wurde in einer
MATERIAL UND METHODEN
48
Dosierung von 6 mg/kg KGW, Tulathromycin (Draxxin®, Pfizer, Karlsruhe) mit der
Dosierung von 2,5 mg/kg sowie Tildipirosin (Zuprevo®, MSD Animal Health, Intervet
Deutschland GmbH, Unterschleißheim) in der Dosierung von 4 mg/kg KGW und
Lincomycin/Spectinomycin (Lincospectin®, Pfizer, Karlsruhe) als Kombinations-
präparat in der Dosierung von 5 mg/kg KGW Lincomycin und 10 mg/kg KGW
Spectinomycin verabreicht. Die Dosierung von Tilmicosin (Tilmodil®,
WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte eG, Garbsen) wurde nach dem
ersten Durchgang von 5 mg/kg auf 10 mg/kg KGW erhöht. Im Unterschied zu den
anderen Antibiotika erfolgte die Applikation des Langzeitoxytetrazyklins (Baxyl®,
WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte eG, Garbsen) in der Dosierung
von 20 mg/kg KGW 3-mal im Abstand von 48 h. Die anderen Chemotherapeutika
wurden einmalig angewandt. Einen Tag vor Behandlungsbeginn wurden die Boxen, in
denen die Tiergruppen standen, gemäß den Empfehlungen von EGERTON et al.
(1968), gemistet und frisch eingestreut.
Die topische Behandlung in Form eines Klauenbades basierte auf den
Untersuchungen von JALINEK et al. (2001). Zu Beginn jedes Versuchsdurchgangs
wurde das Klauenbad als 10 %ige Golden Hoof plus®-Lösung (10 kg Golden Hoof
plus® auf 100 l Wasser) frisch angesetzt. Die Tiere der Klauenbadbehandlungsgruppe
standen über neun Tage einmal täglich für 10 min in dem Klauenbad und
anschließend mindestens 30 min auf festem Boden zur Abtrocknung der Klauen,
bevor sie zurück in den Stall gebracht wurden. Innerhalb eines Durchgangs wurde das
verringerte Volumen der Klauenbadlösung einmalig durch den Ansatz einer Lösung in
der gleichen Konzentration ausgeglichen. Das Klauenbad stand zwischen den
Behandlungen geschützt vor Umwelteinwirkungen in einem leeren Stallabteil.
3.2.9 Beurteilung des Therapieverlaufs
Locomotion- und Klauenscores wurden an den Tagen 5, 8, 10, 15 und 22 nach
Beginn der Behandlung erhoben. Behandlungen und die Beurteilung des
Bewegungsapparates erfolgten ausschließlich durch die Autorin.
MATERIAL UND METHODEN
49
3.2.10 Statistische Auswertung
Die statistische Auswertung und Darstellung der Ergebnisse wurde in Zusammen-
arbeit mit dem Institut für Biometrie, Epidemiologie und Informationsverarbeitung der
Stiftung Tierärztlichen Hochschule Hannover anhand der Programme Statistical
Analysing System (SAS) Version 9.1 und Microsoft® EXCEL 2003 für Windows XP
durchgeführt.
Die Einteilung der Probanden in Behandlungsgruppen erfolgte nach Berechnung des
arithmetischen Mittelwerts auf Basis der erhobenen Klauenscores vor Behandlungs-
beginn. Hierfür sowie für die Auswertung der Befunde der Nachweisverfahren von
D. nodosus kamen deskriptive statistische Methoden zur Anwendung.
Um die Effektivität der verschiedenen Wirkstoffe im Vergleich zu unbehandelten
Tieren zu ermitteln, wurden die Daten aus einer Studie mit an D. nodosus infizierten
Tieren, die unter ähnlichen Bedingungen in der Klinik für kleine Klauentiere aufgestallt
waren, in die statistische Auswertung mit einbezogen. In dem zuvor stattgefundenen
Tierversuch wurden die Klauenbefunde am 1., 5., 10. und 15. Tag des Tierversuchs
erhoben. Die auf Protokollbögen dokumentierten Klauenläsionen wurden dem Klauen-
score von EGERTON und ROBERTS (1971) angepasst (siehe Kapitel 3.2.6.1). Im
Anschluss wurde der TWDS jedes unbehandelten Tieres zu den einzelnen
Beurteilungszeitpunkten berechnet (siehe Tab. 5).
Tab. 5: TWDS-Werte der unbehandelten Gruppe
TWDS eines Tieres zum Beurteilungszeitpunkt OM 1 OM 2 OM 297 OM 313 OM 315 OM 316 Tag 1 0 1 29 0 22 30 Tag 5 2 34 14 1 25 49 Tag 10 12 11 61 3 60 74 Tag 15 0 13 53 1 75 80 TWDS=Total Weighted Digital Score, OM=Ohrmarke
Zunächst wurden mit Hilfe des Shapiro-Wilk und Kolmogorov-Smirnov Tests die
Klauen- und Locomotion Scores aller Behandlungsgruppen auf Normalverteilung
geprüft.
Die ermittelten Scores wurden zwischen den Versuchsgruppen und innerhalb der
Versuchsgruppe zu den einzelnen Beurteilungszeitpunkten anhand einer
MATERIAL UND METHODEN
50
zweifaktoriellen Varianzanalyse für unabhängige Stichproben mit post-hoc tukey-test
verglichen. Im Anschluss fand eine zusätzliche Adjustierung der Ergebnisse statt.
Folgende Ziele wurden mit der statistischen Auswertung verfolgt;
� Beurteilung der Effektivität der verschiedenen Wirkstoffe eines Versuchsdurch-
gangs untereinander und im Vergleich zur unbehandelten Kontrollgruppe
anhand der erhobenen Klauenscores an den einzelnen
Beurteilungszeitpunkten.
� Bewertung des Therapieerfolgs der verschiedenen Behandlungsgruppen eines
Versuchsdurchgangs mittels der erhobenen Locomotion Scores zu den
einzelnen Beurteilungszeitpunkten im Vergleich zum Locomotion Score vor
Versuchsbeginn. Dieser Parameter wurde nicht mit den Daten einer
unbehandelten Kontrollgruppe verglichen.
� Ermittlung eines eventuell bestehenden statistisch signifikanten
Zusammenhangs zwischen dem „Footrot Rating“ der DQA2 Genotypisierung
der Tiere und der Wahrscheinlichkeit zur Ausprägung klinischer Symptome
mittels Korrelationsanalyse.
Nicht normal verteilte Daten wurden in Form des Interquartilabstands (25 %-Quartil,
Median und 75 % Quartil), der den Wertebereich umfasst, in dem 50 % der Daten
enthalten sind, dargestellt. Somit war eine übersichtliche Darstellung des
Therapieerfolgs (Median-Wert) im Verlauf des Beobachtungszeitraums möglich. Die
Daten des Klauen- und Locomotion Scorings sind wie in Abbildung 10 grafisch
dargestellt zu interpretieren.
MATERIAL UND METHODEN
51
0
1
2
3
4
5
MEDIAN
75 %- QUARTIL
25 %- QUARTIL
INTERQUARTILABSTAND(Q75 - Q25)
Abb. 10: Beispiel der Darstellung der Ergebnisse
Das Signifikanzniveau für alle Vergleiche wurde unterhalb einer Irrtumswahrschein-
lichkeit von 5 % festgelegt (p<0,05). Alle Ergebnisse mit p<0,05 galten somit als
statistisch signifikant.
ERGEBNISSE
53
4 ERGEBNISSE
Das primäre Ziel dieser Studie war der Vergleich des Therapieerfolgs verschiedener
chemotherapeutischer Behandlungen und eines standardisierten Zinksulfatklauen-
bades bei an Moderhinke erkrankten Schafen. Hierfür wurden sechs verschiedene
Antibiotika getestet. Eine statistische Auswertung erfolgte separat für jeden
Versuchsdurchgang. Somit konnte aufgrund der Gruppeneinteilung eine ver-
gleichende Darstellung der Therapieerfolge durchgeführt werden. Zwischen den
Gruppen eines Versuchsdurchgangs bestanden vor Behandlungsbeginn keine signi-
fikanten Unterschiede in den Klauenscores (p>0,05). Die Locomotion Scores wurden
bei der Gruppeneinteilung nicht mit berücksichtigt.
In den ersten beiden Versuchsdurchgängen wurden die drei Behandlungsverfahren,
das Zinksulfatklauenbad und die beiden Antibiotika Tilmicosin und Oxytetrazyklin, auf
ihren Heilungserfolg miteinander verglichen. Im dritten Tierversuch wurde
Lincomycin/Spectinomycin im Vergleich zur Gamithromycin- bzw. Klauenbad-
behandlung betrachtet. Anschließend fand im vierten Versuchsdurchgang ein
Vergleich im Hinblick des Therapieerfolgs zwischen den Makroliden (Tilmicosin,
Gamithromycin, Tulathromycin, Tildipirosin) und dem Zinksulfatklauenbad statt. Die
einzelnen Behandlungsgruppen innerhalb eines Versuchsdurchgangs wurden
vergleichend betrachtet, um mögliche Einflussfaktoren, wie Rasse, Pathogenität der
D. nodosus Stämme oder Umweltbedingungen, auf den Therapieerfolg ausschließen
zu können. Einzig die Tiere der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin und Klauenbadgruppen des
zweiten und dritten Versuchsdurchgangs, die aus einem gemeinsamen Herkunfts-
betrieb stammten, wurden jeweils zusammengefasst und untereinander verglichen.
Die Antibiotika wurden von den Schafen gut toleriert. Lokale Reaktionen an den
Injektionsstellen oder systemische Nebenwirkungen konnten während der Versuchs-
phase nicht beobachtet werden.
Eine Heidschnucke zeigte während des Tierversuchs ein hgr. gestörtes Allgemein-
befinden und musste aus der Studie herausgenommen werden. In der mikro-
biologischen Untersuchung wurde Clostridium perfringens Typ A (C. perfringens
ERGEBNISSE
54
Typ A) aus dem Kot isoliert. Die Ergebnisse der nested PCR und Kultur von
D. nodosus wurden jedoch von diesem Tier in die statistische Auswertung mit
einbezogen.
4.1 Kultureller Nachweis von Dichelobacter nodosus
Vor Behandlungsbeginn wurden von 122 Tieren aus vier Versuchsdurchgängen
Tupferproben entnommen. Die Gewinnung einer Probe von einem Schaf aus dem
zweiten Versuchsdurchgang war aufgrund morphologisch unauffälliger Klauen nicht
durchführbar. Sowohl im Klauenscore als auch im Locomotion Score zeigte das Tier
keine Anzeichen einer Klauenerkrankung. In der Probe für die nested PCR konnten
jedoch Genomsegmente von D. nodosus nachgewiesen werden.
Abbildung 11 stellt die Ergebnisse der kulturell-mikrobiologischen Untersuchung aus
den Versuchsdurchgängen dar. Es fand eine Differenzierung hinsichtlich der Anzahl
an D. nodosus charakteristischen Kolonien statt. Diese morphologischen Merkmale
wurden 1976 von THORLEY definiert und in der vorliegenden Studie bei der
Auswertung angewandt. Jede Kolonie bestand aus einem zentralen Kern mit einer
perlenartigen bzw. papillären Oberfläche, die von einer granulären sowie blassen
Mittelzone begrenzt wurde. Die periphere Zone wies eine matt glänzende Struktur auf.
Zur Bestätigung des Verdachts auf D. nodosus wurde die von LA FONTAINE et
al. (1993) entwickelte PCR Methode durchgeführt.
Im ersten Versuchsdurchgang konnte D. nodosus aus vier (16,7 %) von 24
entnommenen Tupferproben angezüchtet werden. Dies gelang im zweiten
Versuchsdurchgang bei drei (13,0 %) von 23 Tieren. Mit veränderter Entnahmetechnik
konnten im dritten Durchgang bei jedem vierten Tier (25 %) und im letzten
Versuchsdurchgang bei fast der Hälfte der Tiere (48,6 %) Isolate von D. nodosus auf
dem Blut Eugon plus Agar angezüchtet werden.
Insgesamt wurden 34 Isolate aus den 122 Tupferproben gewonnen und für weitere
Untersuchungen konserviert.
ERGEBNISSE
55
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
1 (n = 24) 2 (n = 23) 3 (n = 40) 4 (n = 35)
Versuchsdurchgang (n = Anzahl der beprobten Tiere)
Anz
ahl d
er N
achw
eise
hgr. Keimgehalt
mgr. Keimgehalt
ggr. Keimgehalt
Abb. 11: Anzahl der kulturellen Nachweise von D. nodosus
4.2 Nested PCR
Die adspektorisch erhobene Verdachtsdiagnose Moderhinke konnte zumeist in der
nested PCR bestätigt werden. Die Probennahme fand einmalig vor der Behandlung
der Tiere statt. Bei 120 Tieren (97,6 %) wurden spezifische Genomsegmente von
D. nodosus nachgewiesen. Die Detektion von D. nodosus gelang lediglich bei drei
Tieren (2,4 %) aus dem dritten Versuchsdurchgang nicht. Alle drei Ursprungsbestände
wurden als „Moderhinke positiv“ klassifiziert.
Im Folgenden ist ein Beispiel für das Ergebnis einer PCR abgebildet (Abb. 12). Im
roten Rahmen sind die Tierproben dargestellt, vergleichend sind die positive und die
negative Kontrollprobe gelb bzw. blau markiert. Die Wasserkontrollproben der nested
PCR sind grün eingerahmt.
ERGEBNISSE
56
Abb. 12: Ergebnisse der nested PCR des dritten Versuchsdurchgangs - 24 Proben
(Protokoll: 06.10.2011)
Die Spezifität der PCR wurde an 25 adspektorisch klauengesunden Tieren überprüft.
In keiner der Proben konnten Genomsegmente von D. nodosus nachgewiesen
werden (100 %). In der Tabelle 6 sind vergleichend die Ergebnisse der nested PCR
und des kulturell-mikrobiologischen Nachweisverfahrens dargestellt.
Tab. 6: Nachweisrate der kulturell-mikrobiologischen Untersuchung im Vergleich zur
nested PCR nach BELLOY et al. (2007)
Kulturell D. nodosus positiv Kulturell D. nodosus negativ Gesamt nested PCR positiv 34 85 119 nested PCR negativ 0 3 3 Gesamt 34 88 122
4.3 DQA2-Genotypisierung
Mit der Genotypisierung wurde das Ziel verfolgt, die genetisch determinierte Toleranz
bzw. Empfänglichkeit einheimischer Schafrassen vergleichend zum Schweregrad der
klinischen Veränderungen darzustellen.
Die erste Tierversuchsgruppe setzte sich aus zwei weiblichen Merinoschafen und 22
reinrassigen Grauen Gehörnten Heidschnucken zusammen.
ERGEBNISSE
57
Von insgesamt 12 Heidschnucken konnten die DQA2 Allelkombinationen nicht
bewertet werden. Gemäß den Empfehlungen von HICKFORD (o. Jg.) wäre die
Merzung eines Tieres aus der Gruppe in Betracht zu ziehen. Dieses Schaf (siehe
Tab. 7) wies im Vergleich zu den anderen Heidschnucken den höchsten TWDS-Wert
mit 60 Punkten auf und würde das Ziel einer Senkung der Moderhinke-Prävalenz im
Betrieb gefährden.
Tab. 7: Genotypisierungsergebnisse der ersten Versuchstiergruppe im Vergleich zu
den erhobenen klinischen Befunden
Ohrmarke
Footrot Ratings
TWDS (Tag 1)
TWDS (Tag 22)
Locomotion Score (Tag 1)
Locomotion Score (Tag 22)
50489 2,2 22 0 4 1 50491 2,2 5 0 3 1 50481 2,2 24 1 4 0 80775 2,2 28 0 5 1 74509 2,2 2 1 3 1 74522 2,2 3 1 3 1 80773 2,2 22 0 4 1 36575 2,2 40 0 3 0 4601 2,3 60 0 5 3 80774 2,3 21 0 5 5 23769 3,3 78 1 5 5 50557 2,4 60 0 3 1 36414 2,ur 21 4 0 1 50556 2,ur 20 0 3 1 50558 2,ur 21 1 3 1 50492 2,ur 10 2 3 1 50482 2,ur 23 1 3 0 50490 2,ur 18 0 3 0 50517 2,ur 11 0 0 1 50511 2,ur 11 0 3 1 36415 3,ur / / / / 36565 4,ur 12 1 3 1 50636 4,ur 3 1 4 0 36435 4,ur 27 27 5 4
ur: unratable, nicht beurteilbar, TWDS=Total Weighted Digital Score, das Tier in dem grau hinterlegten
Feld sollte gemäß den Empfehlungen von HICKFORD (o. Jg.) gemerzt werden
Die Probanden aus dem zweiten und dritten Versuchsdurchgang stammten aus
keinem Herdbuchbetrieb. Im Phänotyp wiesen die Tiere Merkmale der Rassen
Coburger Fuchs und Schwarzköpfiges Fleischschaf auf. Von den 24 weiblichen
ERGEBNISSE
58
Schafen aus dem zweiten Tierversuch konnten bei acht Tieren (33 %)
Allelkombinationen ermittelt werden, für die eine hohe Wahrscheinlichkeit der
Weitervererbung einer Toleranz an die Nachkommen besteht. Demgegenüber wurden
bei elf Tieren (45,8 %) Gensequenzen nachgewiesen, welche mit einem erhöhten
Risiko der Nachzucht an Moderhinke zu erkranken vergesellschaftet sind. Sowohl
eine starke Differenzierung zwischen den Allelen, als auch deren nicht sichere
Zuordnung zu „Moderhinketolerant“ oder „erhöhte Empfänglichkeit“ für Moderhinke,
trat bei jeweils zwei Tieren auf (Tab. 8). Im Vergleich zu den Heidschnucken des
ersten Versuchsdurchganges war nur bei einem Tier das Genotypisierungsergebnis
nicht beurteilbar.
ERGEBNISSE
59
Tab. 8: Darstellung der Genotypisierungsergebnisse der zweiten Versuchstiergruppe
im Vergleich zu den erhobenen klinischen Befunden
Ohrmarke
Footrot Ratings
TWDS (Tag 1)
TWDS (Tag 22)
Locomotion Score (Tag 1)
Locomotion Score (Tag 22)
184/095 1,1 1 0 4 2 183/290 1,2 33 3 5 0 184/267 2,2 5 1 2 1 183/255 1,3 34 3 5 4 183/291 2,3 22 2 4 0 183/103 2,3 24 2 5 1 183/012 2,3 33 0 5 5 183/257 2,3 20 1 5 5 27185 3,3 4 0 0 1
184/102 3,3 0 0 0 0 184/098 3,4 52 1 5 0 184/024 3,4 20 0 2 0 27137 3,4 13 0 5 1 27090 3,4 34 0 5 1
184/281 3,5 31 2 3 2 184/118 4,5 23 0 4 1 40376 4,5 21 0 2 1
184/116 4,5 24 0 5 2 184/078 5,5 14 0 5 2 184/254 5,5 3 0 1 1 184/290 5,5 20 0 5 1 183/144 1,4 3 0 4 1 183/152 1,4 22 0 4 1 184/169 uk 39 0 4 3
uk: unbekannt, eine Bewertung ist nur über die Genotypisierung der Elterntiere möglich, TWDS=Total
Weighted Digital Score, Tiere in grau hinterlegten Feldern sollten gemäß den Empfehlungen von
HICKFORD (o. Jg.) gemerzt werden
Aus dem dritten Versuchsdurchgang konnten die Sequenzen am DQA2 Genort von
allen 40 Schafen eindeutig bewertet werden. Demnach wiesen 16 Tiere (40 %) sehr
gute bis gute Vererbungseigenschaften auf eine Toleranz gegenüber Moderhinke auf.
