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Reno Frei Klinische Mikrobiologie
Antigen-/Schnellteste
Antigen-/Schnellteste EIA / Immunchromatographie
Erreger Sensitivität % Bemerkung
Gruppe-A-Streptokokken 75 - 85
von Abstrichqualität abhängig
Influenza A & B 40 - 80 bei Erwachsenen (bei Kindern 60-85%)
Norovirus 55 - 75 bei frischen Proben, u.a. abhängig vom Genotyp
HIV 99.9 meist nur AK-Nachweis, nicht AG! → Bestätigung
Malaria 94 - 100 bei P. falciparum
Selten falsch positive Resultate (Spezifität >95%)
Nachweis toxigener C. difficile Sensitivität (%) versch. Methoden
J Clin Microbiol 2008,46:1996-2001
%
C. difficile Algorithmus mit Antigentest
Antigentest
Kein C. difficile
87%
Toxintest
Toxinprod. C. difficile
5%
Unklar 8%
PCR oder tox. Kultur
negativ positiv
negativ
J Clin Microbiol 2008,46:328-330
positiv
Legionella pneumophila Urin-Antigentest
• Immunchromatografischer Membrantest, <15 Min. • Nur L. pneumophila Serogr. 1 zuverlässig erfasst • Zusatz oder Alternative zur Kultur oder PCR • Sensitivität 70-90%
abhängig u. a. vom Anteil der Serogruppe 1 • Falsch-negativ
– sehr früh im Verlauf (<4 Tage) → wiederholen – Bei anderen Serogruppen und Spezies – Bei leichten Fälle
• Spezifität fast 99% • Bleibt auch unter Antibiotika für Wochen positiv
2
Legionella Urin-Antigentest Sensitivität (%) nach klinischem Schweregrad
J Clin Microbiol 2002,40:3232
Streptococcus pneumonie Urin-Antigentest
• Methodisch und technisch gleich wie Legionellen-AG • Nachweis von Zellwand-Polysaccharid (alle Serotypen) • Probe leicht erhältlich, schnell, auch bei Anbehandlung • Sensitivität 50-87%, bei Bakteriämie 70-92% • Pneumonie-Aetiologie von 28 auf 49% gesteigert1,
38% mehr Pneumokokken als mit Kultur2
• Spezifität 90-100% bei Erwachsenen • Kann lange positiv bleiben, Titer-HWZ 1-3.4 Wochen3
• Validiert für Urin, Liquor, Pleurapunktat und Blutkultur
3) Scand J Infect Dis 2006,38:166-71 4) Int J Infect Dis 2007,11:284-5
1) Clin Vaccine Immunol 2006,13:1092-7 2) Chest 2007,131:1442-7
Ambulant erworbene Pneumonie (CAP) Guidelines
• Urin-Antigentests: schnell, einfach, spezifisch, auch nach/unter Antibiotika
• Pneumokokken-Antigen: sensitiver als Blut- und Sputumkulturen
• Bei Pat. mit schwerer CAP: Legionellen- und Pneumokokken-Antigen aus Urin empfohlen neben Blut und Sputumkulturen
• Bei ambulanten Pat. ist mikrobiologische Diagnostik optional
Clin Infect Dis 2007,44:S27–72 British Thoracic Society. Thorax 2009,63; Suppl. III
Klinische Bakteriologie Aktuelle Entwicklung
MALDI-TOF MS
Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization – Time of Flight
Mass Spectrometry
MALDI-TOF MS
Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization – Time of Flight
Mass Spectrometry
3
MALDI-TOF versus Routine Korrekte Spezies (%)
J Clin Microbiol 2010,48:900-7
%
MALDI-TOF MS in der klinischen Mikrobiologie
• Genauere Identifikation von kultivierten Bakterien, Hefen und Schimmelpilzen
• Zurzeit 1500-2000 Spezies in Datenbank • Schnelle Resultate: ~6 Min./Einzelisolat,
bis 96 Isolate: ca. 1 Min. pro Isolat • Tiefere Kosten im Betrieb • Stellt Revolution / Quantensprung in der
diagnostischen Bakteriologie dar
Clin Microbiol Infect 2010,16, ganze November-Ausgabe
MALDI-TOF ab pos. Blutkultur Performance (%)
* Mod. nach J. Bille, IDSA Vancouver 2010
Frage
Wachstum von Streptococcus gallolyticus in der Blutkultur: Was suchen Sie?
