1

Dr. Ulrich Scheller

OCH2

OH

O

O

O

O - P = O

O - P = O

O - P = O

O

-

NukleinsäureNukleinsäureDesoxyriboseDesoxyribose

TriphosphatTriphosphat

Ein Nukleotid – Grundbaustein der DNA

23.01.2008Dr. Ulrich Scheller

Das menschliche Genom - Alphabetdes Lebens

Folie Nr. 2

DNA-Synthese: WDNA-Synthese: Wie werden Nukleotide miteinander verknüpft?

OCH2

OH

O

O

O

-

O - P = O

-

O - P = O

-

O - P = O

O

-

Base

OCH2

OH

O

O

O

O - P = O

O - P = O

O - P = O

O

Base

OH

O

O - P = O

O - P = O

O

O

OCH2

O

O

O

O - P = O

O - P = O

O - P = O

O

Base

OCH2

OH

O

O - P = O

Base

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Folie Nr. 3

Die Kette wächst!

DNA-Polymerase

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Folie Nr. 4

Didesoxynukleotid (ddNTP)

OCH2

OH

O

O

O

O - P = O

O - P = O

O - P = O

O

Base

Desoxynukleotid (dNTP)

DidesoxynukleotideDidesoxynukleotide: : Eine wichtige OH-Gruppe wird entfernt

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Folie Nr. 5

Einbauen von Fehlern: Einbauen von Fehlern: ddNTP‘s

OCH2

OH

O

O

O

O - P = O

O - P = O

O - P = O

O

BaseO

CH2

OH

O

O

O

O - P = O

O - P = O

O - P = O

O

Base

Keine Reaktion!!!Keine Reaktion!!!

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Folie Nr. 6

Eine Sequenzierung = 4 Ansätze Eine Sequenzierung = 4 Ansätze

Ansatz A Ansatz C Ansatz G

H

T

H

C

H

G

Ansatz T

DNAPrimer

Polymerase

DNAPrimer

Polymerase

DNAPrimer

Polymerase

DNAPrimer

Polymerase

2

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Folie Nr. 7

Die Synthesereaktion:Die Synthesereaktion: Eine Vorlage – viele verschiedene Produkte

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Folie Nr. 8

Fragmente verschiedener LängeFragmente verschiedener Länge –– a aber das Ende ist gleich!!!

GCGTAAGGCATAGAC

GC

GCGTAAGGC

GCGTAAG

GCGTAAGGCATAG

GCG

G

GCGTAAGGCATAGACG

GCGTAAGG

Ansatz C Ansatz TAnsatz GAnsatz A

GCGTAAGGCAT

GCGT

GCGTAAGGCATAGT

GCGTA

GCGTAA

GCGTAAGGCA

GCGTAAGGCATA

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Folie Nr. 9

Ansatz C Ansatz TAnsatz GAnsatz A

---------A

-----------A

--------------------A

------------------------A

-------------------------------C

---C

------------------C

-------------G

--------------------------G

-----G

G

---------------------------------G

----------------G

-----------------------------T

----------------------T

-------T

Fragmente verschiedener LängeFragmente verschiedener Längeaber das Ende ist gleich !!!Fragmente verschiedener LängeFragmente verschiedener Länge

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Folie Nr. 10

GelelektrophoreseGelelektrophorese: : Das Wirrwar wird geordnet

A C G T

+

-

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Folie Nr. 11

G

Die Sequenz wird gelesenDie Sequenz wird gelesen

+

-A C G T

CAGATACGGAATG

G

C

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Folie Nr. 12