Eine Tendenz weder zu Toleranz noch zu Empfänglichkeit zeigten zwei Tiere in den
Befunden der Genotypisierung. Es müssten laut der Bewertung von HICKFORD
(o. Jg.) 12 Tiere (30 %) gemerzt und für ein weiteres Viertel der Gruppe die
Empfehlung zu dieser Entscheidung ausgesprochen werden (Tab. 9).
ERGEBNISSE
60
Tab. 9: Darstellung der Genotypisierungsergebnisse der dritten Versuchstiergruppe
im Vergleich zu den erhobenen klinischen Befunden
Ohrmarke
Footrot Ratings
TWDS (Tag 1)
TWDS (Tag 22)
Locomotion Score (Tag 1)
Locomotion Score (Tag 22)
170 1,1 40 0 2 0 173 1,1 67 0 5 0 192 1,1 48 2 4 1 195 1,1 30 2 3 0 189 1,2 19 1 5 0 153 1,2 23 0 5 0 156 2,2 22 3 4 0 191 2,2 43 1 2 1 161 1,3 47 0 5 0 172 1,3 69 2 5 0 199 1,3 31 3 2 0 186 1,3 19 0 5 0 152 2,3 66 1 5 1 190 2,3 19 1 5 0 187 2,3 20 0 5 0 194 2,3 19 2 5 0 164 3,3 19 1 5 3 157 3,3 10 1 5 0 160 3,4 39 38 3 5 175 3,4 3 2 5 0 168 3,4 38 1 5 0 185 3,4 22 0 5 0 154 3,4 50 2 5 0 159 3,4 11 0 2 1 151 3,4 2 0 5 0 198 3,5 27 0 3 1 171 4,5 41 1 5 0 174 4,5 19 0 4 1 166 4,5 67 0 5 0 169 5,5 10 1 5 0 158 1,4 11 2 3 0 197 1,4 20 1 4 1 196 1,4 67 0 5 0 163 1,5 10 1 5 4 167 1,5 40 2 4 0 193 2,4 21 1 1 1 162 2,4 20 1 5 0 155 2,4 11 0 5 0 165 2,5 33 0 3 0 184 2,5 20 1 5 0
TWDS=Total Weighted Digital Score, Tiere in grau hinterlegten Feldern sollten gemäß den
Empfehlungen von HICKFORD (o. Jg.) gemerzt werden
ERGEBNISSE
61
Im vierten Durchgang wiesen insgesamt sechs Schafe (17,6 %) sehr gute und 18
Tiere (52,9 %) gute Vererbungseigenschaften auf Moderhinketoleranz auf. Unter den
35 reinrassigen Schwarzköpfigen Fleischschafen wurden zwei Tiere ermittelt, die
weder Empfänglichkeit noch Toleranz an die Nachkommen weitervererben. Im
Vergleich würden acht Tiere aufgrund ihrer genetisch determinierten Immunantwort
die Aufrechterhaltung der hohen Moderhinke-Prävalenz in der Nachkommenschaft
fördern (Tab. 10). Eine weitere Zucht mit diesen Tieren in Hinblick auf eine
Bestandssanierung sollte unterbleiben. Dieses trifft auch auf ein Tier zu, welches in
Abhängigkeit der beiden Allele entweder eine Toleranz oder Empfänglichkeit
gegenüber D. nodosus Infektionen weitervererben würde.
ERGEBNISSE
62
Tab. 10: Darstellung der Genotypisierungsergebnisse der vierten Versuchstiergruppe
im Vergleich zu den erhobenen klinischen Befunden
Ohrmarke
Footrot Ratings
TWDS (Tag 1)
TWDS (Tag 22)
Locomotion Score (Tag 1)
Locomotion Score (Tag 22)
89709 1,1 40 0 4 0 91073 1,1 4 0 1 0 60032 1,2 20 0 5 0 91287 1,2 13 0 3 0 88341 2,2 49 0 3 0 91283 2,2 22 0 5 0 89177 1,3 1 0 1 0 89160 2,3 12 0 3 0 86947 2,3 22 0 2 0 90262 2,3 2 0 3 0 89379 2,3 14 0 3 0 91920 2,3 12 0 3 0 88330 2,3 19 0 3 0 86956 2,3 11 0 2 0 91010 2,3 20 0 5 0 88320 2,3 0 0 3 0 91171 2,3 20 0 4 0 86964 2,3 12 0 2 0 89124 2,3 31 0 3 0 91540 2,3 29 0 0 0 89717 2,3 11 0 4 0 91008 2,3 3 0 1 0 90246 2,3 1 0 5 0 91059 2,3 20 0 1 0 89179 3,3 13 0 3 0 89388 3,3 20 0 5 0 91533 3,4 40 0 2 0 90301 3,5 20 0 3 0 90250 3,5 20 0 3 0 89100 5,5 58 0 5 0 89700 1,4 20 0 5 0 86950 1,5 20 0 3 0 89154 2,4 22 0 1 0 86951 2,5 2 0 2 0 86945 uk 60 0 3 0
uk: unbekannt, eine Bestimmung ist nur über die Genotypisierung der Elterntiere möglich, TWDS=Total
Weighted Digital Score, Tiere in grau hinterlegten Feldern sollten gemäß den Empfehlungen von
HICKFORD (o. Jg.) gemerzt werden
Zwar konnten bei den Heidschnucken aus Versuchsdurchgang 1 die Allelkombin-
ationen von 12 Tieren nicht bewertet werden, aber neun der restlichen zehn
ERGEBNISSE
63
beprobten Tiere wiesen sehr gute bis gute Vererbungseigenschaften auf.
Vergleichbare Resultate bezüglich der Moderhinketoleranz wurden auch bei den
Schwarzköpfigen Fleischschafen des vierten Versuchsdurchgangs ermittelt. Über drei
Viertel der Tiere (n = 26, 76,5 %) wären für eine weitere Zucht auf Moderhinketoleranz
geeignet. Im Vergleich zu den reinrassigen Schafen müsste sich der Schäfer des
zweiten Herkunftsbetriebes von der Mehrheit seiner Tiere (n = 35, 55,6 %), aufgrund
der schlechten bis bedenklichen Vererbungseigenschaften, trennen.
Im letzten Schritt wurde überprüft, ob ein statistisch signifikanter Zusammenhang
zwischen den Genotypisierungsergebnissen und den erhobenen Klauenscores sowie
Locomotion Scores vor Behandlungsbeginn besteht. In der Korrelationsberechnung
konnte jedoch kein Zusammenhang zwischen den Variablen festgestellt werden.
4.4 Klinischer Klauenscore vor Behandlungsbeginn
In der speziellen klinischen Untersuchung konnte adspektorisch die Verdachts-
diagnose der chronischen Form der Moderhinke für drei der vier Versuchstierherden
erhoben werden. Lediglich die Heidschnucken aus dem ersten Versuchsdurchgang
wiesen pathomorphologische Veränderungen auf, die sich ausschließlich auf den
interdigitalen Spalt, das Ballen- sowie Sohlenhorn begrenzten und folglich in das
Stadium eines subakuten Entzündungsprozesses einzuordnen waren. Ablösungen
des abaxialen Wandhorns und Klauenwanddeformationen, wie sie bei 66,6 % der
zweiten Versuchstierherde, bei 15 % der Schafe des dritten Durchgangs und bei
25,7 % der Schwarzköpfigen Fleischschafe des vierten Versuchsdurchgangs
auftraten, repräsentieren den chronischen Verlauf einer Moderhinke. Zusammen-
gefasst konnte für alle vier Versuchsdurchgänge, aufgrund des Vorhandenseins von
Unterminierungen am Ballen- und Sohlenhorn, vor Behandlungsbeginn der Verdacht
auf eine Infektion mit virulenten D. nodosus Stämmen erhoben werden (siehe
Tab. 11).
Schließlich konnten an den Klauen weitere Veränderungen erfasst werden. Dazu
zählte das Vorhandensein von losen Wänden und doppelten Sohlen, die insgesamt
bei acht respektive sieben Schafen auftraten. Insbesondere die Heidschnucken des
ERGEBNISSE
64
ersten Versuchsdurchgangs zeigten diese Veränderungen. Von den 21 Heid-
schnucken besaßen vier Schafe an mindestens einer Klaue eine doppelte Sohle und
weitere zwei Tiere Hohlraumbildungen in der seitlichen Klauenwand.
Im Vergleich zur Vorselektion auf dem Herkunftsbetrieb wiesen zwei Schafe bei dem
ersten Klauenscoring keine pathomorphologischen Veränderungen an den Klauen
mehr auf. Jedoch zeigten diese Tiere eine Lahmheit und wurden somit im zweiten
bzw. vierten Versuchsdurchgang mit berücksichtigt (siehe Tab. 11).
Tab. 11: Klauenbefunde der Schafe vor Behandlungsbeginn
Anzahl der Gliedmaßen mit Klauenveränderungen pro Tier
1. Versuchs- durchgang
(n = 23)
2. Versuchs- durchgang
(n = 24)
3. Versuchs- durchgang
(n = 40)
4. Versuchs- durchgang
(n = 35) 0 1 1 1 4 1 16 15 2 9 6 12 14 3 4 7 5 4 4 6 9 7 1 Gesamt (Gliedmaßen) 58 70 83 59
TWDS Lokalisation und TWDS-Wert der Gliedmaßen mit Klauenveränderungen ≤ 2 > 2 ≤ 2 > 2 ≤ 2 > 2 ≤ 2 > 2 vorne links 6 6 13 12 2 17 7 12 vorne rechts 6 8 9 3 1 16 6 10 hinten links 7 9 9 8 4 17 5 6 hinten rechts 13 3 10 6 8 18 5 8 Gesamt (32) 58 (26) (41) 70 (29) (15) 83 (68) (23) 59 (36) Anzahl der Tiere mit Klauenwanddeformationen und Ablösungen des abaxialen Wandhorns
0
16
6
9
4.5 Therapieerfolge in Abhängigkeit vom Klauenscore
Im ersten Versuchsdurchgang wurden zunächst nur die Behandlungsgruppen zu den
einzelnen Beurteilungszeitpunkten, hinsichtlich des ermittelten TWDS-Werts,
vergleichend betrachtet. Dabei konnten keine signifikanten Unterschiede zwischen
den Tilmicosin-, Oxytetrazyklin- oder Klauenbadbehandlungen erhoben werden
(p=0,3383). Der Therapieerfolg zeigte sich in jeder Behandlungsgruppe ab dem
2. Klauenscoring (p<0,001). Eine signifikante Verbesserung der Klauenscores konnte
bis zum Versuchsende bei allen drei Behandlungsgruppen beobachtet werden.
ERGEBNISSE
65
Der Therapieverlauf der Behandlungsgruppen des ersten Versuchsdurchgangs ist in
Tabelle 12 und im Vergleich zur unbehandelten Gruppe in Abbildung 13 dargestellt.
Signifikante Unterschiede im Vergleich zur unbehandelten Gruppe waren in allen
Behandlungsgruppen ab Tag 10 festzustellen (Tab. 13).
Tab. 12: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum–TWDS-
Werte der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des ersten
Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Oxytetrazyklin MIN 3 1 1 0 0 0 (n = 8) Q25 11,5 2,75 1,75 0,75 0 1 MED 20,5 4,5* 2,5* 1* 0,5* 1* Q75 21,5 11,25 3,25 1 1,25 1,25 MAX 78 80 43 17 2 4 Tilmicosin MIN 5 1 0 0 0 0 (n = 6) Q25 12,75 3,25 2 1 0 0 MED 20 5* 2* 1,5* 0* 0* Q75 23,5 6 2 2 0 0 MAX 60 61 21 2 1 1 Klauenbad MIN 2 3 0 0 0 0 (n = 8) Q25 9 3,75 1,75 0 0 0 MED 21,5 9* 2* 0* 0* 0* Q75 31 14,75 3,25 1,25 0 0,25 MAX 60 31 4 3 2 1 * Signifikante Abweichung (p<0,001) des TWDS (Median-Wert) innerhalb der Behandlungsgruppe im
Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
ERGEBNISSE
66
Oxytetrazyklin (n = 8) Tilmicosin (n = 6) Klauenbad (n = 8) unbehandelte Gruppe (n = 6)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tag 1 Tag 5 Tag 10 Tag 15
TW
DS
Abb. 13: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Oxytetrazyklin, Tilmicosin bzw. Zinksulfat – dargestellt sind im Vergleich
zu den Behandlungsgruppen des ersten Versuchsdurchgangs die Werte einer
unbehandelten Tiergruppe
Tab. 13: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und
Klauenbadgruppen des ersten Versuchsdurchgangs mit den erhobenen
TWDS-Werten einer unbehandelten Gruppe
Vergleiche mit einer unbehandelten Kontrollgruppe (n = 6)
Messzeitpunkt (Tag)
Oxytetrazyklin (n = 8)
Tilmicosin (n = 6)
Klauenbad (n = 8)
5 1,0 0,9999 1,0 10 0,0007 0,0021 <0,001 15 0,0022 0,0006 0,0002
Für Tag 8 und 22 standen keine Vergleichswerte der unbehandelten Gruppe zur Verfügung
Eine Heidschnucke des ersten Versuchsdurchgangs wies nach Tilmicosinbehandlung
keine Verbesserung des Klauenscores auf. Als Konsequenz daraus wurde ab dem
zweiten Versuchsdurchgang die Dosierung des Tilmicosins von 5 mg/kg KGW auf
10 mg/kg KGW erhöht.
Im Anschluss wurden die TWDS-Werte der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Zinksulfat-
gruppen des zweiten und dritten Versuchsdurchgangs zu den Beurteilungszeitpunkten
ERGEBNISSE
67
Tag 5, 8, 10, 15 und 22 vergleichend zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1 betrachtet
(Tab. 14). Der Erfolg der Behandlung zeigte sich in jeder Behandlungsgruppe ab dem
2. Klauenscoring (p<0,001). Eine signifikante Verbesserung der Klauenscores im
Zuge der Therapie konnte bis zum Versuchsende bei allen drei Behandlungsgruppen
beobachtet werden. Zwischen den drei verschiedenen Behandlungen waren jedoch
zu keinem Beurteilungszeitpunkt signifikante Unterschiede festzustellen (p>0,05).
Der Therapieverlauf der drei Behandlungen im Vergleich zur unbehandelten Gruppe
ist in Abbildung 14 grafisch dargestellt.
Signifikante Unterschiede im Vergleich zur unbehandelten Gruppe waren nach der
Behandlung ab dem 2. Scoring bei der Klauenbadgruppe festzustellen. In den
Tilmicosin- und Oxytetrazyklingruppen des zweiten und dritten Versuchsdurchgangs
zeigten sich signifikante Unterschiede der TWDS-Werte im Vergleich zur
unbehandelten Gruppe ab dem 10. Tag nach Versuchsbeginn (Tab. 15).
Tab. 14: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum–
TWDS-Werte der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des zweiten
sowie dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Oxytetrazyklin MIN 3 1 0 0 0 0 (n = 16) Q25 16,75 3,75 2 1 0,75 0 MED 21,5 11* 6* 2* 1* 1* Q75 34,25 14,25 13,5 3 2 2 MAX 69 31 30 16 9 2 Tilmicosin MIN 0 0 0 0 0 0 (n = 16) Q25 10,75 0 0,75 0,75 0 0 MED 23 3* 2* 1* 1* 0* Q75 35,25 19 12 4,5 2 0 MAX 67 39 29 21 20 3 Klauenbad MIN 1 0 0 0 0 0 (n = 16) Q25 19 1 1 0 0,75 0 MED 21 1* 2* 1* 2* 1* Q75 36,25 4 9,5 2 4 1,25 MAX 52 36 27 15 12 3 * Signifikante Abweichung (p<0,001) des TWDS (Median-Wert) innerhalb der Behandlungsgruppe im
Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
ERGEBNISSE
68
Oxytetrazyklin (n = 16) Tilmicosin (n = 16) Klauenbad (n = 16) unbehandelte Gruppe (n = 6)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tag 1 Tag 5 Tag 10 Tag 15
TW
DS
Abb. 14: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer
Moderhinketherapie mit Oxytetrazyklin, Tilmicosin bzw. Zinksulfat – dargestellt sind im
Vergleich zu den Behandlungsgruppen des zweiten und dritten Versuchsdurchgangs
die Werte einer unbehandelten Tiergruppe
Tab. 15: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und
Klauenbadgruppen des zweiten und dritten Versuchsdurchgangs mit den erhobenen
TWDS-Werten einer unbehandelten Gruppe
Vergleiche mit einer unbehandelten Kontrollgruppe (n = 6)
Messzeitpunkt (Tag)
Oxytetrazyklin (n = 16)
Tilmicosin (n = 16)
Klauenbad (n = 16)
5 0,1261 0,0995 0,0054 10 <0,001 <0,001 <0,001 15 <0,001 <0,001 <0,001
Für Tag 8 und 22 standen keine Vergleichswerte der unbehandelten Gruppe zur Verfügung
Des Weiteren fand ein Vergleich zwischen den mit Gamithromycin-, bzw. mit
Lincomycin/Spectinomycin behandelten Tieren des dritten Versuchsdurchgangs und
der Klauenbadgruppe statt. Die Darstellung des Medians, des 25 %-und 75 % Quartils
sowie des Minimums- und Maximums der TWDS-Werte der Behandlungsgruppen im
Zeitverlauf finden sich in der Tabelle 16. Zwischen den verschiedenen Behandlungs-
gruppen konnten keine signifikanten Unterschiede im Heilungsverlauf verzeichnet
werden (p>0,05), jedoch trat bereits ab dem 5. Tag bei allen drei Gruppen eine
ERGEBNISSE
69
signifikante Verbesserung der TWDS-Werte im Vergleich zu den erhobenen
TWDS-Werten zu Versuchsbeginn ein. Diese signifikanten Unterschiede blieben in
den drei Behandlungsgruppen im weiteren Verlauf des Versuchsdurchgangs erhalten.
Zusätzlich wurden in der Gamithromycin- und Klauenbadgruppe ab dem 5. Tag nach
Versuchsbeginn im Vergleich zur unbehandelten Gruppe signifikante Abweichungen
(p<0,05) im Heilungsverlauf festgestellt (Tab. 17). Hoch signifikante Unterschiede der
Lincomycin/Spectinomycingruppe im Vergleich zur unbehandelten Gruppe zeigten
sich ab Tag 10 des Versuchsdurchgangs. In der Abbildung 15 ist der Therapieerfolg
über die Zeit und im Vergleich zur unbehandelten Kontrollgruppe grafisch dargestellt.
