Date post: | 05-Apr-2015 |
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Pseudomonaden und Pseudomonaden und AeromonadenAeromonaden
Shahla SoltanmohammadlouShahla Soltanmohammadlou
und Elisabeth Kuhnertund Elisabeth Kuhnert
PseudomonadenPseudomonaden
Familie PseudomonaceaeFamilie Pseudomonaceae gram negative Stäbchengram negative Stäbchen polar begeißeltpolar begeißelt strikt aerobstrikt aerob pH: bis 5pH: bis 5 Temp. 0°C- 43°CTemp. 0°C- 43°C Über 60°C letal!Über 60°C letal! keine Sporen keine Sporen Pyocyanin, Pyorubin,Pyocyanin, Pyorubin, FluoresceinFluorescein
Abb.: Farbstoffbildung von Pseudomaden http://www.lg1.ch/cpg/displayimage.php?album=12&pos=0
Abb.: Mikroskopie von Pseudomonas http://www.lg1.ch/cpg/displayimage.php?album=12&pos=0
PseudomonadenPseudomonaden Feucht, BiologischeFeucht, Biologische Abwasserbehandlung.Abwasserbehandlung. Meereswasser(3,5%)Meereswasser(3,5%) LM: Fäulnis (schleimig)LM: Fäulnis (schleimig) Kühlhausflora(P.putida,Kühlhausflora(P.putida, P.fluorescens)P.fluorescens) SauerstoffeliminierteSauerstoffeliminierte BedingungenBedingungenFettsäurenFettsäurenVorläuferVorläufervon Acetatvon AcetatSubstrat Substrat methanogener MO!methanogener MO!
Abb.: Wasserspenderhttp://www.stern.de/wissenschaft/ernaehrung/551649.html?nv=nl_hp_rt
Abb.: kontaminiertes Fleischhttp://www.wdr.de/tv/service/kostprobe/inhalt/20040216/b_1.phtml
PseudomonadenPseudomonaden
Malachitgrün- Pepton- Bouillon Malachitgrün- Pepton- Bouillon (20h bei(20h bei 36°C)36°C)TrübungTrübungVerdacht aufVerdacht auf P.aeruginesaP.aeruginesa
Cetrimid- Agar Cetrimid- Agar (20h bei36°C)(20h bei36°C)Farbstofproduktion Farbstofproduktion ((blau- grunblau- grun)) spricht für P. aeruginesa spricht für P. aeruginesa
Chloroform: Pyocyanin in Chloroform und Wasser Chloroform: Pyocyanin in Chloroform und Wasser löslich, Fluorescein in Wasser aber nicht in Chloroform löslich, Fluorescein in Wasser aber nicht in Chloroform löslichlöslich
Cytochromoxidasereagenz(Cytochromoxidasereagenz(positivpositiv)) Gramfärbung(Gramfärbung(negativnegativ))
TiterbestimmungTiterbestimmung
ZL- KA: Bei der unverdünnten Wasserprobe waren ZL- KA: Bei der unverdünnten Wasserprobe waren Pseudomonaden nachzuweisen.Pseudomonaden nachzuweisen.
AL-KL: Bei der I.Verdünnungsstufe waren AL-KL: Bei der I.Verdünnungsstufe waren Pseudomonaden noch nachweisbar.Pseudomonaden noch nachweisbar.
BR- I: 100ml und10ml+5ml3XMPB(+)BR- I: 100ml und10ml+5ml3XMPB(+) ZL- PKA: Bei I.Verdünnungsstuffe waren noch ZL- PKA: Bei I.Verdünnungsstuffe waren noch
Pseudomonaden nachweisbar.Pseudomonaden nachweisbar.