1) Zahnabszess/Wurzelgranulom 2) Gastrointestinales Malignom 3) Pleuraempyem 4) Infekt der Luftwege 5) Nichts Spezifisches
Enterobacter cloacae-Komplex
• E. cloacae • E. asburiae • E. kobei • E. budwigii • E. hormaechei • E. nimipressuralis
E. sakazakii heute Cronobacter sakazikii
Taxonomische Änderungen
Klinische Bedeutung
Früher Aktuell
Endokarditis Nutritionally variant streptococci
Abiotrophia defectiva Granulicatella adiacens Granulicatella elegans
* Clin Infect Dis 2005,40:1070-1
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Taxonomische Änderungen
Klinische Bedeutung
Früher Aktuell
Endokarditis Nutritionally variant streptococci
Abiothrophia defectiva Granulicatella adiacens Granulicatella degans
Malignome im GI-Trakt
Streptococcus bovis* S. gallolyticus* S. infantarius
* Clin Infect Dis 2005,40:1070-1
Taxonomische Änderungen
Klinische Bedeutung
Früher Aktuell
Endokarditis Nutritionally variant streptococci
Abiotrophia defectiva Granulicatella adiacens Granulicatella elegans
Malignome im GI-Trakt
Streptococcus bovis* S. gallolyticus* S. infantarius
Abszesse Empyeme
Streptococcus milleri (-Gruppe)
S. anginosus-Gruppe: S. anginosus S. constellatus S. intermedius
* Clin Infect Dis 2005,40:1070-1
Endokarditis Taxonomie HACEK-Gruppe
Früher H Haemophilus
parainfluenzae Haemophilus (para-) aphrophilus
A Actinobacillus actinomycetemcomitans
C Cardiobacterium hominis
E Eikenella corrodens
K Kingella kingae
Endokarditis Taxonomie HACEK-Gruppe
Früher Aktuell H Haemophilus
parainfluenzae Haemophilus parainfluenzae H
Haemophilus (para-) aphrophilus
Aggregatibacter aphrophilus A
A Actinobacillus actinomycetemcomitans
Aggregatibacter actinomycetemcomitans
C Cardiobacterium hominis Cardiobacterium hominis C
E Eikenella corrodens Eikenella corrodens E
K Kingella kingae Kingella kingae K
Taxonomie-Websites für Bakterien
• J. P. Euzéby, Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse, France www.bacterio.cict.fr → All names cited in the List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature → früherer Namen = Basonym
• Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen www.dmsz.de → microorganisms → Nomenclature Up-to-Date → Search an alphabetical list of bacterial names A – Z → früherer Namen = Synonym
Tuberkulose-Diagnostik PCR ab Sputum
Verflüssigung + Homogenisierung
Konzentration
Zell-Lyse
Zubereitung Mastermix
DNA-Amplifikation (PCR)
Detektion
Interpretation
DNA-Extraktion
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N Engl J Med 2010,363:1005-15
GeneXpert MTB/RIF Schneller PCR-Nachweis GeneXpert® MTB/RIF
• Nachweis von Mycobacterium tuberculosis-Komplex und Mutationen für Rifampicinresistenz im rpoB-Gen
• Multizentrische Studie in Peru, Azerbaijan, Südafrika, Indien 1730 Patienten
• M. tbc-Nachweis gegenüber Kultur Sensitivität bei Mikroskopie-pos 98.2% Sensitivität bei Mikroskopie-neg 72.5% Spezifität 99.2%
• Rifampicinresistenz Sensitivität 97.6% Spezifität 98.1%
• Robust, auch in nicht spezialisiertem Labor • Für Einzelprobe vorgesehen, notfallmässig durchführbar
N Engl J Med 2010,363:1005-15
Bakteriologie Molekulare Tests (PCR u.a.)
• Schnell, sensitiv und spezifisch • In der Regel keine Resistenztestung • Oft teurer als andere Verfahren • Weisen vitale und tote Keime nach → • Nachweis nach/unter Antibiotika möglich • Zur Verlaufsüberwachung nicht geeignet
Mässiger Lungenbefall
J Clin Microbiol 1999,37:3601-7
Lungentuberkulose Wie lange bleibt PCR positiv?
Herzlichen Dank
Referenzen - 1
• Tarr Ph, Frei R. Molekulare Früherkennung in der Infektiologie –Molekulare Diagnostik: Eine praktische Einführung für Kliniker. Ther Umschau 2010;67: 381-6
• Mandell LA et al. Infectious Diseases Society of America / American Thoracic Society Consensus Guidelines on the management of community-acquired pneumonia in adults. Clin Infect Dis 2007;44:S27–72 (www.idsociety.org → guidelines)
• British Thoracic Society. Guidelines for the management of community acquired pneumonia in adults: update 2009. Thorax 2009;64, Suppl. III (www.brit-thoracic.org.uk → guidelines)
• Yzerman EPF et al. Sensitivity of three urinary antigen tests associated with clinical severity in a large outbreak of legionnaires’ disease in The Netherlands. J Clin Microbiol 2002;40: 3232-6
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Referenzen - 2 • Genné D. Enhancing the etiologic diagnosis of community-
acquired pneumonia in adults using the urinary antigen assay (Binax NOW). Int J Infect Dis 2006;10:124-8
• Fenner L et al. Rapid and reliable diagnostic algorithm for detection of Clostridium difficile. J Clin Microbiol 2008;46:328-30
• van't Wout JW, Bijlmer HA. Bacteremia due to Streptococcus gallolyticus, or the perils of revised nomenclature in bacteriology. Clin Infect Dis 2005;40:1070-1
• van Veen SQ et al. High-throughput identification of bacteria and yeast by matrix-assisted laser desorption ionization–time of flight mass spectrometry in conventional medical microbiology laboratories. J Clin Microbiol 2010;48:900-7
• Boehme CC et al. Rapid molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance. N Engl J Med 2010;363:1005-15