Tab. 16: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
TWDS-Werte der Gamithromycin-, Lincomycin/Spectinomycin- und Klauenbad-
gruppen des dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Gamithromycin MIN 10 0 1 0 0 0 (n = 7) Q25 15 1 1,5 0,5 0,5 0,5 MED 20 2* 2* 1* 1* 1* Q75 36,5 7 2,5 2,5 2 1,5 MAX 67 11 4 3 2 2 Linco-/Spectinomycin MIN 19 1 1 0 0 0 (n = 8) Q25 20 1 2,5 1 1,75 0,75 MED 24 3* 3,5* 5,5* 3* 1* Q75 30,25 8 13,75 11,5 3,25 2 MAX 67 30 30 21 12 3 Klauenbad MIN 19 0 1 0 1 0 (n = 8) Q25 19,75 1 1,75 0 2 0,75 MED 22 1* 2* 1,5* 2,5* 1* Q75 44,25 1 2,25 2 3,25 2 MAX 50 2 3 3 4 3 * Signifikante Abweichung (p<0,001) des TWDS (Median-Wert) innerhalb der Behandlungsgruppe im
Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
ERGEBNISSE
70
Gamithromycin (n = 7) Lincomycin/Spectinomycin (n = 8) Klauenbad (n = 8) unbehandelte Gruppe (n = 6)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tag 1 Tag 5 Tag 10 Tag 15
TW
DS
Abb. 15: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Gamithromycin, Lincomycin/Spectinomycin bzw. Zinksulfat – dargestellt
sind im Vergleich zu den Behandlungsgruppen des dritten Versuchsdurchgangs die
Werte einer unbehandelten Tiergruppe
Tab. 17: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Behandlungsgruppen des dritten
Versuchsdurchgangs mit den erhobenen TWDS-Werten einer unbehandelten Gruppe
Vergleiche mit einer unbehandelten Kontrollgruppe (n = 6)
Messzeitpunkt (Tag)
Gamithromycin (n = 7)
Linco-/Spectinomycin (n = 8)
Klauenbad (n = 8)
5 0,0185 0,0585 0,0042 10 <0,001 <0,001 <0,001 15 <0,001 <0,001 <0,001
Für Tag 8 und 10 standen keine Vergleichswerte der unbehandelten Gruppe zur Verfügung
Im vierten Versuchsdurchgang wurde die Wirksamkeit von Tilmicosin, Gamithromycin,
Tildipirosin und Tulathromycin im direkten Vergleich zum Zinksulfat-Klauenbad
getestet. Es konnten keine signifikanten Unterschiede zwischen den Behand-
lungsgruppen festgestellt werden (p>0,05). Eine signifikante Verbesserung der
TWDS-Werte im Vergleich zum ersten Scoring konnte bereits ab dem 5. Tag nach
Behandlungsbeginn verzeichnet werden (Tab. 18 sowie Abb. 16 und 17). Die
ERGEBNISSE
71
signifikante Verbesserung der Klauenscores im Zuge der Therapie konnte bis zum
Versuchsende bei allen drei Behandlungsgruppen beobachtet werden.
Im Vergleich zur unbehandelten Gruppe waren ab dem 2. Klauenscoring am Tag 5
des Versuchsdurchgangs signifikante Unterschiede bei allen fünf Behandlungs-
gruppen zu beobachten (Tab. 19). Die Abbildungen 16 und 17 geben einen Überblick
über den Therapieverlauf zwischen den Behandlungsgruppen und im Vergleich zur
Kontrollgruppe.
Tab. 18: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
TWDS-Werte der Makrolid- und Klauenbadgruppen des vierten Versuchsdurchgangs
im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Tilmicosin MIN 1 0 0 0 0 0 (n = 7) Q25 7 1 0 0 0 0 MED 20 1* 1* 0* 0* 0* Q75 31 2 1 0 0 0 MAX 40 11 1 0 0 0 Gamithromycin MIN 2 1 0 0 0 0 (n = 7) Q25 12 1 1 0 0 0 MED 19 2* 1* 1* 0* 0* Q75 20 2 1,5 1 0 0 MAX 49 20 19 2 0 0 Tildipirosin MIN 0 0 0 0 0 0 (n = 8) Q25 15,5 1 0 0 0 0 MED 20 2* 0* 0* 0* 0* Q75 25,5 6 1 1 0 0 MAX 31 21 2 2 0 0 Tulathromycin MIN 1 1 0 0 0 0 (n = 7) Q25 8 2 0,5 0 0 0 MED 20 2* 1* 0* 0* 0* Q75 21 3 1 0 0 0 MAX 58 19 1 1 0 0 Klauenbad MIN 0 0 0 0 0 0 (n = 7) Q25 11,5 1 0 0,5 0 0 MED 13 2* 1* 1* 0* 0* Q75 20 2,5 1 1 0 0 MAX 60 3 9 1 0 0 * Signifikante Abweichung (p<0,001) des TWDS (Median-Wert) innerhalb der Behandlungsgruppe im
Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
ERGEBNISSE
72
Tilmicosin (n = 7) Klauenbad (n = 7) unbehandelte Gruppe (n = 6)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tag 1 Tag 5 Tag 10 Tag 15
TW
DS
Abb. 16: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Tilmicosin bzw. Zinksulfat – dargestellt sind im Vergleich zu diesen
beiden Behandlungsgruppen des vierten Versuchsdurchgangs die Werte einer
unbehandelten Tiergruppe
Gamithromycin (n = 7) Tildipirosin (n = 7) Tulathromycin (n = 7) unbehandelte Gruppe (n = 6)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tag 1 Tag 5 Tag 10 Tag 15
TW
DS
Abb. 17: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Gamithromycin, Tildipirosin bzw. Tulathromycin – dargestellt sind im
Vergleich zu diesen drei Makrolidgruppen des vierten Versuchsdurchgangs die Werte
einer unbehandelten Tiergruppe
ERGEBNISSE
73
Tab. 19: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Behandlungsgruppen des vierten
Versuchsdurchgangs mit den erhobenen TWDS-Werten einer unbehandelten Gruppe
Vergleiche mit einer unbehandelten Kontrollgruppe (n = 6)
Messzeitpunkt (Tag)
Tilmicosin (n = 7)
Gamithromycin (n = 7)
Tildipirosin (n = 7)
Tulathromycin (n = 7)
Klauenbad (n = 6)
5 0,0025 0,0057 0,0098 0,0070 0,0016 10 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 15 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001
Für Tag 8 und 10 standen keine Vergleichswerte der unbehandelten Gruppe zur Verfügung
Abschließend wurden die TWDS-Werte für alle angewendeten Wirkstoffe aus den vier
Versuchsdurchgängen vergleichend betrachtet.
Ab dem 5. Tag nach Versuchsbeginn setzte in allen sieben Behandlungsgruppen
(Tilmicosin, Oxytetrazyklin, Zinksulfat-Klauenbad, Lincomycin/Spectinomycin,
Gamithromycin, Tulathromycin und Tildipirosin) eine signifikante Besserung der
TWDS-Werte im Vergleich zum TWDS-Wert vor der Behandlung ein (p<0,05). Hoch
signifikante Unterschiede zur unbehandelten Kontrollgruppe waren ab Tag 10
festzustellen (p<0,001). In der Tabelle 20 ist der Therapieerfolg der Behandlungs-
gruppen der vier Versuchsdurchgänge vergleichend dargestellt. Unter Berücksichtig-
ung der Definition nach WHITTINGTON und NICHOLLS (1995) zählte ein Tier als
genesen, wenn der erhobene TWDS≤1 war.
Tab. 20: Therapieerfolg der Behandlungsgruppen im Klauenscoring: Anzahl (n) und
Prozentsatz (%) der Tiere, die zum Versuchsende keine lokalen Symptome einer
Moderhinke mehr zeigten
Oxytetra- zyklin
(n = 24)
Tilmicosin
(n = 29)
Gamithro- mycin
(n = 14)
Tildipirosin
(n = 7)
Tulathro- mycin (n = 7)
Lincomycin/ Spectinomycin
(n = 8)
Klauenbad
(n = 31)
TWDS
Behandlungserfolg am Ende des Tierversuchs (Tag 22)
0
8 (33,3 %)
25 (86,2 %)
9 (64,3 %)
7 (100 %)
7 (100 %)
2 (25,0 %)
20 (64,5 %)
1
9 (37,5 %)
3 (10,3 %)
3 (21,4 %)
0 (0 %)
0 (0 %)
3 (37,5 %)
7 (22,6 %)
Gesamt 70,8 % 96,5 % 85,7 % 100 % 100 % 62,5 % 87,1 %
ERGEBNISSE
74
4.6 Therapieerfolge in Abhängigkeit vom Locomotion Score
Der Locomotion Score stellte einen zusätzlichen Parameter für die vergleichende
Beurteilung der Effektivität der sieben Wirkstoffe dar. Daten einer unbehandelten
Gruppe standen hierbei nicht zur Verfügung.
Zunächst wurden die Locomotion Scores der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauen-
badgruppen des ersten Versuchsdurchgangs statistisch ausgewertet. Signifikante
Unterschiede zwischen den drei Behandlungsverfahren waren am Ende des
Versuchsdurchgangs nicht festzustellen (p=0,9560). Bereits beim 2. Scoring (Tag 5)
konnte eine Verbesserung des Bewegungsbildes verzeichnet werden (Tab. 21). In Ab-
bildung 18 sind der Median-Wert sowie das 25 %- und 75 %-Quartil der Locomotion
Scores der drei Gruppen im Verlauf des Versuchs dargestellt.
Tab. 21: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
Locomotion Scores der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des ersten
Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Oxytetrazyklin MIN 0 0 0 0 0 0 (n = 8) Q25 3 0 0 0,75 1 0,75 MED 3 0,5* 1* 1* 1* 1* Q75 3,25 1,5 3 1,5 1 1 MAX 5 5 5 5 5 5 Tilmicosin MIN 0 1 0 0 0 0 (n = 6) Q25 3 1,25 0,25 1 1 0,25 MED 3,5 2,5* 1* 1* 1* 1* Q75 4 3 2,5 1,75 2,5 1 MAX 5 3 3 4 3 3 Klauenbad MIN 3 0 0 0 0 0 (n = 8) Q25 3 0,75 0,75 0,75 1 1 MED 3 1* 1* 2* 1* 1* Q75 4,25 3,5 3 3 3 1 MAX 5 5 3 3 5 5 * Signifikante Abweichung (p<0,001) des Locomotion Scores (Median-Wert) innerhalb der Behand-
lungsgruppe im Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
ERGEBNISSE
75
Oxytetrazyklin (n = 8) Tilmicosin (n = 6) Klauenbad (n = 8)
0
1
2
3
4
5
6
Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22
Loco
mot
ion
Sco
re
Grenzwert der Lahmheit definiert nach KALER et al. (2009)
Abb. 18: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Zinksulfatgruppe des
ersten Versuchsdurchgangs
Auch zwischen den Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des zweiten
und dritten Versuchsdurchgangs stellten sich am Ende des Versuchsdurchgangs
keine signifikanten Unterschiede bezüglich der Locomotion Scores dar (p=0,9072).
Jeweils fünf Tage nach Versuchsbeginn sanken die Locomotion Scores in den drei
Behandlungsgruppen im Vergleich zum Ausgangswert signifikant ab (p<0,001). Dieser
Effekt wurde bis einschließlich zum letzten Beurteilungszeitpunkt beobachtet
(Tab. 22). In Abbildung 19 ist der Behandlungserfolg im Verlauf der Studie vergleich-
end dargestellt.
ERGEBNISSE
76
Tab. 22: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum–
Locomotion Scores der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des
zweiten sowie dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Oxytetrazyklin MIN 0 0 0 0 0 0 (n = 16) Q25 2 2 1 0,75 1 0 MED 4,5 3* 2,5* 2* 1* 0* Q75 5 3 3 3 2 1 MAX 5 5 5 5 5 5 Tilmicosin MIN 0 0 0 0 0 0 (n = 16) Q25 4 2 2 1 0 0 MED 5 3* 2* 2* 1* 0,5* Q75 5 4 3 3 2 1 MAX 5 5 4 4 4 3 Klauenbad MIN 2 0 0 0 0 0 (n = 16) Q25 4 2 1,75 1 0 0 MED 5 3* 3* 2* 1,5* 1* Q75 5 4 4 3,25 2,25 1,25 MAX 5 5 5 5 5 5 * Signifikante Abweichung (p<0,001) des Locomotion Scores (Median-Wert) innerhalb der Behand-
lungsgruppe im Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
Oxytetrazyklin (n = 16) Tilmicosin (n = 16) Klauenbad (n = 16)
0
1
2
3
4
5
6
Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22
Loco
mot
ion
Sco
re
Grenzwert der Lahmheit definiert nach KALER et al. (2009)
Abb. 19: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Zinksulfatgruppen des
zweiten sowie dritten Versuchsdurchgangs
Im Anschluss fand ein Vergleich zwischen den Locomotion Scores der mit
Gamithromycin, Lincomycin/Spectinomycin und Zinksulfat behandelten Tieren des
ERGEBNISSE
77
dritten Versuchsdurchgangs statt. Eine signifikante Verbesserung der Locomotion
Scores der Klauenbadgruppe konnte im Vergleich zur Gamithromycingruppe am
Tag 15 des Versuchsdurchgangs nachgewiesen werden (p=0,009). Weitere
signifikante Unterschiede zwischen den Behandlungsgruppen stellten sich während
des Beobachtungszeitraums nicht dar (Tab. 23). Bereits am Tag 5 setzte in den
Gruppen, infolge der Behandlung, eine signifikante Verbesserung der Locomotion
Scores im Vergleich zum Ausgangswert ein (p<0,05). Die signifikanten Unterschiede
der Locomotion Scores zwischen den einzelnen Beurteilungszeitpunkten im Vergleich
zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1 bleiben während des gesamten Beobachtungs-
zeitraums erhalten (p<0,0018). Die Medianwerte, sowie jeweils das erste und dritte
Quartil der Locomotion Scores sind vergleichend für die drei Gruppen in Abbildung 20
dargestellt.
Tab. 23: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
Locomotion Scores der Gamithromycin-, Lincomycin/Spectinomycin- und
Klauenbadgruppen des dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Gamithromycin MIN 3 2 2 2 2 0 (n = 7) Q25 3,5 3 2,5 2,5 2 0 MED 5 3* 3* 3* 4* 0* Q75 5 4 3,5 3,5 4 1,5 MAX 5 4 5 4 5 4 Linco-/Spectinomycin MIN 1 1 1 1 2 0 (n = 8) Q25 2,75 2 2 2 2 0 MED 3,5 2,5* 2,5* 2* 2,5* 0* Q75 5 3 3 2,25 3 1 MAX 5 4 4 4 3 1 Klauenbad MIN 1 1 1 1 0 0 (n = 8) Q25 2,75 2 2,75 1,75 0 0 MED 3,5 2* 3* 2* 1* 0* Q75 5 3 3,25 2 2 0,25 MAX 5 5 4 3 2 1 * Signifikante Abweichung (p<0,05) des Locomotion Scores (Median-Wert) innerhalb der Behand-
lungsgruppe im Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
ERGEBNISSE
78
Gamithromycin (n = 7) Lincomycin/Spectinomycin (n = 8) Klauenbad (n = 8)
0
1
2
3
4
5
6
Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22
Loco
mot
ion
Sco
re
Grenzwert der Lahmheit definiert nach KALER et al. (2009)
Abb. 20: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Gamithromycin-, Lincomycin/Spectinomycin- und
Zinksulfatgruppe des dritten Versuchsdurchgangs
Signifikante Unterschiede zwischen den fünf Behandlungsgruppen des vierten
Durchgangs waren am Ende des Versuchsdurchgangs nicht festzustellen (p=0,8975).
Im Studienverlauf trat ab dem 5. Tag eine signifikante Verbesserung des
Bewegungsbildes in den fünf Gruppen auf (p<0,001). Dieser Effekt konnte bis zum
Ende des vierten Tierversuchs beobachtet werden. Median, 25 %- und 75 %-Quartil
sowie Minimum und Maximum der Locomotion Scores der Tilmicosin-,
Gamithromycin-, Tildipirosin-, Tulathromycin- und Klauenbadgruppen sind in
Tabelle 24 dargestellt. Vergleichend zur Klauenbadbehandlung zeigen die
Abbildungen 21 und 22 den Behandlungserfolg bezüglich des Locomotion Scores der
vier verschiedenen Makrolidgruppen.
ERGEBNISSE
79
Tab. 24: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
Locomotion Scores der Makrolid- und Klauenbadgruppen des vierten
Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf
Gruppe Wert Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22 Tilmicosin MIN 1 0 0 0 0 0 (n = 7) Q25 2 0 0 0 0 0 MED 3 1* 0* 0* 0* 0* Q75 3 1 1 0 0 0 MAX 4 1 1 1 0 0 Gamithromycin MIN 2 0 0 0 0 0 (n = 7) Q25 3 0 0 0 0 0 MED 3 1* 0* 0* 0* 0* Q75 3 1,5 1 0,5 0 0 MAX 3 3 2 1 0 0 Tildipirosin MIN 0 0 0 0 0 0 (n = 8) Q25 1 0 0 0 0 0 MED 3 1* 0* 0* 0* 0* Q75 4,5 1 1 0,5 0 0 MAX 5 2 1 1 0 0 Tulathromycin MIN 1 0 0 0 0 0 (n = 7) Q25 2 0,5 0 0 0 0 MED 5 1* 0* 0* 0* 0* Q75 5 1 0,5 0 0 0 MAX 5 2 2 0 0 0 Klauenbad MIN 2 0 0 0 0 0 (n = 7) Q25 2,5 0 0 0 0 0 MED 3 0* 0* 0* 0* 0* Q75 3,5 1 1 1 0 0 MAX 5 1 1 1 0 0 * Signifikante Abweichung (p<0,001) des Locomotion Scores (Median-Wert) innerhalb der Behand-
lungsgruppe im Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1
ERGEBNISSE
80
Tilmicosin (n = 7) Gamithromycin (n = 7) Klauenbad (n = 7)
0
1
2
3
4
5
6
Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22
Loco
mot
ion
Sco
re
Grenzwert der Lahmheit definiert nach KALER et al. (2009)
Abb. 21: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Tilmicosin-, Gamithromycin- und Zinksulfatgruppe des
vierten Versuchsdurchgangs
Tildipirosin (n = 7) Tulathromycin (n = 7) Klauenbad (n = 7)
0
1
2
3
4
5
6
Tag 1 Tag 5 Tag 8 Tag 10 Tag 15 Tag 22
Loco
mot
ion
Sco
re
Grenzwert der Lahmheit definiert nach KALER et al. (2009)
Abb. 22: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Tildipirosin-, Tulathromycin- und Zinksulfatgruppe des
vierten Versuchsdurchgangs
In Tabelle 25 ist der Therapieerfolg innerhalb der Behandlungsgruppen aller vier
Versuchsdurchgänge vergleichend dargestellt. Basierend auf der Definition nach
KALER et al. (2009) wiesen Tiere mit einem Locomotion Score ≤ 1 keinen Verdacht
auf eine Moderhinke in der Bewegungsanalyse auf. Nur diese Tiere wurden im
prozentualen Vergleich berücksichtigt.