MPN- VerfahrenMPN- Verfahren
0
50
100
150
200
250
300
ZL- KA ZL-PKA AL-KA BR- I
0
200
400
600
800
1000
1200
MPN
LL
UL
MembranfilterverfahrenMembranfilterverfahren
Cetrimidagar-NKS, Nachweis von Pseudomonas
0
5
10
15
20
25
30
35
40
1 2 3 4 5 6 7 8
Gruppennummer
Kei
me/
ml
BW (1 ml)
TW
Diagramm: Vergleich der Keimzahlen
AeromonasAeromonas
Charakterisierung und NachweisCharakterisierung und Nachweis
EinordnungEinordnung
Abteilung: Abteilung: ProteobacteriaProteobacteria Klasse: Klasse: DeltaproteobacteriaDeltaproteobacteria Ordnung:Ordnung: AeromonadalesAeromonadales Familie: Familie: AeromonadaceaeAeromonadaceae Gattung Gattung AeromonasAeromonas
MorphologieMorphologie
gramnegatives gramnegatives KurzstäbchenKurzstäbchen
monopolare, monotriche monopolare, monotriche BegeißelungBegeißelung
keine Sporenkeine Sporen
Abb. 2: REM-Bild von Aeromonas 2)
Abb. 1: Mikroskopisches Bild (1000x) 1)
KrankheitsbilderKrankheitsbilder
Abb. 3: verendeter Krebs 3)
Abb. 4: mit Aeromonas infizierter Fisch 4)
Abb. 5: Krankheitsbild von Aeromonas 2)
VorgehensweiseVorgehensweise
Beimpfung von Beimpfung von
Ampicillin-Dextrin-Medium zur AnreicherungAmpicillin-Dextrin-Medium zur Anreicherung bei Gelbfärbung bei Gelbfärbung Verdacht auf Aeromonas Verdacht auf Aeromonas verschiedene Verdünnungsstufen zur Prüfung verschiedene Verdünnungsstufen zur Prüfung
des Keimgehaltes von Gewässerndes Keimgehaltes von Gewässern
MPN-VerfahrenMPN-Verfahren
EL AL-KA BW BR ZL-PKA AL-PKA TS ZL-KA
MPN/ml 0,6 23 2,3 0,44 44 24 2,3 35000
LL 0,85 5 0,5 5 0,5 9100
UL 4,2 110 11 110 11 130000
Tab. 1: MPN-Werte
EL =Elbwasser AL-KA = Ablauf KläranlageBW = Badewasser BR = BrunnenwasserZL-PKA = Zulauf Pflanzenkläranlage AL-PKA = Ablauf Pflanzenkläranlage TS = Talsperrenwasser ZL-KA = Zulauf Kläranlafe
Graphische DarstellungGraphische Darstellung
MPN-Werte für Aeromonas
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
EL AL-KA BW BR ZL-PKA AL-PKA TS ZL-KA*e3
Wasserprobe
MP
N/m
l
Diagramm: MPN-Werte in Abhänigkeit der Wasserprobe
EinzelkolonienEinzelkolonien
Gelbfärbung der Gelbfärbung der BouillonBouillon
Überimpfung auf Überimpfung auf GSP-AgarGSP-Agar
gelbe Kolonien gelbe Kolonien BestätigungsreaktionenBestätigungsreaktionen
Abb. 6: mit Aeromonas bewachseneGSP-Agarplatte 5)
BestätigungstestsBestätigungstests
Lactoseverwertung Lactoseverwertung auf ENDO-Agar auf ENDO-Agar (positiv)(positiv)
Oxidasetest (positiv)Oxidasetest (positiv) Katalasetest (positiv)Katalasetest (positiv) Äsculinspaltung Äsculinspaltung
(positiv)(positiv) OF-Test (positiv)OF-Test (positiv) Voges-Proskauer Voges-Proskauer
(positiv)(positiv)Abb. 7: OF-Test mit Aeromonas 5)
API mit AeromonasAPI mit Aeromonas
Identifizierung von NichtenterobakteriaceenIdentifizierung von Nichtenterobakteriaceen Oxidase positiv Oxidase positiv api 20 NE api 20 NE Aeromonas hydrophila: 7577755Aeromonas hydrophila: 7577755
Abb. 8: ApiNE-Test 5)
LiteraturangabenLiteraturangaben1) http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/
cacnhomvikhuanchuyeu3.htm2) http://web.umr.edu/~microbio/BIO221_2004/ A_hydrophila.htm3) http://www.indian-ocean.org/bioinformatics/prawns/
GIF/DISEASE/Brownspo.htm4) http://www.practicalfishkeeping.co.uk/pfk/pages/
show_article.php?article_id=2635) eigene Fotos Dr. Münch (2007): „Praktikumsskript zum Wassermikrobiologischen
Praktikum Sommersemester“ Hans G. Schlegel (1992): „Allgemeine Mikrobiologie“, Georg Thieme Verlag,
Stuttgart