ERGEBNISSE
81
Tab. 25: Therapieerfolg der Behandlungsgruppen im Locomotion Scoring (LS): Anzahl
(n) und Prozentsatz (%) der Tiere, die am Ende des Versuchszeitraums keine
Lahmheit mehr zeigten
Oxytetra- zyklin
(n = 24)
Tilmicosin
(n = 29)
Gamithro- mycin
(n = 14)
Tildipirosin
(n = 7)
Tulathro- mycin (n = 7)
Lincomycin/ Spectinomycin
(n = 8)
Klauenbad
(n = 31)
LS
Behandlungserfolg am Ende des Tierversuchs (Tag 22)
0
11 (45,8 %)
17 (58,6 %)
12 (85,7 %)
7 (100 %)
7 (100 %)
5 (62,5 %)
15 (48,4 %)
1
10 (41,7 %)
9 (31,0 %)
0 (0 %)
0 (0 %)
0 (0 %)
3 (37,5 %)
11 (35,5 %)
Gesamt 87,5 % 89,6 % 85,7 % 100 % 100 % 100 % 83,9 %
Abschließend ist in Tabelle 26 die prozentuale Verbesserung der Klauen- sowie
Locomotion Scores der Schafe nach Antibiotikatherapie im Vergleich zum
Zinksulfatklauenbad dargestellt. Hierfür wurden die Locomotion Scores der
Behandlungsgruppen der vier Versuchsdurchgänge zu den einzelnen Beurteilungs-
zeitpunkten zusammengefasst und ab dem 5. Tag nach Studienbeginn vergleichend
zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1 betrachtet.
Die Heilungsraten unterschieden sich zwischen den Behandlungsgruppen nur
geringfügig, wobei der Erfolg der Therapie sich stets zunächst am Klauenscore und
erst im Nachhinein am Locomotion Score bemerkbar machte.
Jeweils ein Schaf aus dem ersten und dritten Versuchsdurchgang, welche mit
Tilmicosin bzw. Gamithromycin behandelt wurden, zeigten während des gesamten
Beobachtungszeitraums keine Verbesserung an den Klauen und in der Bewegung.
Die jeweiligen Wirkstoffe wurden den Tieren erneut subkutan verabreicht, woraufhin
eine Abheilung der Klauenläsionen einsetzte. Da somit auf eine vorangegangene
Fehlinjektion geschlossen werden konnte, wurden diese Tiere in der statistischen
Auswertung nicht berücksichtigt.
ERGEBNISSE
82
Tab. 26: Anzahl (n) und prozentualer Anteil (%) der Schafe aller Behandlungsgruppen
der vier Versuchsdurchgänge, bei denen sich die Klauen- sowie Locomotion Scores
durch die Therapie im Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1 verbesserten
Beurteilungszeitpunkt
Tag 5
Tag 8
Tag 10
Tag 15
Tag 22
TWDS 19
(79 %) 20
(83 %) 23
(96 %) 23
(96 %) 24
(100 %) Oxytetrazyklin (n = 24) LS
19 (79 %)
20 (83 %)
23 (96 %)
23 (96 %)
24 (100 %)
TWDS 24
(83 %) 26
(90 %) 29
(100 %) 28
(97 %) 29
(100 %) Tilmicosin (n = 29) LS
23 (79 %)
25 (86 %)
26 (90 %)
28 (97 %)
27 (93 %)
TWDS 12
(86 %) 13
(93 %) 14
(100 %) 14
(100 %) 14
(100 %) Gamithromycin (n = 14) LS
9 (64 %)
12 (86 %)
13 (93 %)
12 (86 %)
14 (100 %)
TWDS 7
(100 %) 7
(100 %) 7
(100 %) 7
(100 %) 7
(100 %) Tildipirosin (n = 7) LS
5 (71 %)
5 (71 %)
6 (86 %)
7 (100 %)
7 (100 %)
TWDS 6
(86 %) 6
(86 %) 7
(100 %) 7
(100 %) 7
(100 %) Tulathromycin (n = 7) LS
5 (71 %)
6 (86 %)
7 (100 %)
7 (100 %)
7 (100 %)
TWDS 7
(88 %) 6
(75 %) 8
(100 %) 8
(100 %) 8
(100 %) Lincomycin/Spectinomycin (n = 8) LS
2 (25 %)
2 (25 %)
5 (63 %)
5 (63 %)
7 (88 %)
TWDS 26
(84 %) 29
(94 %) 31
(100 %) 31
(100 %) 31
(100 %) Klauenbad (n = 31) LS
22 (71 %)
26 (84 %)
27 (87 %)
26 (84 %)
29 (94 %)
TWDS=Total Weighted Digital Score, LS=Locomotion Score, T=Tag
DISKUSSION
83
5 DISKUSSION
5.1 Eignung der verwendeten Versuchstiere und der M ethodik für die Frage-stellung
5.1.1 Versuchstiere und Haltungsbedingungen
In dieser Studie wurde die These von EGERTON et al. (1968) überprüft, dass die
einmalige Anwendung eines Antibiotikums zur Reduzierung der klinischen Symptome
einer Moderhinke führt. Neuere Forschungsprojekte beschreiben, den Sanierungs-
erfolg bzw. die Senkung der Moderhinke-Prävalenz auf < 2 %, sobald folgende
Voraussetzungen erfüllt werden: frühzeitige Erkennung einer Stützbeinlahmheit durch
den Tierhalter, die fundierte Abklärung der Diagnose und letztendlich die chemo-
therapeutische Behandlung innerhalb von drei Tagen nach Beobachtung der ersten
klinischen Symptome (WASSINK et al. 2003, 2010; KALER u. GREEN 2008b, 2009).
Verschiedene Behandlungsansätze im Rahmen eines solchen Sanierungs- bzw.
Behandlungsprogramms wurden an 122 Schafen in vier Versuchsdurchgängen ge-
testet.
Die Schafe stammten aus drei verschiedenen Beständen, in denen seit mehreren
Jahren intermittierende Lahmheiten, verursacht durch D. nodosus, beobachtet
wurden. Bei der Wahl der Probanden wurde die genetische Prädisposition einzelner
Schafrassen für die Empfänglichkeit gegenüber Moderhinke (EMERY 1984) sowie das
Alter (PUGH u. BAIRD 2012) und Geschlecht (SKERMAN et al. 1988) der Tiere nicht
berücksichtigt. Die Einteilung der Behandlungsgruppen erfolgte ausschließlich in
Abhängigkeit von dem Schweregrad der klinischen Symptome an den Klauen.
Das ursprüngliche Ziel, Tiere während eines akuten Entzündungsprozesses zu
behandeln, konnte in allen vier Versuchsdurchgängen nicht erreicht werden. In der
Regel trat akute Moderhinke mit subakuten und chronischen Fällen gemischt auf.
Neben interdigitalen Dermatitiden wiesen die Heidschnucken des ersten
Versuchsdurchganges Mazerationen des Ballen- und Sohlenhorns auf, die bei 26 der
befundeten Gliedmaßen mit einer Sekretbildung einherging. Die Schafe im zweiten
Durchgang zeigten Merkmale für den chronischen Verlauf der Moderhinke. Ohne ein
großzügiges Entfernen des Ballen- und Sohlenhorns wäre ein Klauenscoring nicht
DISKUSSION
84
durchführbar gewesen. Ferner muss davon ausgegangen werden, dass die topische
Behandlung bei der Klauenbadgruppe keine bzw. nur eine unzureichende Wirkung
erzielt hätte. Vergleichbare Befunde konnten bei den Tieren des dritten
Versuchsdurchganges erhoben werden. Hier traten bei sechs Tieren
Unterminierungen des abaxialen Wandhorns auf, die ohne einen Eingriff in den
Entzündungsprozess ebenfalls Klauenwanddefomationen hervorgerufen hätten. Die
Klauenbefunde der Schafe des letzten Versuchsdurchganges konnten einer
chronischen Moderhinke zugeordnet werden. Schafherden, bei denen ausschließlich
akute Formen der Moderhinke vorliegen, sind in Deutschland im Vergleich zu
beispielsweise den skandinavischen Ländern selten vorzufinden. Während in
Schweden seit 2004 (OLOFSSON et al. 2005), in Norwegen seit 2008 (MELING u.
ULVUND 2009) und in Dänemark seit 2009 (ANGEN et al. 2010) Moderhinke
endemisch auftritt, werden in hiesigen infizierten Herden, in Abhängigkeit von den
Witterungsbedingungen und Therapiemaßnahmen, seit Jahrzehnten unterschiedliche
Prävalenzen beschrieben (LOTTNER 2006; KUHLEMANN 2011; FRIEDRICH 2012).
Somit ist davon auszugehen, dass bei der Anwendung des dänischen
Sanierungsmodells zwar ein Behandlungserfolg eintritt, ob das endgültige Ziel der
Moderhinkefreiheit erreicht werden kann, bleibt jedoch fraglich.
Als Haltungsform wurde eine Aufstallung der Tiere in eingestreute Boxen, die
mindestens einmal pro Woche gereinigt wurden, gewählt. Unter vergleichbaren
Haltungsbedingungen standen die Kontrolltiere aus einer früheren Studie. In einer
Schäferei ist eine solche Haltung wirtschaftlich nicht durchführbar. Folglich muss bei
der Beurteilung der Effektivität der angewandten Behandlungsverfahren berücksichtigt
werden, dass diese Wirksamkeitsstudie unter klinischen Bedingungen stattfand.
Studien in Feldversuchen könnten aufgrund der klimatischen Verhältnisse und den
Haltungsbedingungen zu geringeren Heilungsraten führen. So hatten bereits
EGERTON et al. (1968) sowie WEBB WARE et al. (1994) festgestellt, dass die
Heilungsrate nach einer parenteralen Antibiotikatherapie steigt, wenn die Tiere parallel
für mindestens 24 Stunden auf trockenem Untergrund aufgestallt werden.
DISKUSSION
85
5.1.2 Labordiagnostische Nachweisverfahren
Die Bestätigung der klinischen Verdachtsdiagnose Moderhinke erfolgte mittels des
kulturellen Nachweises von D. nodosus auf Blut Eugon Agar (STEWART u.
CLAXTON 1993) sowie mittels nested PCR nach BELLOY et al. (2007). Beide
Methoden sind standardisierte Nachweisverfahren, die international in Sanierungs-
programmen oder in wissenschaftlichen Studien Anerkennung finden. Trotzdem ist die
Nachweisrate, abgeleitet aus den Ergebnissen der vorliegenden Arbeit, stark
abhängig von der Probennahme. Das Probenmaterial wurde in den ersten beiden
Untersuchungsgängen ausschließlich von unterhalb des mit einem Klauenmesser
angehobenen axialen Wandhorns entnommen. Jedoch zeigte sich, dass für die
kulturelle Untersuchung der interdigitale Spalt, als Entnahmestelle bevorzugt werden
sollte. Der Gewinn an Isolaten konnte mit dieser Technik ab dem dritten
Versuchsdurchgang entscheidend gesteigert werden (siehe Kapitel 5.2.1).
Laut BELLOY et al. (2007) ist die Lokalisation der Probennahme für die nested PCR
im Vergleich zur kulturellen Untersuchung unbedeutend. Die von den
Wissenschaftlern beschriebene Beeinträchtigung der nested PCR, die in Folge einer
Probennahme mit Baumwolltupfern entsteht, wurde in der vorliegenden Arbeit durch
die Verwendung von gewöhnlichen Zahnstochern verhindert. Im Vergleich zu
Baumwolltupfern kann somit auch Probenmaterial aus den tieferen Schichten der
Epidermis gewonnen werden, wo das für D. nodosus zwingend notwenige anaerobe
Milieu vorliegt. Im Weiteren vermuteten bereits EGERTON und ROOD (1996) sowie
MOORE et al. (2005), dass der molekulargenetische Nachweis von D. nodosus durch
kontaminierte Proben beeinflusst wird. Baumwolltupfer besitzen im Gegensatz zu den
Holzstäbchen eine große Oberfläche und saugen die umliegende Flüssigkeit auf,
während bei der Verwendung von spitzen Materialien eine gezieltere Entnahme
erfolgen kann.
Die nested PCR stellt eine zuverlässige und schnelle Nachweismethode dar, die mit
wenig Arbeitsaufwand verbunden ist. Der entscheidende Vorteil der nested PCR
besteht darin, dass eine aufwändige kulturelle Untersuchung unter anaeroben
Bedingungen entfällt. Von den Holzstäbchen kann sofort nach der Entnahme die DNA
isoliert werden. Für weiterführende epidemiologische Untersuchungen sowie für die
DISKUSSION
86
Herstellung stallspezifischer Vakzinen ist der kulturelle Nachweis von D. nodosus
jedoch unabdingbar.
Weitere labordiagnostische Methoden, die in dieser Studie nicht durchgeführt wurden,
hätten das Gesamtbild (bei einer epidemiologischen Untersuchung) vervollständigen
können. Hierzu zählen ein Virulenznachweis oder die Bestimmung der Serogruppen
bzw. Serotypen der D. nodosus-Isolate (WANI u. SAMANTA 2006). Die vorliegende
Arbeit ist jedoch als Wirksamkeitsstudie ausgelegt, so dass weitere labor-
diagnostische Untersuchungen von untergeordneter Bedeutung waren. Erste Ansätze
für die Weiterentwicklung der nested PCR wurden zusammen mit dem Institut für
Mikrobiologie der Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover erarbeitet. Basierend
auf der Erkenntnis von KENNAN et al. (2011), dass das thermostabile Protease Gen
aprV2 für die Aktivität der extrazellulären Elastase verantwortlich ist, könnte mit der
Entwicklung von spezifischen Primern zukünftig in Deutschland ein Virulenznachweis
zur Verfügung stehen.
5.1.3 Genotypisierung
Mit der Genotypisierung wurde das Ziel verfolgt, die genetisch determinierte Toleranz
bzw. Empfänglichkeit einheimischer Schafrassen vergleichend zum Schweregrad der
klinischen Veränderungen darzustellen. Außerdem sollte überprüft werden, ob
eventuelle „Therapieversager“ eine erhöhte genetische Empfänglichkeit für
Moderhinke aufweisen. In Sanierungsprogrammen wird die Genotypisierung für die
Zuchtböcke einer Herde empfohlen (GREER 2005). Diese Studie hingegen zeigt die
Empfänglichkeit der Schafe unabhängig vom Geschlecht auf. Die Ergebnisse wurden
in Form des von HICKORD (o. Jg.) entwickelten „Footrot Ratings“, einem Bewertungs-
schema bestehend aus je zwei Zahlen zwischen 1 und 5, angegeben. Die diesem
Bewertungsschema zugrunde liegenden DQA2 Allelkombinationen wurden aus
patentrechtlichen Gründen nicht mitgeteilt.
Angesichts der geringen Anzahl an Merinoschafen (n = 2) wird bezüglich der
Häufigkeitsverteilung der Allele und Genotypen in dieser Rasse auf die umfangreichen
Studien der neuseeländischen Kollegen verwiesen (HICKFORD et al. 2004; GREER
2005).
DISKUSSION
87
Die Genotypisierung darf nur als eine Tendenz der Tiere zur Vererbung der
Empfänglichkeit oder Toleranz gegenüber einer Moderhinke interpretiert werden.
Weitere epidemiologische Faktoren haben bei der Entstehung des Krankheitsbildes
entscheidenden Einfluss und können auch bei den Nachkommen genetisch toleranter
Tiere zu klinischen Symptomen führen (GRAHAM u. EGERTON 1968; WASSINK et
al. 2003; HALL et al. 2011; KUHLEMANN 2011).
5.1.4 Wirkstoffe
Im Vergleich zu den Empfehlungen von KALER und GREEN (2008b) wurden in dieser
Studie subakut bis chronisch erkrankte Schafe als Probanden eingesetzt. Dement-
sprechend fiel die Wahl auf Wirkstoffe, die sich durch eine lange Wirkungsdauer
auszeichnen, oder die Therapie fand in regelmäßigen Abständen zu vorab
festgelegten Zeitpunkten statt. Bei keinem der Tiere erfolgte im Vorfeld ein blutiges
Ausschneiden der Klauen.
Insgesamt wurden sechs verschiedene Antibiotika vergleichend zu einer
standardisierten Behandlungsmethode, dem Zinksulfatklauenbad, getestet. JELINEK
et al. (2001) beschreiben in ihrer Studie den Erfolg eines an fünf Tagen aufeinander-
folgenden Badens infizierter Schafe in einer 15 bis 18 %igen Zinksulfatlösung.
Demgegenüber wurde in der vorliegenden Arbeit die Konzentration des Klauenbads
entsprechend den Empfehlungen des Herstellers auf eine 10 %ige Lösung von
Golden Hoof plus® eingestellt, was einer etwa 8 %igen Zinksulfat-Lösung entspricht.
Es wurde ein Behandlungszeitraum von neun Tagen gewählt. Die Schafe standen
jeweils zehn Minuten im Bad und im Anschluss für weitere 30 Minuten auf einem
befestigten, trocknen Untergrund. Dieser Behandlungsansatz entspricht den
Empfehlungen aus der Studie von JELINEK et al. (2001).
Neben der dreimaligen Oxytetrazyklinbehandlung, die sich bereits in den
Untersuchungen von ŠTERK (1960) als effektive Behandlungsmaßnahme heraus-
gestellt hatte, wurden die Makrolide Tilmicosin, Tildipirosin, Gamithromycin und
Tulathromycin sowie ein Kombinationspräparat bestehend aus Lincomycin und
Spectinomycin einmalig an der seitlichen Brustwand hinter dem Schulterblatt subkutan
injiziert. Die Wahl der Antibiotika erfolgte in Anlehnung an vorangegangene
DISKUSSION
88
wissenschaftliche Studien oder entsprach aktuellen Empfehlungen von Fachtierärzten
(VENNING et al. 1990; GROGONO-THOMAS et al. 1994; SAWYER 2010; JUDSON
2010; GREEN et al. 2011; STAMPHOJ 2012). Unter Berücksichtigung der ambi-
valenten Resultate aus in vitro Studien mit D. nodosus wurde im Vorfeld auf einen
Resistenztest verzichtet (GRADIN u. SCHMITZ 1983; PÍRIZ DURÁN et al. 1990,
1991; PITMAN et al. 1994).
5.1.5 Spezielle klinische Untersuchung
Für die vergleichende Beurteilung des Therapieverlaufs wurden zwei verschiedene
wissenschaftlich anerkannte Scoring Modelle angewandt. Hierzu zählten das
Klauenscoring nach EGERTON und ROBERTS (1971), modifiziert als TWDS von
WHITTINGTON und NICHOLLS (1995) und das Locomotion Scoring System von
KALER et al. (2009). Beide Verfahren wurden vor der Behandlung und am 5., 8., 10.,
15. und 22. Tag nach Versuchsbeginn durchgeführt.
In zahlreichen Ländern werden die Klauen nur adspektorisch untersucht (FODDAI et
al. 2012). Die Aussagekraft dieser Methode ist allerdings stark abhängig von der
Erfahrung des Untersuchers. In dieser Studie konnte anhand des bakteriologischen
Nachweises und der nested PCR bestätigt werden, dass bei der virulenten
Moderhinke eine subjektive Beurteilung der lokalen Läsionen ausreichend sensitiv ist,
um die Diagnose Moderhinke im Bestand zu erheben. Eine Mindestanzahl von 30
begutachteten Schafen erfüllt die Voraussetzung zum Ausschluss von
Differenzialdiagnosen und liefert einen Gesamteindruck über die vermutliche
Pathogenität der D. nodosus Isolate (HOSIE 2004). Die schnelle Reproduzierbarkeit
und die klar definierten Gradierungen zeichnen das Klauenscoring von EGERTON
und ROBERTS (1971) im Vergleich zu anderen Klauenscoring Modellen aus
(WHITTINGTON u. NICHOLLS 1995).
Nur ein kontinuierliches, ausschließlich von einer Person, durchgeführtes Scoring ist
ausreichend reproduzierbar um aussagekräftige Ergebnisse über die Effektivität einer
Behandlung zu liefern. Dabei ist es wichtig, dass der Untersucher möglichst unbe-
fangen die Scores erhebt. Die Beurteilung von klinischen Befunden anhand eines
DISKUSSION
89
subjektiven Bewertungsmodells ist zudem abhängig von der Erfahrung des
Untersuchers (WHITTINGTON u. NICHOLLS 1995; KALER et al. 2009).
Dass nicht nur die Beurteilung der lokalen Läsionen, sondern auch die Detektion einer
Lahmheit bei der Moderhinketherapie von entscheidender Bedeutung ist, belegte die
Arbeitsgruppe von KALER und GREEN (2008b, 2009). Demzufolge ist die Moder-
hinke-Prävalenz negativ korreliert mit der Fähigkeit des Schäfers eine Lahmheit zu
erkennen. Die Forscher gehen davon aus, dass die Prävalenz auf 15 % ansteigt,
wenn der Tierhalter trotz erkennbarer Veränderungen im Gangbild keine Behandlung
vornimmt. Im Verlauf der vorliegenden Untersuchungen zeigte sich, dass das
Locomotion Scoring viel Erfahrung in der Beurteilung der Bewegung voraussetzt, da
Schafe im Gegensatz zu beispielsweise Pferden nicht vorgeführt werden können.
Schafe bewegen sich bevorzugt in der Gruppe, einzelne Tiere sind nur bedingt zu
einer kontinuierlichen, zielgerichteten Bewegung zu motivieren. Die zahlreichen
Gradierungen innerhalb des Locomotion Scorings erscheinen für eine klinische Studie
von Bedeutung, sind jedoch für die Praxis uninteressant, weil sie mit einem hohen
Arbeitsaufwand einhergehen. Die bereits von KALER et al. (2009) erläuterte
Schwierigkeit der Differenzierung zwischen Score 1 und Score 2 war insbesondere bei
den Heidschnucken aus Versuchsdurchgang 1 nachzuvollziehen, die aufgrund ihres
ängstlichen Charakters das Symptom Kopfnicken nicht zeigten.
Eine Reduzierung des Locomotion Scorings auf 5 statt 7 Einstufungen könnte
zusätzlich die Bereitschaft der Tierhalter zur täglichen Anwendung des
Bewertungsmodells erhöhen. Somit würde auch eine Beurteilung – in Score 0: keine
Anzeichen einer Lahmheit, Score 1: Kopfnicken, verkürzte Schrittlänge, keine gerade
Rückenlinie, Score 2: keine Belastung der Gliedmaße im Stand, Score 3: keine
Belastung der Gliedmaße in der Bewegung und in Score 4: mehr als eine Gliedmaße
betroffen - dem Anspruch von KALER und GREEN (2009) gerecht werden, innerhalb
der akuten Phase der Entzündung alle lahmen von den klauengesunden Schafen zu
unterscheiden.
Das Klauen- sowie Locomotion Scoring erfolgte in zuvor festgelegten Zeitabständen.
Die Intervalle waren einerseits auf den zu erwartenden Zeitpunkt des Wirkungseintritts
und andererseits auf die im Vorfeld einkalkulierte Reinfektion nach Absinken eines
DISKUSSION
90
ausreichend hohen therapeutischen Wirkstoffsiegels abgestimmt (BEVERIDGE 1941;
MYERS et al. 2007; AMTSBERG u. VERSPOHL 2011). Letzteres trat in allen vier
Versuchsdurchgängen nicht ein. Folglich wurde angenommen, dass zwischen den
Wirkstoffen einzig ein möglicherweise statistisch nachweisbarer zeitlicher Unterschied
im Wirkungseintritt bestehen könnte.
Die von KALER et al. (2010a) aufgestellte These, dass spätestens am fünften Tag der
Erfolg einer Behandlung überprüft werden muss, konnte anhand der Ergebnisse der
vorliegenden Studie bestätigt werden. Von den 122 Schafen wiesen 84 % innerhalb
von fünf Tagen eine erkennbare Verbesserung der lokalen Entzündungsreaktionen
auf. Dieser Wert liegt über der von KALER et al. (2010a) ermittelten Heilungsrate von
75 % im genannten Zeitraum. Weiterhin wiesen sie in ihren Untersuchungen einen
statistisch gesicherten Zusammenhang zwischen dem Locomotion- und
Klauenscoring nach. In der vorliegenden Studie verbesserte sich das Bewegungsbild
am fünften Tag der Untersuchungen bei 71 % der Probanden. Somit stellt das
Locomotion Scoring ein adäquates Hilfsmittel für die Beurteilung des Therapieverlaufs
dar und ist im Gegensatz zum Klauenscoring für den Schäfer mit weniger
Arbeitsaufwand verbunden.
VENNING et al. (1990) zeigten in ihrer Studie auf, dass für die weitere Tierbe-
obachtung mindestens ein Zeitraum von 21 Tagen nach Behandlungsbeginn zu
wählen ist. Ansonsten besteht die Gefahr, dass nur vermeintlich behandelte oder
rezidivierende Tiere unbemerkt in der Herde verbleiben.
Studien, in denen eine langfristig erfolgreiche Bestandssanierung beschrieben wird,
erstrecken sich über einen Beobachtungszeitraum von ein bis zwei Jahren mit
regelmäßig durchgeführten Klauen- sowie Lahmheitsuntersuchungen (JELINEK et
al. 2001; ABBOTT u. EGERTON 2003; JELINEK u. DEPIAZZI 2003; JUDSON 2010;
SAWYER 2010). Somit können die Ergebnisse dieser Untersuchung lediglich
Therapieansätze für eine langfristig erfolgreiche Sanierung Moderhinke-positiver
Bestände liefern; langfristiger angelegte Studien sollten folgen, um den Langzeiterfolg
zu überprüfen.
DISKUSSION
91
5.2 Beurteilung der Ergebnisse
5.2.1 Vergleichbarkeit von kultureller Untersuchung und nested PCR
Das vielseitige Spektrum an Nachweisverfahren wurde von WANI und SAMANTA
(2006) in einer retroperspektiven Studie zusammengefasst. Darin zeichnet sich der
Trend zur Weiterentwicklung hoch sensitiver PCR Techniken ab, die in Zukunft als
anerkannte Detektionsmethoden in nationalen Sanierungsprogrammen zur Verfügung
stehen könnten. Statt auf Basis einer begrenzt sensitiven sowie zeitaufwändigen
kulturellen Untersuchung wäre die Identifikation der Serogruppe und deren
Pathogenität somit innerhalb von 24 Stunden durchführbar.
Bei 34 der 122 Proben (27,87 %) wurden in der kulturell-mikrobiologischen
Untersuchung Isolate des Erregers D. nodosus gewonnen. Die geringe Sensitivität der
bakteriologischen Untersuchung, die in zahlreichen Studien aufgeführt wird (JELINEK
et al. 2001; MOORE et al. 2005; BELLOY et al. 2007; DHUNGYEL et al. 2008; AZIZI
et al. 2011; KUHLEMANN 2011; FROSTH et al. 2012), konnte in der vorliegenden
Arbeit bestätigt werden. Abgeleitet aus den Ergebnissen der vorherigen
Untersuchungen liegt die Nachweisrate in Abhängigkeit von der Probennahme und
dem verwendeten Medium bei maximal 55,8 % (MOORE et al. 2005). Dass
insbesondere die Entnahmetechnik den Erfolg einer kulturellen Untersuchung von
D. nodosus beeinflusst, wurde ab dem dritten Versuchsdurchgang beobachtet.
Während in den ersten beiden Versuchsdurchgängen lediglich bei sieben Tieren
(n = 47) der Nachweis gelang, trat mit der Gewinnung des Probenmaterials aus dem
interdigitalen Spalt eine Steigerung der Erfolgsrate ein. Daraufhin wurde im dritten
Durchgang bei jedem vierten Schaf (25 %) und im letzten Versuchsdurchgang bei fast
der Hälfte der entnommenen Proben (48,6 %) D. nodosus isoliert. Jedoch setzt diese
Form der Probengewinnung voraus, dass im interdigitalen Spalt nur wenige Partikel
aus der Umwelt bzw. sonstige Bakterien haften, die die Sensitivität der
Nachweisemethode beeinflussen könnten. Als weiterer Ursachenkomplex für die
niedrige Erfolgsrate ist laut DHUNGYEL et al. (2008) der Transport des Bakteriums
unter aeroben Bedingungen und die Unerfahrenheit des Laborpersonals in der
Anzucht des anspruchsvollen Erregers anzusehen, insofern könnte die Zunahme der
DISKUSSION
92
Nachweisraten im Verlauf der Versuche auch den Erfahrungsgewinn bei der
kulturellen Isolierung von D. nodosus widerspiegeln.
Im Vergleich zur kulturell-mikrobiologischen Untersuchung stellte sich die nested
PCR, wie bei BELLOY et al. (2007), als hoch sensitive Detektionsmethode dar. Die
nested PCR lieferte im Vergleich zur kulturellen Untersuchung eine höhere
Nachweisrate des Erregers. Die von BELLOY et al. (2007) beschriebene hohe
Sensitivität von 100 % wurde in der vorliegenden Studie nur um 2,4 % verfehlt.
Obwohl die Gefahr einer Kontamination der Proben durch die Verwendung von
Holzstäbchen minimiert wurde, bestand das Risiko, dass bei der Entnahme nicht
ausreichend Material für die Untersuchung gewonnen werden konnte.
Mögliche Ursachen für die Ermittlung von drei falsch negativen Ergebnissen wären
unter Umständen bei der DNA Isolierung von D. nodosus zu suchen, die nur nach
einer sorgfältigen Durchführung verwertbares Probenmaterial für die anschließende
Vervielfältigung der Zielgensequenzen bereitstellt (BELLOY et al. 2007).
Im Weiteren konnte in einer zusätzlichen Probennahme belegt werden, dass die hohe
Sensitivität nicht mit einer niedrigen Spezifität der nested PCR einhergeht. Während
BELLOY et al. (2007) aufgrund eines falsch positiven Ergebnisses die Spezifität auf
94,4 % (n = 18) festlegten, wurden in der vorliegenden Studie in keiner der Proben
von 25 klauengesunden Schafen Genomsegmente von D. nodosus nachgewiesen.
Zusammengefasst steht aktuell in Deutschland mit der nested PCR von BELLOY et
al. (2007) eine zuverlässige Methode zum Nachweis von D. nodosus zur Verfügung.
Alternativ besteht die –weniger sensitive- Möglichkeit der kulturell-mikrobiologischen
Untersuchung des Erregers auf Blut Eugon Agar. Hierfür wird empfohlen von
mindestens vier klinisch erkrankten Tieren Probenmaterial aus dem interdigitalen
Spalt zu entnehmen, sofort vor Ort auf Blut Eugon Agar auszustreichen und
unverzüglich anaerob zu bebrüten oder die Gliedmaßen frisch verendeter Tiere
Vakuum-verpackt an das Institut für Mikrobiologie der Stiftung Tierärztliche
Hochschule Hannover zu senden.
Der Stellenwert, den eine hoch sensitive Nachweismethode in einem nationalen
Sanierungsprogramm einnimmt, kommt in den zukünftigen skandinavischen Moder-
hinkesanierungsmodellen zum Ausdruck (VATN et al. 2012; STAMPHØJ 2012). Im
DISKUSSION
93
Gegensatz zum australischen Modell (New South Wales) findet in Dänemark keine
Unterscheidung bezüglich der Pathogenität der Stämme statt. Die dänische
praktizierende Tierärztin Inga Stamphøj berichtete auf dem Kongress der
DVG-Fachgruppe für Krankheiten der kleinen Wiederkäuer im Mai 2012, dass die
Sanierung großer Herden durch einmalige Gabe von Gamithromycin möglich wäre.
Den Erfolg der Behandlung überprüfte sie mit Hilfe von Klauentupfern, die mittels PCR
auf Genomsequenzen von D. nodosus untersucht wurden. Nach Ausbruch der
Moderhinke beprobte sie zunächst acht ausgewählte Tiere einer Herde. Bestätigte
sich im Anschluss die Verdachtsdiagnose in der real-time PCR musste die gesamte
Herde einmalig mit Gamithromycin in der Dosierung von 6 mg/kg KGW behandelt
werden. Vier Wochen nach der Behandlung sowie sechs Monate später wurden
Klauentupfer zur Kontrolle des Behandlungserfolgs an ein Untersuchungslabor
geschickt. Die betroffenen Betriebe erhielten den Status „Moderhinkefrei“ jedoch erst
ab dem Zeitpunkt, an dem zwei aufeinanderfolgende negative Befunde von jeweils
acht beprobten Tieren vorlagen. In jährlichen Abständen wurde mittels real-time PCR
der Status der Herde kontinuierlich überprüft, welches insbesondere der Detektion von
klinisch unauffälligen Trägertieren diente.
In der schwedischen Studie von FROSTH et al. (2012) wurde die real-time PCR zum
einen der konventionellen PCR nach LA FONTAINE et al. (1993) und zum anderen
der kulturell-bakteriologischen Untersuchung (STEWART u. CLAXTON 1993)
gegenübergestellt. FROSTH et al. (2012) setzten als untere Nachweisgrenze für die
real-time PCR 3,9 fg genetischen Materials von D. nodosus fest, die in ihrer
Untersuchung sowohl zur Ermittlung einer 100 %igen Sensitivität als auch Spezifität
ausreichend waren. Die Überlegenheit dieser Detektionsmethode zeigte sich im
direkten Vergleich der Untersuchungsergebnisse. Insgesamt war die real-time PCR
um 54,8 % sensitiver als die kulturell-bakteriologische Untersuchung und wies im
Vergleich zur PCR nach LA FONTAINE et al. (1993) eine um 7,6 % höhere
Nachweisrate auf. In diesem Zusammenhang stellt sich jedoch die Frage, ob eine
Kontrolluntersuchung vier Wochen nach der Behandlung, aufgrund der hohen
Sensitivität, nicht zur Ermittlung falsch positiver Ergebnisse beiträgt. Diese Hypothese
wird allerdings bereits in den ersten erfolgreichen Bestandssanierungen von
DISKUSSION
94
STAMPHØJ (2012) widerlegt. Demnach wurden bei 28 von 29 zuvor Moderhinke
positiven Herden vier Wochen später in der real-time PCR keine Genomsegmente des
Bakteriums mehr nachgewiesen.
5.2.2 Genotypisierung
Die genetische Selektion auf Moderhinketoleranz ist in Neuseeland eine anerkannte
Kontrollmaßnahme. Auf Basis des Footrot Gene Marker Tests (FGMT) wählt ca. ein
Viertel (24,7 %) der Merinozüchter ihre Schafböcke aus, um bei den Nachkommen
eine kontinuierliche Senkung der Moderhinke-Prävalenz zu erzielen (ABBOTT et
al. 2007). Jedoch wird im Vergleich zu Neuseeland das Angebot der Beurteilung des
DQA2 Genotyps nur von wenigen europäischen Schafzüchtern angenommen
(GREEN et al. 2011), was vorwiegend darin begründet ist, dass der FGMT nur in den
für ihn entwickelten Schafrassen auch zu einem aussagekräftigen Ergebnis führen
kann (BENNETT u. HICKFORD 2011).
In diesem Kontext wurden 123 Blutproben von Schafen einheimischer Rassen bzw.
Kreuzungen zur Analyse und Bewertung der Allelkombination nach Neuseeland
verschickt. Ein Vergleich der Ergebnisse zu vorangegangenen Untersuchungen von
LOTTNER (2006) und KUHLEMANN (2011) war nicht durchführbar. In diesen beiden
Studien wurden die Häufigkeitsverteilungen der Allelkombinationen in deutschen
Schafrassen bestimmt, während in der vorliegenden Untersuchung eine numerische
Bewertung (Footrot Rating) der ermittelten DQA2 Allele vorlag.
Von insgesamt 12 der 22 (54,5 %) untersuchten Heidschnucken konnten die
ermittelten Allelkombinationen des DQA2 Gens im Hinblick auf die genetische
Moderhinketoleranz nicht beurteilt werden. Lediglich ein Tier müsste gemäß den
Empfehlungen von HICKFORD (o. Jg.) sicher den Betrieb verlassen, obwohl die
Unterminierungen am Sohlen- und Ballenhorn nach der Klauenbadbehandlung
vollständig abheilten. Dieses singuläre Beispiel aus dem ersten Tierversuch
verdeutlicht, dass keine allgemeingültige Aussage anhand des Genotypisierungs-
ergebnisses über den Heilungsverlauf getroffen werden kann. Vielmehr ist nur die
prozentuale Wahrscheinlichkeit der Nachkommen an der progressiven Form der
Moderhinke zu erkranken anhand des „Footrot Ratings“ schätzbar (siehe Tab. 3).
DISKUSSION
95
Allerdings könnte dieses Ergebnis darauf hindeuten, dass bei nicht ausreichender
Wirkung des Antibiotikums auf D. nodosus die Gefahr eines Rezidivs aufgrund
mangelnder Immunantwort bei diesem Tier wahrscheinlich wäre. Demgegenüber steht
eine große Spannweite an ermittelten Genotypen bei den Kreuzungstieren aus dem
zweiten und dritten Versuchsdurchgang. Im Vergleich zu den Heidschnucken des
ersten Versuchsdurchgangs konnte nur bei einem Tier der Genotyp nicht bewertet
werden. Im weiteren zeigte sich, dass eine wesentlich größere Anzahl an Tieren
(n = 23) schlechte bis sehr schlechte „Footrot Ratings“ aufwies. Bei vier Schafen blieb
die Entscheidung offen, ob der Züchter diese Tiere zur weiteren Remontierung
einsetzen sollte. Zusammengefasst würde die Umsetzung der Empfehlungen von
HICKFORD (o. Jg.) in diesem Betrieb eine drastische Reduzierung der
Bestandsgröße zur Folge haben, denn lediglich 24 der 64 Schafe (37,5 %) gäben mit
hoher Wahrscheinlichkeit die genetisch determinierte Anlage einer Moderhinke-
toleranz an ihre Nachkommen weiter. Wie bereits bei den Heidschnucken des ersten
Versuchsdurchgangs und den Kreuzungstieren des zweiten und dritten
Versuchsdurchgangs beschrieben, zeigte sich auch im letzten Versuchsdurchgang bei
den Schwarzköpfigen Fleischschafen, dass in deutschen Schafpopulationen bisher
nicht nachgewiesene DQA2 Genotypen auftreten. Hierbei könnte es sich um
Kombinationen zwischen DQA2 ähnlichen Sequenzen und echten DQA2 Allelen
handeln. Bereits in der Studie von LOTTNER (2006) wurde auf das Vorhandensein
von unbekannten DQA2 ähnlichen Sequenzen in deutschen Schafherden
hingewiesen (B3/E), was im Anschluss KUHLEMANN (2011) in ihren epidemiolo-
gischen Untersuchungen bestätigten konnte. Basierend auf den Ergebnissen dieser
Studie stellt die Genotypisierung der Rasse Schwarzköpfiges Fleischschaf eine
aufschlussreiche Managementmaßnahme zum Aufbau einer Moderhinketoleranten
Herde dar. Einerseits, wie zuvor aufgeführt, wurden die Genotypen von 97,1 % der
Schafe vollständig ermittelt und zum anderen könnte der Tierhalter mit der Mehrheit
seiner Schafe (74,3 %, n = 26) weiterzüchten. Sowohl die Heidschnucken als auch die
Kreuzungstiere konnten nicht gleichzeitig diese beiden Bedingungen erfüllen. Die
Erkenntnis, dass im vorliegenden Fall der Schäfer nur etwa ein Viertel seiner Tiere
DISKUSSION
96
(25,7 %) merzen müsste, ist eine wichtige Voraussetzung um ihn vom Einsatz des
genetischen Markers zu überzeugen.
Als Zweites wurde in der vorliegenden Arbeit überprüft, ob ein Zusammenhang
zwischen den erhobenen Klauen- bzw. Locomotion Scores (TWDS) und den „Footrot
Ratings“ besteht. In der Korrelationsanalyse konnte zwischen den Variablen kein
Zusammenhang festgestellt werden. Diese Ergebnisse decken sich mit den
Ergebnissen einer britischen Studie (CONINGTON et al. 2008). CONINGTON et
al. (2008) ermittelten einerseits bei den Rassen Texel und Schwarzköpfiges
Fleischschaf eine große Variabilität am DQA2 Genort und wiesen andererseits nach,
dass der erhobene Klauenbefund nicht vom Genotyp abhängig war.
Die Empfehlung zur genetischen Selektion einer Herde sollte nur im Rahmen von
Sanierungsprogrammen und in Kombination mit anderen Kontrollmaßnahmen, wie
z. B. Einhaltung einer Quarantäne von zwei Wochen bei Zukäufen, regelmäßige
Vakzinierung im Abstand von vier bis fünf Monaten, tägliche Erhebung der
Lahmheitsprävalenz einer Herde, erfolgen (CONINGTON et al. 2008; ENNEN et
al. 2009; WINTER 2009). Im Weiteren muss der Tierhalter darauf hingewiesen
werden, dass sich ein sichtbarer Erfolg erst im Verlauf von mehreren Generationen
einstellen wird.
5.2.3 Vergleich der Antibiotika untereinander und m it der topischen Therapie
Die Hypothese von EGERTON et al. (1968), dass die Moderhinke des Schafes mittels
parenteraler Applikation eines Antibiotikums zu behandeln ist, konnte in der
vorliegenden Studie bestätigt werden. Hierfür wurde in den ersten drei
Versuchsdurchgängen zunächst die Wirkung einer Oxytetrazyklin- bzw. Tilmicosin-
behandlung vergleichend zum Zinksulfatklauenbad getestet.
Der Therapieerfolg zeigte sich anhand einer Reduktion der erhobenen Klauen- und
Locomotion Scores im Vergleich zum Ausgangswert. Dieser Effekt stellte sich bereits
am 5. Tag nach der Behandlung in jeder Behandlungsgruppe als signifikant dar und
konnte im Verlauf des Beobachtungszeitraums bei jedem Probanden festgestellt
werden. Folglich stützen diese Ergebnisse die bereits von KALER et al. (2010a)
DISKUSSION
97
aufgestellte These, dass spätestens am 5. Tag die Effektivität einer Behandlung zu
beurteilen ist und dieser Effekt bis zum 28. Tag anhält.
Auch jene zwei Tiere, die zunächst keine Besserung des klinischen Bildes zeigten,
wiesen nach einer erneuten, sicheren s. c. Injektion der jeweiligen Wirkstoffe einen
Behandlungserfolg auf. Es ist deshalb zu vermuten, dass die erste Injektion fehlerhaft
war und die Kanüle bei der s. c. Injektion durch die Hautfalte durchgestochen wurde.
Die Hypothese einer unzureichenden Wirkstoffkonzentration von Tilmicosin konnte
durch die zweite, sichere Applikation und den anschließenden Heilungsverlauf
widerlegt werden. Es stellten sich im Gruppenvergleich keine signifikanten Unter-
schiede der Klauenscores zwischen den mit 5 mg/kg KGW und 10 mg/kg KGW
behandelten Tieren dar.
Zwischen den Antibiotika und im Vergleich zum Zinksulfatklauenbad wurden zu den
einzelnen Beurteilungszeitpunkten keine signifikanten Unterschiede der Klauenscores
ermittelt.
Am 22. Tag konnte bei 95,4 % der Probanden, die mit Tilmicosin behandelt wurden,
ein TWDS von ≤ 1 erhoben werden. Besonders von SAWYER (2010) wird die
Effektivität einer Tilmicosininjektion in Rahmen von erfolgreich durchgeführten
Bestandssanierungen hervorgehoben. In seinen Untersuchungen konnte er belegen,
dass der metaphylaktische Einsatz dieses Antibiotikums zu langfristig niedrigen
Moderhinke-Prävalenzraten in einer Herde führt.
Die Ergebnisse der Klauenbadgruppen (87 % der Schafe mit einem TWDS von ≤ 1 an
Tag 22) lagen im Bereich der zuvor in klinischen Studien ermittelten Heilungsraten
(SKERMAN et al. 1983; MALECKI u. COFFEY 1987; PARAJULI u. GODDARD 1989;
JORDAN et al. 1996). Die höchste Reduktion des Gesamtklauenscores nach einer
Zinksulfatklauenbehandlung ermittelten JELINEK et al. (2001). In ihrer Arbeit wird
beschrieben, dass eine Herde infolge einer Zinksulfatbehandlung bis 52 Wochen nach
der initialen Therapie keine klinischen Symptome einer Moderhinke mehr zeigte und
somit das Ziel einer langfristigen Sanierung über die Anwendung topischer
Behandlungsverfahren möglich ist.
Mit Bedacht sind die Ergebnisse der Oxytetrazyklin Gruppen der ersten drei
Versuchsdurchgänge zu betrachten. Im Gegensatz zu den von GROGONO-THOMAS
DISKUSSION
98
et al. (1994) oder ŠTERK (1960) beschriebenen hohen Heilungsraten von 89 bis
100 % wiesen lediglich 17 der 24 Tiere (70,8 %) am Ende der Teilversuche einen
Gesamt-TWDS von ≤ 1 auf. Trotzdem spiegeln die restlichen Tiere den Erfolg der
Therapie wider, da sechs dieser Schafe mit einem TWDS von 2 und ein Tier mit
einem TWDS von 4 am Ende der Teilversuche ausschließlich Läsionen des Zwischen-
klauenspalts zeigten und kein signifikanter Unterschied im Vergleich zu den anderen
beiden Behandlungsverfahren festzustellen war. Möglicherweise könnte eine
kombinierte Anwendung des Oxytetrazyklins als Klauenspray und Injektion, vergleich-
end zur Studie von KALER et al. (2010a), die Abheilung der interdigitalen Entzündung
zusätzlich fördern. Dies wäre im Rahmen weiterer Untersuchungen abzuklären.
Der größte Therapieerfolg, betrachtet man die Tilmicosin-, Oxytetrazyklin- und
Klauenbadgruppen der ersten drei Versuchsdurchgänge unter Berücksichtigung der
Ganganalyse, war ebenfalls bei den Tilmicosin behandelten Tieren zu verzeichnen.
Von ihnen wiesen am Ende des Beobachtungszeitraums 86,4 % einen Locomotion
Score ≤ 1 auf, was sich allerdings nicht signifikant von den ermittelten Ergebnissen
der Oxytetrazyklin- (83,4 %) und Klauenbadgruppe (79,1 %) unterschied. Mit hoher
Wahrscheinlichkeit besteht ein Zusammenhang zwischen dem Ausbleiben einer
vollständigen Lahmheitsfreiheit bei einigen Probanden und dem Schweregrad der
Moderhinke. Auch KALER et al. (2012) teilen diese Auffassung. In ihren Untersuch-
ungen war eine Abheilung der Unterminierungen am Klauenhorn im Vergleich zu
ausschließlich interdigitalen Entzündungssymptomen mit länger anhaltenden Lahm-
heiten verbunden. Demnach zeigt sich frühestens 28 Tage nach der Antibiotikagabe
sowohl am Klauen- als auch Locomotion Score der vollständige Behandlungserfolg.
Als weitere Ursache für das Ausbleiben einer vollständigen Lahmheitsfreiheit könnte
in Anbetracht des chronischen Krankheitsverlaufs die Ausbildung einer stereotypen
Bewegungsstörung vorliegen, bspw. in Form des Kopfnickens oder einer verkürzten
Schrittlänge. Schließlich besteht die Möglichkeit, dass bei einzelnen Schafen der
Klauenbadgruppen die Separationen unzureichend freigelegt wurden und folglich das
Zinksulfat nicht in die tieferen Schichten des Klauenhorns eindringen konnte. Somit
sollte bei der virulenten Form der Moderhinke bevorzugt eine systemische
Antibiotikatherapie angewandt werden. Diese Behandlung entspricht den aktuellen
DISKUSSION
99
Empfehlungen, verhindert die Aufrechterhaltung der Infektionskette und erhöht schnell
das Wohlbefinden der Tiere (WASSINK et al. 2010; KALER et al. 2010a, 2012).
Im weiteren Verlauf der Studie wurden ein Lincomycin/Spectinomycin-
Kombinationspräparat und die Makrolide Gamithromycin, Tulathromycin und
Tildipirosin zusätzlich vergleichend zum standardisierten Zinksulfatklauenbad getestet.
Auch hier zeigte sich zwischen den Antibiotika und dem Klauenbad kein signifikanter
Unterschied in den Klauenscores. Mit einem Behandlungserfolg (TWDS ≤ 1) von
62,5 % am 22. Tag des Tierversuchs stellte sich die Lincomycin/Spectinomycingruppe
als vergleichsweise genauso effektiv wie die Klauenbadgruppe des dritten Durch-
gangs (62,5 %) heraus. In beiden Gruppen hatten jeweils zwei Tiere einen TWDS
von 2 und ein Tier einen TWDS von 3 am Ende des Beobachtungszeitraums.
VENNING et al.(1990) ermittelten nach einer einmaligen intramuskulären Injektion von
Lincomycin/Spectinomycin, in der Dosierung wie sie auch in der vorliegenden
Untersuchung gewählt wurde, eine Heilungsrate von 89 %. Zusätzlich stellten sie in
ihren Studien fest, dass kein signifikanter Unterschied zwischen der dreimaligen
Applikation des Wirkstoffs im Vergleich zur einmaligen Behandlung besteht.
Eine gezielte Untersuchung der Ergebnisse unter Berücksichtigung des Schweregrads
der Erkrankung führten JORDAN et al. (1996) durch. Demzufolge sollte bei
ausschließlich auf den interdigitalen Spalt begrenzten Entzündungssymptomen eine
Lincomycin/Spectinomycin Kombinationstherapie einer Oxytetrazyklinbehandlung
vorgezogen werden, während Unterminierungen des Ballen- und Sohlenhorns am
effektivsten mit einem Langzeitoxytetrazyklin zu behandeln sind. Abweichend von
VENNING et al. (1990) ermittelten JORDAN et al. (1996) nach einer einmaligen
Applikation von Lincomycin/Spectinomycin eine Verbesserung der Klauenscores bei
63,9 % respektive 87, 5% der infizierten Schafe. Zusätzlich stellten sie fest, dass bei
zwei Schafherden, die unter gleichen Umweltbedingungen aufgestallt waren und mit
demselben Antibiotikum behandelt wurden, große Abweichungen im Behandlungs-
erfolg auftraten. Ihrer Ansicht nach beeinflusst die Anzahl an infizierten Klauen pro
Schaf sowie der Schweregrad der klinischen Veränderungen neben der Rasse
(EMERY et al. 1994) und dem Genotyp des Tieres (RAADSMA et al. 1994) den Erfolg
einer Behandlung. Im Vergleich hierzu konnten in der vorliegenden Arbeit keine
DISKUSSION
100
signifikanten Unterschiede der Klauen- sowie Locomotion Scores zwischen einer
Langzeitoxytetrazyklin- und Lincomycin/Spectinomycinbehandlung festgestellt wer-
den.
Die untersuchten Makrolide haben sich in der vorliegenden Arbeit als hoch effizient
erwiesen. Gegenwärtig werden in der Literatur einzig Therapieversuche im Rahmen
tierärztlicher Bestandsuntersuchungen mit Gamithromycin (SARGISON u. SCOTT
2011; STAMPHØJ 2012) bzw. Tilmicosin (SAWYER 2010) beschrieben.
Im Vergleich zur unbehandelten Gruppe überzeugten sowohl die parenteral
applizierten Antibiotika als auch die topische Behandlung in ihrer Wirksamkeit. Ein
signifikanter Unterschied zwischen den Klauenscores der Kontrollgruppe und den
Behandlungsgruppen stellte sich ab dem 10. Tag nach Versuchsbeginn dar.
Mit Hilfe der Ergebnisse der Locomotion Scores konnte auch der Erfolg der
Behandlungen dokumentiert werden. Nur bei fünf Tieren zeigte sich am Ende des
Beobachtungszeitraums im Vergleich zum Beurteilungszeitpunkt Tag 1 keine
Verbesserung der Locomotion Scores (siehe Tab. 26). Darunter befanden sich zwei
Tiere, die aufgrund von Fehlinjektionen offenbar nicht behandelt worden waren. Bei
der nachfolgend durchgeführten Behandlung trat die Besserung in gleicher Weise wie
bei den anderen Tieren ein. Bei zwei Tieren aus den Klauenbadgruppen besteht der
Verdacht, dass das unterminierte Klauenhorn nicht ausreichend freigelegt wurde und
folglich das Zinksulfat nicht in die Lederhaut penetrierte. Das fünfte Tier wies zu
Beginn der Untersuchung eine hochgradige Lahmheit und Läsionen an allen vier
Gliedmaßen auf. Zusätzlich besaß es eine Fistel am Brustbein. Trotz eines
TWDS-Werts von 1 musste das Schaf am Ende des Versuchs mit einem hohen
Locomotion Score bewertet werden. Eventuell trug die fortwährende Lahmheit zur
Ausbildung einer Gewohnheit bei, die das Schaf auch nach Abklingen der
Lahmheitsursache nicht ablegte. Alternativ kann vermutet werden, dass chronische
Moderhinke bereits zu sekundären Veränderungen in den Klauengelenken oder im
Bandapparat, bzw. in der Lederhaut geführt hatte, die auch nach Abklingen der
äußerlich feststellbaren Veränderungen zu Schmerzen und damit Lahmheiten führten.
Die Ergebnisse des FGMT dieser fünf Tiere zeigen, dass zwei Schafe, gemäß der
Beurteilung von HICKFORD (o. Jg.) gute Vererbungseigenschaften auf Moderhinke-
DISKUSSION
101
toleranz besitzen. Im Vergleich vererben zwei Tiere mit hoher Wahrscheinlichkeit eine
Empfänglichkeit gegenüber Moderhinke an die Nachkommen weiter und beim fünften
Schaf konnte am DQA2 Komplex keine eindeutige Beurteilung zur Wahrscheinlichkeit
der Vererbung einer Moderhinketoleranz bzw. -empfänglichkeit durchgeführt werden.
Zusammenfassend ist die vorliegende Arbeit ein Beleg für die ausgezeichnete
Wirkung einer systemischen Antibiotikabehandlung bei der Moderhinke des Schafes.
Insbesondere eine Therapie mit Makroliden kann im Hinblick auf den Therapieerfolg
empfohlen werden, allerdings konnten am Ende der Versuchsdurchgänge zwischen
den verschiedenen Wirkstoffen und im Vergleich zum Zinksulfatklauenbad keine
signifikanten Unterschiede der TWDS-Werte und Locomotion Scores festgestellt
werden.
Zusätzlich zeigen die Untersuchungsergebnisse auf, dass das Locomotion Scoring
nach KALER et al. (2009), neben dem Klauenscoring von EGERTON und ROBERTS
(1971) bzw. von WHITTINGTON und NICHOLLS (1995), ein zuverlässiger Indikator
für den Nachweis des Behandlungserfolgs ist.
5.2.3.1 Vergleich der Behandlungskosten verwendeter Antibiotika
Die in der vorliegenden Untersuchung angewandten Antibiotika führten innerhalb von
22 Tagen zu einer Abheilung der Klauenläsionen. Wie bereits erläutert, bestanden im
Heilungseintritt und -verlauf keine signifikanten Unterschiede zwischen den
Antibiotika. Im Umkehrschluss müssen andere Kriterien zur Auswahl des Antibioti-
kums herangezogen werden.
Die Optionen, die dem Tierarzt bzw. Tierhalter bei der Behandlung von Moderhinke
zur Verfügung stehen, unterliegen dem Arzneimittelgesetz (AMG) und beschränken
sich aktuell auf die Anwendung von Tilmodil® (WDT-Wirtschaftsgenossenschaft
Deutscher Tierärzte eG, Garbsen), Footvax® (MSD Animal Health, Intervet
Deutschland GmbH, Unterschleißheim) und tetrazyklinhaltige Klauensprays. Den
zweiten limitierenden Faktor stellt die Bereitschaft des Besitzers zu finanziellen
Aufwendungen dar. In einer kürzlich erschienenen Studie von FRIEDRICH et
al. (2012) gaben deutsche Tierhalter aus betroffenen Beständen an, jährlich pro Schaf
DISKUSSION
102
durchschnittlich 8,23 € in die Therapie der Moderhinke zu investieren. Im Bezug auf
diesen Etat erfolgte eine Berechnung der Behandlungskosten für die sechs
Antibiotika. Die Kalkulation basiert auf einem durchschnittlichen Körpergewicht von
75 kg/Tier und berücksichtigt bei der Anwendung von Tilmicosin die zusätzliche
tierärztliche Leistung für die Behandlung, die nach der Gebührenordnung für Tierärzte
(GOT) als Bestandsbesuch (15 min = 17,18€) mit einer Arbeitszeit von einer Minute
pro Tier (WASSINK et al. 2010) abgerechnet wurde. Für die Berechnung des
durchschnittlichen Bruttoverkaufspreises (inkl. 19 % Mehrwertsteuer) eines Antibioti-
kums wurde der entsprechende Listenpreis (WDT 2011) angesetzt.
Anhand der ermittelten Kosten pro Anwendung war eine Einteilung der Antibiotika in
drei Preiskategorien möglich. Die günstigste Option bei einmaliger Applikation stellt
die Kombination aus Lincomycin und Spectinomycin dar. Die finanzielle Aufwendung
für eine dreimalige Oxytetrazyklinbehandlung entspricht annähernd dem Preis, den
ein Schäfer bei der einmaligen Tilmicosinbehandlung an den Tierarzt zu entrichten
hat. Die restlichen Makrolide überzeugen durch eine lange Halbwertszeit und ein
hohes Verteilungsvolumen im Körper, sind aber im Verhältnis zu den anderen
Antibiotika mit deutlich höheren Arzneimittelkosten verbunden. Im Vergleich zur
Injektion von Tilmicosin durch den Tierarzt ist die Behandlung mit Gamithromycin um
ca. ein Fünftel, die Anwendung von Tulathromycin um ca. ein Viertel und die Therapie
mit Tildipirosin um ca. ein Drittel teurer.
Es ist jedoch fraglich, ob ein nationales Sanierungsprogramm mit Tilmicosin die
Ausgaben pro Muttertier von 8,23 € nicht übersteigen würde. Die Kosten für eine
Herdensanierung nach dem dänischen Modell setzen sich aus den Arzneimittelkosten,
den Lohnkosten für den Schäfer und den Kosten für tierärztliche Leistungen für
Bestandsbesuche sowie mehrmalige Anwendung von labordiagnostischen
Nachweismethoden zusammen (siehe 5.2). Die Sicherheit, nach einmaliger Behand-
lung den Status Freiheit zu erlangen, verspricht das dänische Konzept nicht. Vielmehr
wird großes Engagement von Seiten des Tierhalters, die Krankheit zu kontrollieren,
vorausgesetzt.
DISKUSSION
103
5.2.3.2 Ursachen für „Therapieversager“
Zwei von 122 Tieren (1,6 %) wiesen nach der chemotherapeutischen Behandlung
keine Verbesserung im klinischen Bild auf. Wie sich in Folge einer erneuten Gabe des
Wirkstoffs herausstellte, fand jeweils bei der ersten Anwendung mit an Sicherheit
grenzender Wahrscheinlichkeit eine fehlerhafte subkutane Injektion statt. Im Vergleich
birgt eine intramuskuläre Applikation, die ausschließlich in den anderen klinischen
Moderhinkestudien zum Einsatz kam (EGERTON et al. 1968; VENNING et al. 1990;
GROGONO-THOMAS et al. 1994; WEBB WARE et al. 1994; KALER et al. 2012), das
Risiko der Verletzung des Nervus fibularis und Nervus tibialis (BOSTEDT u. DEDIÉ
1996). Somit wird weiterhin die subkutane Applikation der Antibiotika empfohlen,
vorausgesetzt die Injektion erfolgt in weniger stark bewollte Areale und die Klauen
werden am 5. Tag nach der Behandlung begutachtet.
Gleichzeitig belegt die vorliegende Untersuchung, dass eine trockene Aufstallung in
Kombination mit einer Antibiotikatherapie zur Abheilung der Unterminierungen am
Klauenhorn führt. Diese Ergebnisse decken sich mit den Untersuchungen von
EGERTON et al. (1968) und WEBB WARE et al. (1994).
In der neueren Literatur wird ausdrücklich darauf hingewiesen, dass das blutige
Ausschneiden der Klauen keine adäquate Therapiemaßnahme darstellt (WASSINK et
al. 2003; GREEN et al. 2007; WINTER 2008; KALER et al. 2008b, 2010a;
LAVEN 2012). Aus den Ergebnissen des zweiten Versuchsdurchganges muss jedoch
die Erkenntnis gezogen werden, dass ein Entfernen von deformiertem Wandhorn im
Vorfeld eines Klauenbades unerlässlich ist, da ansonsten der Wirkstoff in nicht
ausreichender Konzentration in die Lederhaut eindringen kann. Diesen Standpunkt
vertreten auch SKERMAN et al. (1983) und GREEN et al. (2011). Demzufolge ist das
Klauenbad nur bei der gutartigen bzw. akuten Form der Moderhinke eine ausreichend,
wirksame Behandlungsmaßnahme, wenn auf vorheriges Ausschneiden verzichtet
werden soll.
5.2.3.3 Vor- und Nachteile der Antibiotika für die Moderhinketherapie
Die parenterale Antibiotikatherapie ist eine betriebswirtschaftlich attraktive Alternative
zu der topischen Behandlung. Im Vergleich zum Klauenbad lässt sie sich mit den
DISKUSSION
104
aktuellen Strukturen in der Schafhaltung häufig besser vereinbaren. Viele Schäfereien
in Deutschland sind Familienbetriebe, die Hilfskräfte ausschließlich saisonal beschäft-
igen; oder der Schäfer stellt, um gewinnorientiert arbeiten zu können, die einzige
Betreuungsperson dar (KUHLEMANN 2011). Die Voraussetzungen für ein ordnungs-
gemäßes Klauenbaden können so oftmals nicht erfüllt werden, da es entweder an
Zeit, Arbeitskraft, Ehrgeiz, notwendigem Equipment oder Liquidität fehlt.
Zunächst sind die finanziellen Aufwendungen für die Anschaffung der Antibiotika im
Vergleich zum Klauenbad um ein Vielfaches höher, aber der verringerte Arbeits-
aufwand führt zu beträchtlichen Einsparungen bei den Lohnkosten. Im Vorfeld einer
Moderhinkebehandlung/ -sanierung muss der Einsatz der eigenen Arbeitskraft bzw.
die Bezahlung von Arbeitnehmern bei der Kalkulation beachtet werden. Im Gegen-
satz zur anschließenden problematischen Entsorgung der Klauenbadlösungen ist die
Anwendung eines Chemotherapeutikums (vordergründig betrachtet) umweltfreundlich.
Unerlässlich für den Erfolg einer Klauenbadbehandlung bei der virulenten Moderhinke
bleibt das Freilegen der Unterminierungen, welches mit hochgradigen Schmerzen
einhergeht und die Ausbreitung des Erregers fördern kann (GANTER et al. 2001;
GREEN et al. 2011). Demgegenüber wird ein Klauenpflegeschnitt erst zehn Tage
nach der systemischen Antibiose empfohlen (KALER et al. 2010a). Innerhalb dieses
Zeitraums stirbt der Erreger sowohl infolge der Therapie als auch aufgrund der
Umweltbedingungen ab. Antibiotika mit einem hohen Verteilungsvolumen erzielen im
Vergleich zu den Klauenbadlösungen gerade in den tiefer gelegenen Schichten der
Haut eine ausreichende Wirkstoffkonzentration. Dieser Vorteil der parenteralen
Antibiotikatherapie stellt die entscheidende Voraussetzung für den Erfolg einer Moder-
hinkebehandlung dar.
Des Weiteren konnten nach der parenteralen antibiotischen Behandlung keine lokalen
Entzündungssymptome an der Injektionsstelle beobachtet werden. Im Vergleich
hierzu beschreiben zahlreiche Wissenschaftler das Auftreten von Umfangsver-
mehrungen nach einer Vakzinierung mit Footvax® oder einem bestandsspezifischen
Impfstoff (MULVANEY et al. 1984; LAMBELL 1986; JANETT 1993; ABBOTT u.
LEWIS 2005; LOTTNER 2006).
DISKUSSION
105
Trotz der großen finanziellen Investition in die Antibiotikapräparate überzeugt die
Behandlung durch einen schnellen Wirkungseintritt. Der Schäfer nimmt den Erfolg
seiner Therapie spätestens am 5. Tag nach der Applikation wahr.
Jedoch unterstützen die Chemotherapeutika nicht die Ausbildung einer protektiven
Immunantwort, sondern hemmen ausschließlich das Fortschreiten der akuten Ent-
zündungsreaktion und führen zur Abheilung der Klauenläsionen. Für die langfristige
Kontrolle der Moderhinke sind zusätzliche Maßnahmen erforderlich. Hierzu zählen
unter anderem die regelmäßige Anwendung eines Impfstoffs, die Einhaltung einer
Quarantänezeit von zwei Wochen bei Zukäufen und die Merzung von chronisch
kranken bzw. rezidivierenden Tieren (LOTTNER u. GANTER 2004).
Zu beachten ist auch die Wartezeit, die für die Anwendung von Tilmicosin auf essbare
Gewebe 42 Tage beträgt. Im Vergleich dazu ist für Footvax® und Golden Hoof plus®
eine Wartezeit von 0 Tagen auf Fleisch festgelegt. In der langen Wartezeit sehen
GREEN et al. (2011) den größten Hinderungsgrund hinsichtlich der Etablierung einer
Antibiotikatherapie bei der Moderhinke. Aufgrund ihrer Erfahrung vertreten sie die
Auffassung, dass die uneingeschränkte Vermarktungsfähigkeit des Schafes die Wahl
der Behandlungsmethode maßgeblich beeinflusst (JORDAN et al. 1996; GREEN et
al. 2011).
5.3 Schlussfolgerungen
Die Ergebnisse der hier vorliegenden Untersuchung sind ein Beleg für die hohe
Effektivität einer parenteralen Antibiotikatherapie bei der Moderhinke des Schafes.
Während sich im Hinblick auf den Heilungsverlauf die Antibiotika- und Klauenbad-
behandlungen nicht voneinander unterschieden, konnte ab dem 10. Tag nach
Versuchsbeginn stets ein signifikanter Unterschied im Vergleich zur unbehandelten
Kontrollgruppe festgestellt werden. Bezüglich des Golden Hoof plus® Klauenbades ist
zu betonen, dass bei der vorliegenden Untersuchung an neun aufeinanderfolgenden
Tagen Klauenbäder unter optimalen Bedingungen durchgeführt wurden. Dies ist mit
einem erheblichen Arbeitsaufwand verbunden, der in der Praxis von einem Schäfer
kaum geleistet werden kann. Insofern dürfen die hier mit den Klauenbädern erzielten
Behandlungserfolge nicht verallgemeinert werden. Es wird empfohlen, sowohl bei der
DISKUSSION
106
Klauenbadbehandlung als auch bei der Antibiotikagabe den Erfolg der Therapie
spätestens am 5. Tag nach Behandlungsbeginn zu kontrollieren. Weisen die Tiere zu
diesem Zeitpunkt an den Klauen keine Verbesserung auf, ist eine Wiederholung der
Behandlung angezeigt. Das Risiko einer fehlerhaften subkutanen Injektion der
Antibiotika oder die unzureichende Freilegung der Unterminierungen am Klauenhorn
gefährden den Behandlungserfolg. Entsprechend sollte die subkutane Injektion der
Antibiotika in weniger stark bewollte Hautareale z. B. in die Knie- oder Axelfalte
erfolgen und bei der chronischen Form der Erkrankung die Chemotherapie einer
Klauenbadbehandlung vorgezogen werden. Die regelmäßige Erhebung eines Beweg-
ungsbefundes stellt sich, neben dem Klauenscoring, als zuverlässiger Parameter
hinsichtlich der Überwachung des Therapieverlaufs dar.
Die Ergebnisse der nested PCR in der vorliegenden Arbeit belegen die bereits von
BELLOY et al. (2007) ermittelte hohe Sensitivität und Spezifität dieser Nachweis-
methode. Zusammen mit den Untersuchungen von FROSTH et al. (2012) zeigen die
vorliegenden Ergebnisse auf, dass für den mikrobiologischen Nachweis des Erregers,
bspw. in Verbindung mit der anschließenden Herstellung einer Bestandsvakzine,
mindestens vier Schafe beprobt werden sollten. Unabhängig von den labordi-
agnostischen Detektionsmethoden von D. nodosus bleibt die regelmäßige Adspektion
der Klauen zur Diagnose der Moderhinke von entscheidender Bedeutung.
Ein langfristiger Effekt ist nach einmaliger Antibiotikagabe jedoch nicht grundsätzlich
zu erwarten. Wie sich im Anschluss an die Versuche herausstellte, zeigten laut
Aussage der Tierbesitzer zahlreiche Schafe sechs Wochen nach Rücktransport in den
Herkunftsbetrieb bereits wieder Rezidive. Somit sollte die parenterale Antibiotika-
therapie stets in Verbindung mit weiteren Management- und Behandlungsmaßnahmen
durchgeführt werden (WINTER 2009). In diesem Zusammenhang besteht die Möglich-
keit der genetischen Selektion auf Moderhinketoleranz mittels des Footrot Gene
Marker Tests. Allerdings konnten bei zahlreichen Tieren der Rasse Graue Gehörnte
Heidschnucke die ermittelten Allelkombinationen der DQA2 Haplotypen nicht beurteilt
werden. Nur bei 54,5 % der untersuchten Heidschnucken war ein „Footrot Rating“
möglich. Demgegenüber waren sowohl bei den Kreuzungstieren als auch den
Schwarzköpfigen Fleischschafen Bewertungen der DQA2 Allelkombinationen möglich.
DISKUSSION
107
Ein Zusammenhang zwischen den Genotypisierungsergebnissen und den am
Einzeltier erhobenen Klauen- und Locomotion Scores konnte in der Korrelations-
analyse nicht festgestellt werden. Folglich beeinflussen neben der genetisch
determinierten Immunantwort andere Faktoren den Schweregrad der Erkrankung
(GRAHAM u. EGERTON 1968; WASSINK et al. 2003; HALL et al. 2011;
KUHLEMANN 2011).
Aktuell besteht in Deutschland hinsichtlich der Moderhinke des Schafes aus
arzneimittelrechtlicher Sicht kein Therapienotstand, jedoch sind aufgrund der
strukturellen Veränderungen in der Schafhaltung dringend auch alternative
Behandlungsverfahren angezeigt (LOTTNER u. GANTER 2004; KUHLEMANN 2011;
FRIEDRICH et al. 2012).
In Deutschland ist nur Wundstein-Essenz als Tierarzneimittel für die Klauenbad-
anwendung zugelassen. Die für eine erfolgreiche Moderhinketherapie erforderliche
Wirkstoffkonzentration von 5 % Kupfersulfat (LOTTNER u. GANTER 2004) wird
jedoch bei bestimmungsgemäßem Gebrauch von Wundstein-Essenz nicht erzielt
(EMMERICH et al. 2013). Aber auch die Beschaffung von Golden Hoof plus® aus
Großbritannien ist derzeit schwierig, da die Herstellerfirma das Produkt erst ab einer
Tonne nach Deutschland exportiert und aktuell kein Therapienotstand vorliegt (s.o.).
Zugelassene Biozide, wie Formalin sowie DragonhydeTM, dürfen als Klauenbadlösung
ausschließlich bei klauengesunden Schafen angewendet werden. Im Gegensatz zu
den Inhaltsstoffen für eine therapeutische Klauenbadbehandlung sind tetrazyklin-
haltige Sprays für die topische Anwendung zugelassen und im Handel erhältlich.
Weitere verfügbare Optionen für die Moderhinketherapie stellen die Anwendung eines
multivalenten bzw. bestandsspezifischen Impfstoffs oder die vom Tierarzt durchge-
führte parenterale Behandlung der Tiere mit Tilmicosin dar. Letzteres geht mit hohen
finanziellen Aufwendungen einher und könnte aufgrund des Verbots der
selbständigen Durchführung zu mangelnder Compliance führen. Folglich sollte der
Fokus auf die Zulassung weiterer gegen die Moderhinke des Schafes wirksamer
Antibiotika gerichtet werden, die vom Schäfer selbst appliziert werden können.
Mit der nested PCR und Tilmicosinbehandlung sind, in Anbetracht der vorliegenden
Ergebnisse, die wichtigsten Voraussetzungen für die Einführung eines nationalen
DISKUSSION
108
Sanierungsprogramms erfüllt, jedoch wäre vorläufig das Ziel einer Senkung der
Moderhinke-Prävalenz der betroffenen Herden auf < 2 % erstrebenswert (WASSINK
et al. 2010; GREEN et al. 2011). Hierfür wird empfohlen, zunächst eine systemische
antibiotische Behandlung der erkrankten Schafe auf trockenem Untergrund durch-
zuführen. Um jedoch einen nachhaltigen Effekt zu erzielen, ist die Ausbildung einer
protektiven Immunreaktion gegen D. nodosus-Antigene erforderlich.
Neben der Virulenzbestimmung bleibt ein Ziel der Forschung die Herstellung von
bestandsspezifischen Vakzinen. Diese haben in vielen Sanierungsprogrammen
entscheidend zum langfristigen Erfolg beigetragen, setzen jedoch fundierte
Erfahrungen in der kulturellen Untersuchung von D. nodosus und eine im Anschluss
durchgeführte Serogruppenbestimmung voraus (EGERTON et al. 2002; GURUNG et
al. 2006; DHUNGYEL et al. 2008). Während Antibiotika die akute Entzündungs-
reaktion hemmen, fördern Impfstoffe den Aufbau einer protektiven Immunantwort
gegen D. nodosus. Dass bei der kombinierten Anwendung von Langzeitamoxicillin
(15 mg/kg KGW intramuskulär) mit dem multivalenten Impfstoff Footvax® im Vergleich
zur ausschließlichen Antibiotikatherapie höhere Heilungsraten zu erzielen sind,
wiesen DUNCAN et al. (2012) nach. Der Beobachtungszeitraum betrug neun Wochen.
Zwischen den beiden Behandlungsverfahren konnten signifikante Unterschiede
erhoben werden. Während bei 92,09 % der zusätzlich vakzinierten Tiere die klinischen
Läsionen abheilten, wurde bei den ausschließlich mit Amoxicillin behandelten Tieren
eine Heilungsrate von 81,54 % ermittelt.
Folglich sollte der in der vorliegenden Studie ausgearbeitete Ansatz mit der Herstell-
ung von stallspezifischen Vakzinen kombiniert werden, um in Herden mit Moderhinke
den Behandlungserfolg langfristig abzusichern.
Wird das Ziel einer Sanierung der Moderhinke verfolgt, sollte eine Behandlung zu
einem Zeitpunkt durchgeführt werden, an dem eine möglichst niedrige
Moderhinke-Prävalenz vorliegt. Zur Stimulation der Immunität gegen D. nodosus sollte
die Impfung (Footvax® oder herdenspezifische Vakzine) frühzeitig zu den erwartenden
Risikozeiten stattfinden. Gleichzeitig sollten Schafe die rezidivierend an Moderhinke
DISKUSSION
109
erkranken frühzeitig gemerzt werden (LOTTNER u. GANTER 2004; LOTTNER 2006;
WINTER 2009).
Langfristig erscheint eine gezielte Selektion auf Moderhinketoleranz bzw. gegen
Moderhinkeempfänglichkeit auf der Basis des „Footrot Ratings“ empfehlenswert. Zur
Zertifizierung der „Moderhinkefreiheit“ können PCR Techniken eingesetzt werden.
Anzahl der Proben und Frequenz dieser Untersuchungen sind wissenschaftlich noch
zu evaluieren.
ZUSAMMENFASSUNG
111
6 ZUSAMMENFASSUNG
Theres Friese (2013)
Vergleichende Untersuchung zur klinischen Wirksamkeit von systemischen
Behandlungen mit Oxytetrazyklin, verschiedenen Makrolid-Antibiotika,
Lincomycin/Spectinomycin gegen Moderhinke beim Schaf im Vergleich zu
Zinksulfat-Klauenbädern
Moderhinke ist die weltweit wirtschaftlich bedeutendste Klauenentzündung der kleinen
Wiederkäuer. Bislang zählte die topische Behandlung frisch ausgeschnittener Klauen
in einem Zinksulfatklauenbad oder die Anwendung eines Impfstoffs zu den
effektivsten Therapie- und Prophylaxemaßnahmen. In aktuellen Studien wird jedoch
die einmalige parenterale Applikation eines Antibiotikums spätestens 72 Stunden
nach Diagnosestellung empfohlen. Auf Grundlage dieser Erkenntnis entwickelten
insbesondere britische und skandinavische Wissenschaftler einheitliche nationale
Leitlinien. Ähnliche Ansätze unter Berücksichtigung des Arzneimittelgesetztes sind
auch in Deutschland dringend angezeigt.
In diesem Zusammenhang wurde in der vorliegenden Untersuchung die klinische
Wirksamkeit einer Oxytetrazyklin (Baxyl® LA 200 mg/ml, WDT-Wirtschafts-
genossenschaft Deutscher Tierärzte eG, Garbsen) - bzw. Tilmicosinbehandlung
(Tilmodil® 300 mg/ml, WDT-Wirtschaftsgenossenschaft Deutscher Tierärzte eG,
Garbsen) im Gegensatz zu einem täglichen Zinksulfatklauenbad (Golden Hoof plus®,
Shepfair Products Ltd, Abergavenny, Großbritannien) bei der Moderhinke des Schafes
überprüft. Weitere Antibiotika, wie das Kombinationspräparat Lincospectin® (Pfizer,
Karlsruhe) zusammengesetzt aus Lincomycin (50 mg/ml) und Spectinomycin
(100 mg/ml), sowie die drei Makrolide Tulathromycin (Draxxin® 100 mg/ml, Pfizer,
Karlsruhe), Gamithromycin (Zactran® 150 mg/ml, Merial GmbH, Toulouse, Frankreich)
und Tildipirosin (Zuprevo®, 180 mg/ml, MSD Animal Health, Intervet Deutschland
GmbH, Unterschleißheim) wurden in einem zusätzlichen Versuchsdurchgang
vergleichend getestet. Insgesamt fanden vier Versuchsdurchgänge mit 123 an
Moderhinke erkrankten Schafen der Rassen Merinolandschaf (n = 2), Graue Gehörnte
ZUSAMMENFASSUNG
112
Heidschnucke (n = 22) und Schwarzköpfiges Fleischschaf (n = 35) sowie
Kreuzungstieren (Coburger Fuchs x Schwarzköpfiges Fleischschaf, n = 64) statt. Die
Anwendung der Antibiotika erfolgte, mit Ausnahme von Oxytetrazyklin, einmalig
subkutan an der seitlichen Brustwand hinter dem Schulterblatt. Demgegenüber stand
eine dreimalige Oxytetrazyklinbehandlung im Abstand von je 48 Stunden bzw. das
tägliche Baden der Klauen in einer 10 %igen Lösung von Golden Hoof plus® an neun
aufeinanderfolgenden Tagen. Während des dreiwöchigen Beobachtungszeitraums
wurde die Effektivität der Wirkstoffe gegenüber Moderhinke mittels regelmäßig
durchgeführter Klauen- und Locomotion Scorings ermittelt und vergleichend zu einer
unbehandelten Schafgruppe betrachtet. Zur Bestätigung der klinischen Verdachts-
diagnose Moderhinke wurde eine nested PCR eingesetzt und versucht Dichelobacter
nodosus (D. nodosus) kulturell auf Blut Eugon Agar mit Lincomycinzusatz nachzu-
weisen.
Die Ergebnisse der vorliegenden Untersuchung zeigen, dass die einmalige Applikation
eines Antibiotikums mit der Abheilung der klinischen Symptome einer Moderhinke
einhergeht. Eine Reduktion der Klauen- und Locomotion Scores konnte innerhalb des
Beobachtungszeitraums bei allen Tieren erzielt werden. Es wurden keine lokalen oder
systemischen Nebenwirkungen in Folge der Anwendung der sechs verschiedenen
Antibiotika beobachtet. Während sich im Hinblick auf den Heilungsverlauf die
Antibiotika- und Klauenbadbehandlungen nicht voneinander unterschieden, konnten
jedoch ab dem 10. Tag nach Versuchsbeginn in allen Behandlungsgruppen hoch
signifikante Unterschiede der Klauenscores im Vergleich zu den unbehandelten
Schafen festgestellt werden (p<0,001). Aufgrund des Risikos von Fehlinjektionen wird
empfohlen, den Erfolg der Antibiotikatherapie spätestens am 5. Tag nach Behand-
lungsbeginn zu kontrollieren. Weisen die Tiere zu diesem Zeitpunkt an den Klauen
keine Verbesserung der klinischen Symptome auf, ist eine Wiederholung der Behand-
lung notwendig.
Mittels nested PCR konnte D. nodosus in 96 % aller Proben nachgewiesen werden.
Im Vergleich dazu konnte der Erreger mittels kultureller Methode nur aus jeder vierten
Probe isoliert werden.
ZUSAMMENFASSUNG
113
Zusätzlich wurde untersucht, inwieweit der Footrot Gene Marker Test (FGMT) zur
Evaluierung der Moderhinkeempfänglichkeit bei deutschen Schafrassen einsetzbar ist.
Es konnten bei lediglich 54,5 % der Heidschnucken die Allelkombinationen der DQA2
Haplotypen im Hinblick auf die genetische Moderhinkeempfänglichkeit bewertet
werden. Jedoch war die Bewertung bei den Schwarzköpfigen Fleischschafen und
Kreuzungstieren in der Mehrzahl möglich.
Somit folgt aus der vorliegenden Untersuchung, dass die parenterale Antibiotika-
therapie eine effektive und mit Tilmicosin rechtlich gesicherte alternative
Behandlungsmethode zum Zinksulfatklauenbad darstellt. Die parenterale Anti-
biotikatherapie erfüllt die wichtigsten Voraussetzungen für die Bekämpfung und ggf.
Sanierung von Schafherden mit Moderhinke.
SUMMARY
115
7 SUMMARY
Theres Friese (2013)
Comparative study on the clinical efficacy of the systemic antibiotic treatment with
oxytetracycline, several macrolides, lincomycin/spectinomycin compared to zinc
sulphate foot-bathing against footrot in sheep.
From an economic point of view, footrot is the most significant disease of small
ruminants worldwide. Until now, the topical treatment of sheep with pared feet by zinc
sulphate solution or the use of a vaccine have been among the most effective pre-
vention and therapeutic measures. However, in recent studies it is recommended to
apply antibiotics parenterally at the latest 72 h after footrot has been diagnosed.
Based on these findings, British and Scandinavian scientists have developed standard
national guidelines. In Germany, similar approaches in consideration of the
pharmaceutical law (AMG) are required.
In this context, the aim of the present clinical study was to compare the efficacy of
systemic treatment with oxytetracycline (Baxyl® LA 200 mg/ml, WDT, Garbsen,
Germany) and tilmicosin (Tilmodil® 300 mg/ml, WDT, Garbsen, Germany), respectively
to a daily zinc sulphate footbathing (Golden Hoof plus®, Shepfair Products Ltd,
Abergavenny, GB) against footrot in sheep. In a further trial Lincospectin® (Pfizer,
Karlsruhe, Germany), containing both lincomycin (50 mg/ml) and spectinomycin
(100 mg/ml), and the three macrolides tulathromycin (Draxxin® 100 mg/ml, Pfizer
Karlsruhe, Germany), gamithromycin (Zactran® 150 mg/ml, Merial GmbH, Toulouse,
France) and tildipirosin (Zuprevo® 180 mg/ml, MSD Animal Health, Intervet Germany
GmbH, Unterschleißheim, Germany) have been tested and compared to each other.
In total, 123 sheep of the breeds German Merino (n = 2), German Grey Heath Sheep
(n = 22) and German Blackheaded Mutton Sheep (n = 35) as well as cross-bred
Coburger Fox Sheep x German Blackheaded Mutton Sheep (n = 64) were included in
the study. In all four runs, the sheep were divided into groups so that each group had
similar severe foot scores. Antibiotics were administered once subcutaneously at the
lateral chest wall behind the shoulder. In contrast, oxytetracycline was given as a triple
SUMMARY
116
injection in an interval of 48 h. Sheep of the footbathing group walked through a 10 %
Golden Hoof plus® solution on nine consecutive days. During the three week
observation period, the effectiveness of the agents against footrot was determined by
foot- and locomotion scorings at regular intervals and in comparison to an untreated
group. In order to confirm the clinically suspected diagnosis of footrot a nested PCR
was used and an attempt to cultivate the bacterial pathogen on blood eugon hoof agar
with lincomycin was conducted.
The results of the current study show, that a single antibiotic injection reduces the
severity of symptoms of virulent footrot in infected sheep. During the observation
period, a decrease of the foot- and locomotion scores could be detected for each
sheep. Local or systemic adverse effects due to the treatment with six different
antibiotics have not been observed. Regarding cure rate, there was no difference
between antibiotic groups and the footbathing group. However, from the tenth day
onwards, there was a significant difference in terms of the foot scores in all treatment
groups compared to untreated study participants (p<0,001). Due to the risk of failed
injections, it is recommended to control the therapeutic effect on the 5th day at the
latest. Replication of the treatment will be necessary if there is no change in clinical
symptoms within that time.
Using nested PCR, D. nodosus could be detected in 96 % of the swab samples. In
comparison, by dint of cultural methods the bacterium could only be isolated in every
fourth hoof sample.
Furthermore, it was examined if the New Zealand footrot gene marker test, as an
indicator for the susceptibility of footrot, could generally be applied for German sheep
breeds. With regard to the genetically determined susceptibility of German Grey Heath
sheep, the allele combinations of the DQA2 haplotypes could only be validated in
54.5 % of the samples. However, in most cases the evaluation was possible for cross-
bred sheep and German Blackheaded Mutton Sheep.
In conclusion, the current study shows that a systemic antibiotic therapy with tilmicosin
is a legally accepted and effective alternative therapeutic agent compared to a zinc
sulphate footbath against footrot in sheep. In combination with the nested PCR, it
meets the essential requirements for the control of footrot.
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ABBILDUNGSVERZEICHNIS
141
9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS
Abb.1: Makrolide, die in der vorliegenden Studie angewandt wurden (Einteilung
modifiziert nach BRYSKIER et al. 1993)................................................................... 21 Abb. 2: Strukturformel der Tetrazykline..................................................................... 25 Abb. 3: Strukturformel Spectinomycin....................................................................... 26 Abb. 4: Strukturformel Lincomycin ............................................................................ 26 Abb. 5: Score 1: Geringgradige Entzündung der Haut des interdigitalen Spalts....... 25 Abb. 6: Score 2: Mittelgradige bis hochgradige Entzündung der Haut des inter-
digitalen Spalts, zunehmende Sekretbildung im interdigitalen Spalt, Wahrnehmung
eines modrig-fauligen Geruchs ................................................................................. 25 Abb. 7: Score 3: Auftreten von interdigitalen Läsionen und Unterminierungen des
Ballen- und Sohlenhorns........................................................................................... 25 Abb. 8: Score 4: Zusätzliche Unterminierung des abaxialen Wandhorns ................. 45
Abb. 9: Darstellung des TWDS und TFS am Beispiel: Für dieses Tier wäre ein TFS
von 4 zu erheben - vergleichend hat der TWDS einen Gesamtwert von 18 (= 4² + 2)
.................................................................................................................................. 46 Abb. 10: Beispiel der Darstellung der Ergebnisse..................................................... 51 Abb. 11: Anzahl der kulturellen Nachweise von D. nodosus..................................... 55 Abb. 12: Ergebnisse der nested PCR des dritten Versuchsdurchgangs - 24 Proben
(Protokoll: 06.10.2011).............................................................................................. 56 Abb. 13: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Oxytetrazyklin, Tilmicosin bzw. Zinksulfat – dargestellt sind im Vergleich
zu den Behandlungsgruppen des ersten Versuchsdurchgangs die Werte einer
unbehandelten Tiergruppe........................................................................................ 66
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
142
Abb. 14: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer
Moderhinketherapie mit Oxytetrazyklin, Tilmicosin bzw. Zinksulfat – dargestellt sind
im Vergleich zu den Behandlungsgruppen des zweiten und dritten
Versuchsdurchgangs die Werte einer unbehandelten Tiergruppe ............................ 68 Abb. 15: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Gamithromycin, Lincomycin/Spectinomycin bzw. Zinksulfat – dargestellt
sind im Vergleich zu den Behandlungsgruppen des dritten Versuchsdurchgangs die
Werte einer unbehandelten Tiergruppe .................................................................... 70 Abb. 16: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Tilmicosin bzw. Zinksulfat – dargestellt sind im Vergleich zu diesen
beiden Behandlungsgruppen des vierten Versuchsdurchgangs die Werte einer
unbehandelten Tiergruppe........................................................................................ 72 Abb. 17: Interquartilabstand der Klauenscores im Zeitverlauf einer Moderhinke-
therapie mit Gamithromycin, Tildipirosin bzw. Tulathromycin – dargestellt sind im
Vergleich zu diesen drei Makrolidgruppen des vierten Versuchsdurchgangs die
Werte einer unbehandelten Tiergruppe .................................................................... 72 Abb. 18: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Zinksulfatgruppe des
ersten Versuchsdurchgangs ..................................................................................... 75 Abb. 19: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Zinksulfatgruppen
des zweiten sowie dritten Versuchsdurchgangs ....................................................... 76 Abb. 20: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Gamithromycin-, Lincomycin/Spectinomycin- und
Zinksulfatgruppe des dritten Versuchsdurchgangs ................................................... 78 Abb. 21: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Tilmicosin-, Gamithromycin- und Zinksulfatgruppe des
vierten Versuchsdurchgangs .................................................................................... 80
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
143
Abb. 22: Interquartilabstand der Locomotion Scores im Verlauf des Beobachtungs-
zeitraums - dargestellt sind die Tildipirosin-, Tulathromycin- und Zinksulfatgruppe des
vierten Versuchsdurchgangs .................................................................................... 80
TABELLENVERZEICHNIS
145
10 TABELLENVERZEICHNIS
Tab. 1: Vergleichende Darstellung der Pharmakokinetik von Tulathromycin,
Gamithromycin, Tilmicosin, Tildipirosin und Erythromycin; Referenzwerte für Rind
und Kalb bzw. Schaf (Tilmicosin) nach parenteraler Applikation .............................. 24 Tab. 2: Anzahl der Tiere pro Versuchsdurchgang und Behandlungsgruppe............. 35 Tab. 3: Beurteilung der Vererbungseigenschaften der Moderhinke auf die
Nachkommen nach HICKFORD (o. Jg.) ................................................................... 43 Tab. 4: Locomotion Scoring nach KALER et al. (2009)............................................. 47 Tab. 5: TWDS-Werte der unbehandelten Gruppe..................................................... 49 Tab. 6: Nachweisrate der kulturell-mikrobiologischen Untersuchung im Vergleich zur
nested PCR nach BELLOY et al. (2007)................................................................... 56 Tab. 7: Genotypisierungsergebnisse der ersten Versuchstiergruppe im Vergleich zu
den erhobenen klinischen Befunden......................................................................... 57 Tab. 8: Darstellung der Genotypisierungsergebnisse der zweiten Versuchstiergruppe
im Vergleich zu den erhobenen klinischen Befunden ............................................... 59 Tab. 9: Darstellung der Genotypisierungsergebnisse der dritten Versuchstiergruppe
im Vergleich zu den erhobenen klinischen Befunden ............................................... 60 Tab. 10: Darstellung der Genotypisierungsergebnisse der vierten Versuchstiergruppe
im Vergleich zu den erhobenen klinischen Befunden ............................................... 62 Tab. 11: Klauenbefunde der Schafe vor Behandlungsbeginn................................... 64 Tab. 12: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum–TWDS-
Werte der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des ersten
Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf.......................................................................... 65 Tab. 13: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und
Klauenbadgruppen des ersten Versuchsdurchgangs mit den erhobenen
TWDS-Werten einer unbehandelten Gruppe ............................................................ 66
TABELLENVERZEICHNIS
146
Tab. 14: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum–
TWDS-Werte der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des zweiten
sowie dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf..................................................... 67 Tab. 15: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und
Klauenbadgruppen des zweiten und dritten Versuchsdurchgangs mit den erhobenen
TWDS-Werten einer unbehandelten Gruppe ............................................................ 68 Tab. 16: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
TWDS-Werte der Gamithromycin-, Lincomycin/Spectinomycin- und
Klauenbadgruppen des dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf ......................... 69 Tab. 17: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Behandlungsgruppen des dritten
Versuchsdurchgangs mit den erhobenen TWDS-Werten einer unbehandelten
Gruppe...................................................................................................................... 70 Tab. 18: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
TWDS-Werte der Makrolid- und Klauenbadgruppen des vierten Versuchsdurchgangs
im Zeitverlauf ............................................................................................................ 71 Tab. 19: p-Werte aus dem Vergleich zwischen den Behandlungsgruppen des vierten
Versuchsdurchgangs mit den erhobenen TWDS-Werten einer unbehandelten
Gruppe...................................................................................................................... 73 Tab. 20: Therapieerfolg der Behandlungsgruppen im Klauenscoring: Anzahl (n) und
Prozentsatz (%) der Tiere, die zum Versuchsende keine lokalen Symptome einer
Moderhinke mehr zeigten ......................................................................................... 73 Tab. 21: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
Locomotion Scores der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des
ersten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf............................................................... 74 Tab. 22: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum–
Locomotion Scores der Oxytetrazyklin-, Tilmicosin- und Klauenbadgruppen des
zweiten sowie dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf........................................ 76
TABELLENVERZEICHNIS
147
Tab. 23: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
Locomotion Scores der Gamithromycin-, Lincomycin/Spectinomycin- und
Klauenbadgruppen des dritten Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf ......................... 77 Tab. 24: Median-, 25 %- und 75 %-Quartil sowie Minimum- und Maximum-
Locomotion Scores der Makrolid- und Klauenbadgruppen des vierten
Versuchsdurchgangs im Zeitverlauf.......................................................................... 79 Tab. 25: Therapieerfolg der Behandlungsgruppen im Locomotion Scoring (LS):
Anzahl (n) und Prozentsatz (%) der Tiere, die am Ende des Versuchszeitraums keine
Lahmheit mehr zeigten ............................................................................................. 81 Tab. 26: Anzahl (n) und prozentualer Anteil (%) der Schafe aller
Behandlungsgruppen der vier Versuchsdurchgänge, bei denen sich die Klauen-
sowie Locomotion Scores durch die Therapie im Vergleich zum
Beurteilungszeitpunkt Tag 1 verbesserten................................................................ 82
DANKSAGUNG
149
11 DANKSAGUNG
Mein besonderer Dank gilt Herrn Prof. Ganter für die Überlassung des interessanten
Themas und die konstruktive Unterstützung während meiner Arbeit.
Hervorheben möchte ich die Zusammenarbeit mit Frau Dr. Rohde aus dem Mikrobio-
logischen Institut. Ihr Eifer bei der Suche nach dem letzten „Dino“ ist ein Vorbild für die
Taphonomie.
Vielen Dank an das Laborteam der kleinen Klauentierklinik, besonders Christina Boss,
für die unermüdliche Hilfe bei der Probenaufarbeitung und PCR Untersuchung.
Herzlichen Dank an Dr. Karl Rohn für sein Engagement und seine hilfsbereite Betreu-
ung bei der statistischen Auswertung.
Ein großes Dankeschön an die Mädels vom Tisch 3, an Gudrun und meinen Mitstreit-
erinnen aus der kleinen Klauentierklinik. Olé ich drücke dir ganz fest die Daumen und
freue mich schon jetzt auf deinen großen Auftritt.
Im weiteren Danke ich Klaus, Torsten, Tanja, Dagmar sowie Barbara und Julia für die
super Verpflegung meiner Tierchen.
Die Hilfe der Assistenzärzte, Bremser und Studenten beim Scoren soll an dieser Stelle
ausdrücklich Dank verliehen werden, sie bleibt mir stets in Erinnerung.
Ich danke sowohl Wolfgang als auch Kurtchen für die amüsanten Fahrten ins Land
der Frühaufsteher und zum hilfsbereiten „Schafdealer“ Bernd. Kurt ich wünsche dir
alles Gute im wohlverdienten Ruhestand und vergiss deine Schnecke nicht!
Der größte Dank wird meinen 123 Probanden zugesprochen, die täglich unbewusst
ihren Beitrag geleistet haben.